瞿紹明劉仲華劉 揚(yáng)

QU Shao－ming1，2 LIU Zhong－h(huán)ua1，2 LIU Yang1，2

（1.國(guó)家植物功能成分利用工程技術(shù)研究中心，湖南 長(zhǎng)沙 410128；2.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)茶學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，湖南 長(zhǎng)沙 410128）

大量研究［1－5］表明茶葉具有減肥、降血壓、降血糖、降血脂、抗氧化等多種保健功效。茯磚茶和紅茶同屬發(fā)酵茶，近年來越來越受到人們的喜愛。茯磚茶是湖南主產(chǎn)的一種黑茶，在加工過程中其兒茶素、黃酮類及茶多酚的含量有一定的降低［6］，但其降血脂、抗氧化、減肥的功效依舊明顯，能降低高脂血癥大鼠血清TC、TG的含量［7］。茶多酚具有很強(qiáng)的抗氧化性［8，9］，紅茶中茶多酚的含量較高。酒精性肝損傷屬于臨床中常見的肝臟疾病，是由于長(zhǎng)期飲酒而導(dǎo)致的肝臟損傷疾病，包括酒精性脂肪肝、酒精性肝炎、酒精性肝纖維化、酒精性肝硬化，這幾種形式可以單獨(dú)存在也可以同時(shí)存在［10，11］。酒精對(duì)肝臟的長(zhǎng)期作用可導(dǎo)致肝細(xì)胞內(nèi)的脂質(zhì)代謝紊亂，造成肝臟脂質(zhì)積累［12］。ALT、AST、TC、TG廣泛存在于肝細(xì)胞中，當(dāng)肝細(xì)胞受損時(shí)，血清中ALT、AST、TC、TG的含量就會(huì)升高，肝臟受損傷的程度常用ALT、AST、TC、TG的含量來衡量。本實(shí)驗(yàn)室之前對(duì)茯磚茶的降脂減肥功能進(jìn)行了一系列的研究［13－15］，但目前茶對(duì)酒精性肝病的保護(hù)作用研究報(bào)道還比較少。本研究擬通過對(duì)茯磚茶提取物和速溶紅茶提取物對(duì)試驗(yàn)小鼠谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH－Px）、丙二醛（MDA）、肝系數(shù)等指標(biāo)的影響，探究茯磚茶和紅茶對(duì)酒精致小鼠肝損傷的保護(hù)作用效果并比較其保護(hù)作用，旨在為茯磚茶和速溶紅茶的進(jìn)一步開發(fā)和利用提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 儀器

全自動(dòng)生化分析儀：TBA－40FR型，日本株式會(huì)式三廣醫(yī)療公司；

全波長(zhǎng)多功能酶標(biāo)儀：Thermo VARIOSKAN FLASH型，美國(guó)Thermo Scientific公司；

超低溫冰箱：NU－6613w35型，美國(guó)Nuaire Receo公司；

電子天平：PB302－N型，瑞士 Mettler Toledo公司；

高速冷凍離心機(jī)：MIKRO.22R型，德國(guó)Hettich公司。

1.2 試劑材料

白酒：55%（V／V），吉林東北坊酒業(yè)有限公司；

茯磚茶提取物、紅茶提取物（速溶紅茶）：長(zhǎng)沙飛拓植物制品有限公司；

凱西萊：河南省新誼制藥；

ALT、AST、TC、TG、GSH－Px、SOD、MDA 檢測(cè)試劑盒：南京建成生物工程研究室；

喂養(yǎng)試驗(yàn)小鼠的基礎(chǔ)飼料：湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司。

1.3 動(dòng)物試驗(yàn)

1.3.1 試驗(yàn)動(dòng)物 SPF級(jí)昆明小鼠，雄性，體質(zhì)量28～32g，由湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供，衛(wèi)生許可證號(hào)：SCXK（湘）2009－0003。

1.3.2 灌胃造模劑量 灌胃劑量設(shè)定：茶葉的成人（按60kg標(biāo)準(zhǔn)）推薦劑量為9.0g／d，折合為每千克體重劑量為0.15g／kg，本研究選擇人體推薦劑量的一定倍數(shù)為給藥劑量，設(shè)定試驗(yàn)所用低濃度劑量為70mg／kg，中濃度劑量為140mg／kg，高濃度劑量為280mg／kg，凱西萊陽(yáng)性對(duì)照組為60mg／kg劑量。每只小鼠的不同劑量的茯磚茶和紅茶提取物的灌胃體積均為0.5mL／d。

