李改蓮

(內(nèi)蒙古自治區(qū)中醫(yī)醫(yī)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010020)

本品主要由寒水石、紫草、土木香、梔子、瞿麥、石膏、甘草、牛黃等8味藥材組成。有清血熱作用。用于血熱頭痛、口渴目赤。本品收載衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)蒙成分冊(cè)［1］，標(biāo)準(zhǔn)中無含量測(cè)定指標(biāo)。本文以甘草中甘草酸成分為指標(biāo)，建立HPLC法的相對(duì)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

1 儀器、試劑及樣品

儀器:1100型高效液相色譜儀(安捷倫)。NC－2000型色譜工作站(大連中北通用)。PL202－S/00型電子天平(上海梅特勒一托利多集團(tuán));M4821超聲處理儀(上海昆山)。

試劑與樣品:甲醇為色譜純，其它為分析純?cè)噭８什菟釂武@鹽(0731－9704)，含量98．7%，由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供。清血八味散(批號(hào)20030505，20030510，2003051)由內(nèi)蒙古中蒙醫(yī)研究所藥物研究室制備。

2 方法與結(jié)果

2．1 色譜條件:色譜柱填充劑為十八烷基硅烷鍵合硅膠翡納米柱(200×4．6mm，5μm)。甘草酸流動(dòng)相:甲醇 －0．2mol乙酸銨－冰乙酸(310:190:5)，檢測(cè)波長(zhǎng)250nm，流量1mL·min－1，柱溫℃。

2．2 測(cè)定溶液的制備與測(cè)定

2．2．1 對(duì)照品溶液的制備與測(cè)定:精密量取對(duì)照品甘草酸1．12mg，置10mL容量瓶?jī)?nèi)，加甲醇溶解至刻度，為A溶液，精密吸A溶液1mL置10mL量瓶?jī)?nèi)為B溶液，吸取A溶液8、6、4、2μL，B 溶液6、4、2、1μL 按色譜條件測(cè)定峰面積，以峰面積積分值為縱坐標(biāo)，對(duì)照品含量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，作回歸分析?；貧w方程:Y=1355919x－713，r=0．9996。甘草酸在0．0672～0．896μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。2．2．2 供試品溶液的制備:取本品，細(xì)研，過100目篩，精密稱重0．15g，置10mL量瓶?jī)?nèi)，加甲醇至刻度，樣品溶液轉(zhuǎn)移至50mL具塞錐形瓶中，稱定重量，超聲處理(功率100W，頻率40kHz)40min，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，靜止，微孔濾膜過濾(0．45μm)，即的。

2．2．3 陰性試驗(yàn):依照樣品制備方法制備不含甘草的清血八味散陰性制劑，依照色譜條件測(cè)定，陰性對(duì)照品在甘草酸保留時(shí)間內(nèi)無干擾峰出現(xiàn)。

2．3 精密度試驗(yàn):精密吸取同一供試品溶液10μL，連續(xù)進(jìn)樣5次，測(cè)定甘草酸峰面積積分值，峰面積積分值RSD=0．46%，符合測(cè)定要求。

2．4 重復(fù)性試驗(yàn):取同批次樣品，按2．2．2項(xiàng)下的方法制備樣品5份。測(cè)定結(jié)果，甘草酸平均含量為0．40mg·g－1，RSD 為1．2%。

2．5 穩(wěn)定性試驗(yàn):取同一供試品溶液4μL，分別于樣品制備后第0、2、8、12h測(cè)定甘草酸峰面積，峰面積值 RSD=0．6%。樣品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定。

2．6 回收率試驗(yàn):精密稱取6份同批號(hào)樣品各0．1g，分置10mL 量瓶?jī)?nèi)，加．3mL(0．112mgμmL－1)標(biāo)準(zhǔn)品溶液，加甲醇至刻度。其余按2．2．2項(xiàng)下的方法制備樣品，取續(xù)濾液10μL，照色譜條件測(cè)定。測(cè)定結(jié)果表明，平均回收率為102．6%，RSD=2．6

表1 樣品甘草酸加樣回收率測(cè)定

3 樣品測(cè)定

分別吸取對(duì)照品溶液與樣品溶液10μL，依上述色譜條件測(cè)定批樣中甘草酸含量，3批樣品，20030510，20030515 甘草酸的含量分別為．40、0．42、0．41mg·g－1，平均含量分別為．41mg·g－1。

4 小結(jié)

采用HPLC法測(cè)定清血八味散中甘草酸的含量，操作簡(jiǎn)便，準(zhǔn)確可靠，可用于制定該藥品的質(zhì)量控制指標(biāo)之一。

［1］國(guó)家藥典委員會(huì)編輯．衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)－蒙藥分冊(cè)［S］．1998，165

［2］國(guó)家藥典委員會(huì)．中國(guó)藥典［S］．一部．北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010，80