李 弋 馬鳳巧 (南陽醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校，河南 南陽 473000)

阿爾茨海默病(AD)是最常見的一種慢性大腦退行性變性疾病。AD為老年期癡呆的主要類型，是繼心臟病、癌癥、中風(fēng)之后的第四位致死原因〔1〕，但迄今仍缺乏理想的治療藥物。中藥黃精有補(bǔ)中益氣，除風(fēng)祛濕，安五臟延年等作用。黃精是否能預(yù)防AD尚完定論。因此，本實(shí)驗(yàn)采用D-半乳糖皮下注射建立AD大鼠模型〔2，3〕，觀察黃精對AD大鼠海馬組織形態(tài)學(xué)的影響，從而為黃精改善AD的癥狀提供更有力的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)儀器 恒冷切片機(jī)(America AO);手術(shù)器械:血管鉗、組織剪、有齒鑷子、無齒鑷子、眼科剪;雙面剃須刀片，上海吉利有限公司;BM-Ⅷ生物組織包埋機(jī);DMR+Q550型病理圖像分析系統(tǒng)。

1.2 藥品與試劑 黃精購于河南省南陽市醫(yī)藥公司，產(chǎn)地河北省;D-半乳糖購于上海試劑二廠，批號20070801;10%甲醛溶液，蒸餾水，丙酮，乙醇，二甲苯，伊紅，蘇木素由南陽醫(yī)專病理科提供。

1.3 動物方法 雄性健康SD大鼠40只，3～4月齡，體重(200±20)g，由河南醫(yī)學(xué)動物實(shí)驗(yàn)中心提供，標(biāo)準(zhǔn)鼠飼料常規(guī)飼養(yǎng)，隨機(jī)分為4組(每組10只)，即空白對照組、模型組、黃精低劑量組、黃精高劑量組。模型組、黃精低劑量組、黃精高劑量組每天用3%D-半乳糖生理鹽水溶液按150 mg·kg－1·d－1頸背部皮下注射6 w，空白對照組皮下注射等量的生理鹽水對照;同時(shí)黃精高、低劑量組分別給予黃精水煎劑按24、8 g·kg－1·d－1灌胃，模型組和空白對照組給予 24 g·kg－1·d－1的生理鹽水灌胃6 w。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后將大鼠斷頭處死，在低溫冰盤上取出大鼠的海馬，用10%甲醛溶液固定后，標(biāo)本經(jīng)沖洗、脫水、透化、浸蠟、包埋、切片、貼片、烤片、脫蠟、脫苯、HE染色、脫水、石蠟、中性樹膠封固，制成海馬組織的石蠟切片，在光學(xué)顯微鏡下觀察海馬CA1區(qū)神經(jīng)元的數(shù)目及形態(tài)結(jié)構(gòu)的變化。

2 結(jié)果

空白對照組海馬CA1區(qū)錐體細(xì)胞有3～4層，層次清楚，排列整齊緊密，染色均勻。細(xì)胞呈圓形或橢圓形，形態(tài)結(jié)構(gòu)完整，核仁清晰。模型組錐體細(xì)胞層次變薄，為1～3層，細(xì)胞排列稀疏紊亂，細(xì)胞數(shù)量少，個(gè)別細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則，胞體縮小，胞漿深染濃縮，核固縮，灶性區(qū)域可見炎細(xì)胞浸潤。黃精低劑量組海馬錐體細(xì)胞層數(shù)減少，細(xì)胞疏松，胞質(zhì)濃染，但較模型組排列較為整齊，細(xì)胞數(shù)量和模型組無明顯差異。黃精高劑量組海馬錐體細(xì)胞排列為3～4層，層次清楚，細(xì)胞數(shù)量較模型組、低劑量組明顯增多，排列較緊密，著色均勻，胞漿深染的神經(jīng)細(xì)胞少見。見圖1。

圖1 各組海馬CA1區(qū)錐體細(xì)胞形態(tài)(HE，×400)

3 討論

神經(jīng)元內(nèi)老年斑(SP)的形成、神經(jīng)原纖維的纏結(jié)(NET)以及神經(jīng)細(xì)胞凋亡所致神經(jīng)元的廣泛丟失是AD特征性病理改變〔4〕，細(xì)胞的凋亡可能在AD的發(fā)病機(jī)制中具有重要作用〔5〕，海馬結(jié)構(gòu)中與學(xué)習(xí)記憶關(guān)系最為密切的是CA1功能區(qū)，是學(xué)習(xí)和記憶的高級中樞。本研究說明大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元的大量凋亡和丟失可能是AD的病理基礎(chǔ)，應(yīng)用黃精干預(yù)后，錐體細(xì)胞層次較模型組有所增多，層次清楚，排列整齊緊密，細(xì)胞呈圓形或橢圓形，結(jié)構(gòu)完整，核仁清晰，細(xì)胞染色均勻，可以推測:黃精可有效地保護(hù)海馬CA1區(qū)的神經(jīng)細(xì)胞，減少神經(jīng)元的大量凋亡與丟失，從而改善AD大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力。這一結(jié)果為老年人進(jìn)行早期干預(yù)保健、以減少海馬神經(jīng)元凋亡丟失，最大限度保護(hù)腦功能，以預(yù)防AD的發(fā)生提供了可靠的理論依據(jù)，本研究從神經(jīng)系統(tǒng)的病理學(xué)角度，證實(shí)了黃精對AD大鼠海馬組織CA1區(qū)的形態(tài)學(xué)有顯著的改善作用，黃精作為一種對AD的治療手段，為AD防治開辟了新的途徑，并為臨床進(jìn)一步推廣“黃精治療AD”提供的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 陳可冀.老年性癡呆基礎(chǔ)和臨床研究進(jìn)展思考〔M〕.北京:北京醫(yī)科大學(xué)中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)聯(lián)合出版社，1998:1-5.

2 趙 鵬，楊玉英.半乳糖制備亞急性衰老動物模型的可行性〔J〕.中國食品衛(wèi)生雜志，1999;11(1):52.

3 朱亞珍，朱虹光.D-半乳糖致衰老動物模型的建立及其檢測方法〔J〕.復(fù)旦學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)，2007;34(4):617-9.

4 Bird TD.Genetic factors in Alzheimer's disease〔J〕.N Engl Med，2005;352:862-4.

5 Fang M，Li J，Tiu SC，et al.N methyl D aspartate receptor and apoptosis in Alzheimer's disease and multiinfarct dementia〔J〕.J Neurosci Res，2005;81(2):269-74.