肖曉玲 黃文英 吳 韜

（江西師范大學(xué)體育學(xué)院，江西 南昌 330022）

香煙在燃燒時(shí)，其中煙葉燃燒溫度可高至900多度，此時(shí)煙葉、煙紙以及空氣中的許多成分發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，生成新的化學(xué)物質(zhì)。據(jù)研究, 1支煙可產(chǎn)生106個(gè)自由基[1]。在機(jī)體正常情況下，體內(nèi)的自由基處于不斷產(chǎn)生與清除的動(dòng)態(tài)平衡中，當(dāng)自由基產(chǎn)生過多或清除過慢時(shí)，會(huì)攻擊生物大分子物質(zhì)及各種細(xì)胞器，造成機(jī)體在分子水平、細(xì)胞水平及組織器官水平上的各種損傷[2-3]。氧化應(yīng)激在被動(dòng)吸煙導(dǎo)致的各類疾病中逐漸得到重視。氧化應(yīng)激是指體內(nèi)活性氧（ROS）產(chǎn)生和抗氧化系統(tǒng)體系之間失衡，導(dǎo)致組織損傷的一種狀態(tài)[4]。因此，如何有效延緩氧化應(yīng)激的發(fā)生，進(jìn)而防治由于被動(dòng)吸煙而導(dǎo)致自由基產(chǎn)生的氧化應(yīng)激成為熱門話題。

火木針層孔菌，在中國(guó)傳統(tǒng)上被稱為桑黃，主要分布在我國(guó)西北、東北和西南等地區(qū)，它是一種多年生珍稀 藥用真菌，屬擔(dān)子菌綱，多孔菌目，多層孔菌科，多孔菌屬，是珍稀藥用真菌，國(guó)內(nèi)現(xiàn)有報(bào)道的共有7個(gè)種，具有增強(qiáng)免疫、抗氧化、抗菌、消炎，護(hù)肝等藥理活性，它是一種高效、無副作用的抗氧化劑[5-8]。而外源性補(bǔ)充桑黃粗多糖對(duì)機(jī)體被動(dòng)吸煙后肝臟抗氧化能力的研究尚未報(bào)道，因此，本研究將針對(duì)桑黃粗多糖作為抗氧化劑在機(jī)體內(nèi)清除由于被動(dòng)吸煙導(dǎo)致的氧化應(yīng)激進(jìn)行研究與探討，為臨床應(yīng)用提供深入的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)分組及處理因素

1月齡健康雄性昆明小鼠28只，先適應(yīng)性飼養(yǎng)一周，隨機(jī)分為補(bǔ)藥被動(dòng)吸煙組（A，n=7)、補(bǔ)藥組(B，n=7)、被動(dòng)吸煙組(C，n=7)、安靜組(D，n=7)。國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)嚙齒類動(dòng)物飼料喂養(yǎng)，生活期間室溫保持20-23℃，相對(duì)濕度45-55%，自然光照，隔天采用熏醋的方法進(jìn)行空氣消毒，熏醋時(shí)間為30分鐘/次。每天早 7:00 通風(fēng)換氣，查看室內(nèi)溫度，清理鼠籠（每隔2天用酒精擦洗一次），清除糞便、墊干木屑，檢查昆明小鼠健康狀況，稱量前一天每組小鼠的攝食量及飲水量，并記錄，換上新鼠糧及飲用水，剩料集中處理，每天飼喂都是定時(shí)定量的，由小鼠實(shí)驗(yàn)過程中自由攝取。

1.2 研究方法

1.2.1 文獻(xiàn)資料法

網(wǎng)絡(luò)檢索www.google.com，中國(guó)學(xué)術(shù)期刊網(wǎng)www.cd.cnki.net，含“中國(guó)優(yōu)秀博碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫”、“中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫”、“中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫”等，檢索、搜集、查閱大量補(bǔ)劑、被動(dòng)吸煙相關(guān)文獻(xiàn)和學(xué)術(shù)論文，并對(duì)其進(jìn)行仔細(xì)閱讀，科學(xué)地分析，認(rèn)真地研究探討。

1.2.2 實(shí)驗(yàn)法

（1）被動(dòng)吸煙方案

將A、C組分別置于自制半密閉玻璃箱中，采取靜式吸煙方式，將香煙點(diǎn)燃后，迅速把煙頭部分放入自制通氣管道管口處，以保證香煙煙霧第一時(shí)間進(jìn)入吸煙缸，同時(shí)把一注射器（無針頭）插入煙蒂中，反復(fù)推拉，使香煙充分燃盡。燃燒香煙(江西某煙廠生產(chǎn)過濾嘴香煙)，焦油量 10mg/支、煙堿量 0.8mg/支、一氧化碳量 14mg/支。被動(dòng)吸煙晚上7:00進(jìn)行，每支煙燃燒5分鐘，每隔15分鐘點(diǎn)煙一次，每天2支，每周6天，共持續(xù)2周。煙箱規(guī)格為60cm×40cm×40cm，其側(cè)面有一活動(dòng)門能留有空隙。在被動(dòng)吸煙過程中，染毒柜的側(cè)面與外界相通，以防止吸煙過程中所產(chǎn)生的病理性缺氧病變。