1.3.3 動(dòng)物分組與處理 根據(jù)前期確定的劑量標(biāo)準(zhǔn)和灌胃時(shí)間情況90只小鼠在室溫19～26℃，光照12h／d及相對(duì)濕度45%～70%的環(huán)境下飼養(yǎng)，5d后隨機(jī)分成9組，每組10只，首次稱重并開始進(jìn)行造模試驗(yàn)，以后每隔5d稱量1次體重，觀察外形及毛色，分組的9組試驗(yàn)組別分別為正常組、模型組、陽(yáng)性對(duì)照組、茯磚茶低劑量組、茯磚茶中劑量組、茯磚茶高劑量組、紅茶低劑量組、紅茶中劑量組、紅茶高劑量組，試驗(yàn)前15d陽(yáng)性組、茯磚茶和紅茶各劑量組每次灌胃設(shè)定濃度的試劑，正常組和模型組灌胃等量的蒸餾水，15d后先進(jìn)行前面相同的灌胃處理，1h候后，模型組，陽(yáng)性對(duì)照組和各給藥組用55%（V／V）的東北坊白酒灌胃，灌胃體積為0.4mL／d，正常對(duì)照組灌胃等量的蒸餾水。灌胃2周，定期稱量體重。

1.3.4 測(cè)定指標(biāo) 末次灌胃12h后，禁食不禁水，12h后摘眼球取血，血液于4℃以2 000r／min離心10min，分離血清，取上清測(cè)定AST、ALT、TC、TC。采血后，迅速斷頸處死小鼠，解剖小鼠，觀察肝臟，稱量總肝臟重量，計(jì)算肝系數(shù)，取肝臟右葉，常規(guī)制取肝勻漿測(cè)定SOD、GSH－Px、MDA，血清ALT、AST、TC、TG，按照試劑盒要求進(jìn)行測(cè)定，肝臟SOD、GSH－Px、MDA按照試劑盒進(jìn)行測(cè)定。

1.4 數(shù)據(jù)處理與分析

所有試驗(yàn)數(shù)據(jù)利用 EXCEL 2007和SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)及方差分析，結(jié)果計(jì)數(shù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，組間差異及特性比較采用LSD法。

2 結(jié)果與分析

2.1 對(duì)酒精性肝損傷小鼠體重的影響

圖1為各組試驗(yàn)小鼠體重變化的情況。各試驗(yàn)組小鼠在試驗(yàn)過程中體重總體呈上升趨勢(shì)，其中正常組小鼠體重增長(zhǎng)最明顯，其次為模型組和陽(yáng)性對(duì)照組，給藥試驗(yàn)組中，各組別小鼠體重變化有明顯區(qū)別，從一開始灌胃造模，小鼠的體重增長(zhǎng)就顯示出明顯不同，從低、中、高劑量組增長(zhǎng)速度依次變緩，其中茯磚茶低劑量組、紅茶低劑量組小鼠體重增長(zhǎng)和正常組相比緩慢，茯磚茶中劑量組、紅茶中劑量組次之，茯磚茶高劑量組、紅茶高劑量組最緩慢，這說明茯磚茶和紅茶有抑制小鼠體重增長(zhǎng)的效果，并且這種效果不是由于食物的原因引起的。灌胃15d后，試驗(yàn)小鼠增加灌胃酒精造模后，除未灌胃酒精的正常組外，其他灌胃酒精的試驗(yàn)組，體重都呈一定量的減輕情況，茯磚茶高劑量組、紅茶高劑量組減輕的最明顯，茯磚茶中劑量組、紅茶中劑量組次之，茯磚茶低劑量組、紅茶低劑量組變化更弱，而陽(yáng)性對(duì)照和模型組的變化最弱，說明酒精的攝入一定程度上導(dǎo)致了小鼠體重的減小。結(jié)合表2，與模型組比較茯磚茶紅茶各劑量組均能明顯降低小鼠肝系數(shù)（P＜0.01），表明各劑量組小鼠體重變化情況與小鼠肝系數(shù)、肝臟受損程度有一定關(guān)系。

圖1 各組試驗(yàn)小鼠體重變化情況Figure 1 Different groups of mice weight changes

2.2 對(duì)酒精性肝損傷小鼠血清AST、ALT、TC、TG的影響

試驗(yàn)結(jié)果表明（見表1），與正常組比較，模型組小鼠血清AST、ALT、TC、TG均顯著性增高（P＜0.01），與模型組比較，茯磚茶、紅茶、陽(yáng)性對(duì)照組在一定程度上都能明顯降低小鼠血清AST、ALT、TC、TG的含量，其中茯磚茶低、中劑量組，紅茶高劑量組對(duì)ALT的降低作用極其明顯（P＜0.01），茯磚茶高劑量組、紅茶高劑量組中ALT的含量與模型組比較有顯著性降低（P＜0.05）；茯磚茶高、中劑量組，紅茶高劑量組對(duì)AST的降低作用明顯（P＜0.01）；茯磚茶高、中劑量組對(duì)TC的降低作用明顯（P＜0.01），紅茶高劑量組中TC的含量比模型組明顯的低（P＜0.05）；茯磚茶高，中劑量組對(duì)TG的降低作用明顯（P＜0.01），紅茶高、中劑量組中TG的含量明顯降低（P＜0.05）。