（2）補(bǔ)藥方案

A、B組采用灌胃的方法。桑黃煎液和乙醇浸提液合并,濃縮、干燥得固體提取物.實(shí)驗(yàn)組小鼠每天灌胃一次，一次灌胃體積在100mg/kg體重，每周6天，共2周，其中星期三休息, 休息日小鼠在鼠籠中自由活動(dòng)。

（3）取材及指標(biāo)測(cè)試

各組小鼠摘眼球處死后即刻提取肝臟，取組織進(jìn)行10%勻漿制備，再用普通離心機(jī)或低溫離低速離心機(jī)2000r/min左右離心 10-15分鐘，將離心好的勻漿留上清棄下面沉淀備用，最后取上清液根據(jù)各指標(biāo)要求進(jìn)行 SOD、CAT、GSH、GSH-PX酶活性檢測(cè)。試劑盒購(gòu)于南京建成生物工程研究所。測(cè)試所涉及的儀器有:自制被動(dòng)吸煙箱、半自動(dòng)生化分析儀（意大利產(chǎn)）、HH—8 數(shù)顯恒溫水浴鍋（國(guó)華電器有限公司）、低速大容量離心機(jī)（Centenfuge TDL—5）、CS202B 型電熱保溫干燥箱（重慶試驗(yàn)設(shè)備廠）。

1.2.3 數(shù)理統(tǒng)計(jì)法

所有數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行方差分析。

2 結(jié)果

桑黃粗多糖對(duì)被動(dòng)吸煙小鼠肝組織 CAT、GSH、GSH-PX以及SOD酶活性的影響:最后一次補(bǔ)藥與被動(dòng)吸煙后，小鼠摘眼球處死，打開胸腔，取肝臟。用相應(yīng)試劑盒檢測(cè)CAT、GSH、GSH-PX以及SOD活性，結(jié)果見表1。

表1 肝組織CAT、GSH、GSH-PX以及SOD變化情況

表1結(jié)果表明，與D組相較，B組昆明小鼠肝臟組織CAT酶活性明顯增加，具有顯著性差異（P＜0.05）；與A組相較，B、C組酶活性變化顯著（P＜0.05）；與B組相較，C組酶活性急劇降低，具有非常顯著性差異(P＜0.01)。對(duì)于GSH來說，與D組相較，A組酶活性明顯降低(P＜0.05)；與A相較，B組酶活性明顯增加，具有顯著性差異(P＜0.05)，但GSH-PX酶活性，各組次沒有差異（P＞0.05）。SOD酶活性，與B組相較，C組顯著降低(P＜0.05)。

3 分析與討論

肝臟是機(jī)體內(nèi)含酶量最多的組織器官，不同種類的酶在肝臟的不同區(qū)域、不同結(jié)構(gòu)內(nèi)所存在的濃度不一樣，它的分子量以及代謝率也是不同的。真菌多糖在清除自由基方面有良好的功效，有學(xué)者從桑黃中提取多糖，發(fā)現(xiàn)其能夠減少血液中 MDA含量，同時(shí)增加血清中SOD、GSH-PX的活力[9-10]。韓國(guó)學(xué)者Ajith,T.A[ 11]等,通過研究桑黃乙酸乙酯浸提物的抗氧化作用, 結(jié)果表明桑黃對(duì)超氧陰離子的清除、抗壞血酸引起油脂氧化的抑制、過氧化物和一氧化氮的清除有很好的效果。閆景坤[12]等人通過體外抗氧化模型，發(fā)現(xiàn)桑黃菌胞內(nèi)多糖均能較好的清除·OH、O2-和螯合 Fe2+，且對(duì)O2-·具有明顯的清除作用.李宜明[13]等對(duì)小鼠血清和肝組織中超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA) 質(zhì)量分?jǐn)?shù)的影響，同時(shí)，抗氧化實(shí)驗(yàn)表明, 桑黃菌質(zhì)多糖可明顯提高小鼠血清和肝組織SOD活性,降低MDA質(zhì)量分?jǐn)?shù), 具有抗脂質(zhì)過氧化的作用。通過觀察抗氧化劑與被動(dòng)吸煙雙重干預(yù)下昆明小鼠肝臟組織氧化應(yīng)激的影響，結(jié)果顯示，四組中B組的CAT酶活性明顯高于D組(P＜0.05)，其余組次酶活性變化明顯，尤其是B組顯著高于其他組次，與C組相較時(shí)差異非常顯著(P＜0.01)；A組中GSH酶活性明顯低于D組(P＜0.05)；B、C組SOD酶活性差異明顯(P＜0.05)；GSH-PX酶活性四組間沒有顯著性差異。由此可見，被動(dòng)吸煙導(dǎo)致氧化應(yīng)激的發(fā)生，而桑黃粗多糖等外源性補(bǔ)劑可以增強(qiáng)抗氧化酶活性對(duì)自由基清除能力，減少對(duì)機(jī)體氧化應(yīng)激的損傷程度。

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