表1 造模期各組小鼠血清AST、ALT、TC、TG的比較?Table 1 AST，ALT，TC and TG of each group in the period of model building ／（mmol·L－1）

2.3 對(duì)酒精性肝損傷小鼠肝臟SOD、GSH－Px、MDA和肝系數(shù)的影響

試驗(yàn)結(jié)果表明（見表2），與正常組比較，模型組小鼠肝臟中SOD和GSH－Px的含量顯著性降低（P＜0.01），MDA和肝臟系數(shù)均含量顯著升高（P＜0.01），與模型組比較，茯磚茶、紅茶、陽(yáng)性藥組在一定程度上均能降低小鼠肝臟MDA的含量和肝臟系數(shù)，升高SOD和GSH－Px的含量。紅茶高劑量組對(duì)SOD和GSH－Px的含量的升高作用極其明顯（P＜0.01），茯磚茶高劑量組、紅茶中劑量組與模型組比較SOD和GSH－Px的含量顯著升高（P＜0.05）；茯磚茶高劑量 MDA的含量有顯著的降低（P＜0.01），紅茶高、中劑量組對(duì) MDA的含量降低作用明顯（P＜0.05）；茯磚茶與紅茶各劑量組對(duì)肝臟系數(shù)的降低作用明顯（P＜0.01）。

表2 造模期各組小鼠肝臟SOD、GSH－Px、MDA和肝系數(shù)的比較?Table 2 SOD、GSH－Px、MDA and liver index in the liver of each group in the period of model building

3 討論

酒精進(jìn)入人體內(nèi)后，其轉(zhuǎn)移路徑除了少部分經(jīng)肺、腎排出體外，大部分在肝臟中代謝，酒精在機(jī)體內(nèi)的代謝途徑主要有：① 微粒體乙醇氧化體系（MEOS）；② 乙醇脫氫酶（ADH）乙醇氧化體系；③ 黃嘌呤氧化酶－過氧化氫酶體系；④NADPH氧化酶－過氧化氫體系。其中前兩種途徑為最主要代謝途徑［16］。酒精性肝病的發(fā)病機(jī)理情況還比較復(fù)雜，目前最廣泛接受的是Day和James提出的酒精性肝病和非酒精性脂肪性肝病共同存在作用的“二次打擊”機(jī)制學(xué)說［17］，該學(xué)說指出對(duì)酒精性肝病的形成起重要作用的因素有脂質(zhì)過氧化、氧化應(yīng)激和多種炎癥細(xì)胞因子的釋放等。

酒精性肝損傷的發(fā)病機(jī)制與許多因素有關(guān)，一方面是與酒精代謝相關(guān)的酶如ALDH、ADH、CYUP2E1有關(guān)，另一方面是氧化應(yīng)激因子、信號(hào)傳導(dǎo)關(guān)鍵核因子及內(nèi)毒素水平等，氧化應(yīng)激及脂質(zhì)過氧化受阻在酒精性肝損傷的過程中作用明顯［18］，SOD和GSH－Px是機(jī)體內(nèi)重要的抗氧化的物質(zhì)，能夠清除代謝產(chǎn)生的大量自由基，保護(hù)肝臟。MDA是脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的終產(chǎn)物，其含量的高低能在一定程度上反應(yīng)肝臟受損的情況，酒精肝損傷與肝臟內(nèi)脂質(zhì)代謝紊亂密不可分［19］。本研究結(jié)果顯示紅茶高劑量組對(duì)SOD和GSH－Px的含量的升高作用非常明顯（P＜0.01），茯磚茶高劑量組、紅茶中劑量組與模型組比較SOD和GSH－Px的含量顯著升高（P＜0.05）；茯磚茶高劑量 MDA的含量有顯著的降低（P＜0.01）。茯磚茶和紅茶具有明顯的抗氧化，清除體內(nèi)自由基的作用。

4 結(jié)論

茯磚茶和紅茶在一定程度上都能明顯降低小鼠血清AST、ALT、TC、TG的含量，也能明顯提高小鼠肝細(xì)胞SOD和GSH－Px的活性，降低MDA的含量，對(duì)小鼠的肝臟起到了良好的防護(hù)作用。茯磚茶和紅茶各劑量組小鼠體重明顯比其他組別的小鼠體重輕，說明茯磚茶和紅茶有明顯的降脂減肥功能，各試驗(yàn)組的小鼠肝系數(shù)明顯比模型組小，表明茯磚茶和紅茶對(duì)小鼠的肝臟物質(zhì)代謝有明顯的促進(jìn)作用。本試驗(yàn)結(jié)果也表明茯磚茶和紅茶具有明顯的抗氧化功能，對(duì)肝功能的各項(xiàng)指標(biāo)有改善作用，對(duì)小鼠酒精性肝損傷都有明顯的防護(hù)作用，但是茯磚茶和紅茶對(duì)酒精性肝損傷的保護(hù)作用效果差別不大。

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