陳麗艷 脫 晉 郭秀娟

遼寧省大連市婦產(chǎn)醫(yī)院急診科，遼寧大連 116033

子宮內(nèi)膜癌（endometrial carcinoma）是女性生殖系統(tǒng)常見(jiàn)的惡性腫瘤，自生育年齡至絕經(jīng)后均可發(fā)生，發(fā)病高峰在50～69歲，近年來(lái)其發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)，但其發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明[1]。子宮內(nèi)膜增生癥包括單純?cè)錾?、?fù)雜性增生及非典型增生，其與內(nèi)膜癌的發(fā)生關(guān)系密切。環(huán)氧化酶-2（Cyclooxygenase-2，COX-2）屬于誘導(dǎo)型基因，一般只在誘導(dǎo)因子的作用下表達(dá)上調(diào)。大量研究證明血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞有促進(jìn)有絲分裂作用，并有促進(jìn)血管增生的能力。本研究通過(guò)檢測(cè)COX-2與VEGF在子宮內(nèi)膜增生癥及子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)，探討二者在子宮內(nèi)膜癌發(fā)生、發(fā)展中的作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2008年1月1日～2011年9月1日大連市婦產(chǎn)醫(yī)院術(shù)后病理診斷為子宮內(nèi)膜癌的100例患者為研究對(duì)象。 患者年齡 28～75 歲，平均（53.1±7.4）歲；所有患者術(shù)前均未行化療、放療及內(nèi)分泌治療。取同時(shí)期子宮內(nèi)膜增生癥患者標(biāo)本90例為子宮內(nèi)膜增生癥組，其中單純性增生30例，復(fù)雜性增30例，不典型增生30例，患者年齡29～63歲，平均（51.3±8.2）歲。并取同時(shí)期因其他原因行全子宮切除術(shù)獲得的正常子宮內(nèi)膜增生期標(biāo)本30例作為對(duì)照組，年齡 45～65 歲，平均（55.2±4.5）歲。

1.2 主要試劑

鼠抗人COX-2單克隆抗體，鼠抗人VEGF單克隆抗體，PV9000 Immuno-Bridge+二步法免疫組化試劑盒及3，3'-二氨基聯(lián)苯胺顯色劑（DAB），以上試劑購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

每例標(biāo)本經(jīng)常規(guī)甲醛溶液固定，石蠟包埋，連續(xù)組織切片成4 μm厚，按SP法試劑盒說(shuō)明進(jìn)行免疫組化染色。

1.4 結(jié)果判定

COX-2與VEGF免疫反應(yīng)陽(yáng)性物質(zhì)主要位于細(xì)胞漿，呈棕黃色至棕褐色顆粒為陽(yáng)性細(xì)胞，細(xì)胞無(wú)陽(yáng)性反應(yīng)為陰性。陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)數(shù)采用高倍鏡（400×）下對(duì)每張切片隨機(jī)選擇5個(gè)視野，計(jì)數(shù)200個(gè)細(xì)胞/視野，共計(jì)1 000個(gè)以百分率表示，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)＜1%為陰性（-），陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)1%～10%微弱陽(yáng)性（+），11%～50%為中度陽(yáng)性（++），＞50%為強(qiáng)陽(yáng)性（+++）。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

所有數(shù)據(jù)均用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件處理，等級(jí)資料采用秩和檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 COX-2與VEGF在正常增生期子宮內(nèi)膜中的表達(dá)

COX-2在正常增生期子宮內(nèi)膜無(wú)表達(dá)，在VEGF中2例呈弱陽(yáng)性（+）表達(dá)，陽(yáng)性率為6.67%。

2.2 COX-2與VEGF在子宮內(nèi)膜增生癥中的表達(dá)

COX-2與VEGF在不典型增生及復(fù)雜性增生內(nèi)膜中的表達(dá)均明顯強(qiáng)于單純性增生，在不典型增生和復(fù)雜性增生的內(nèi)膜表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；但它們?cè)趩渭冃驮錾?fù)雜型增生、不典型增生子宮內(nèi)膜組織中的表達(dá)逐漸增強(qiáng)（P ＜ 0.05）。 見(jiàn)表 1、2。

表1 COX-2在子宮內(nèi)膜增生癥的表達(dá)（n）

復(fù)雜性及不典型增生與單純性增生比較，P＜0.05；復(fù)雜性與不典型增生相比較，P＞0.05；3種組織類(lèi)型間的表達(dá)率比較，P均＜0.05。

表2 VEGF在子宮內(nèi)膜增生癥的表達(dá)（n）

復(fù)雜性及不典型增生與單純性增生比較，P＜0.05；復(fù)雜性與不典型增生相比較，P＞0.05；3種組織類(lèi)型間的表達(dá)率比較，P均＜0.05。

2.3 COX-2與VEGF在子宮內(nèi)膜增生癥及子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)

子宮內(nèi)膜癌組織中COX-2陽(yáng)性染色不僅見(jiàn)于子宮內(nèi)膜癌上皮細(xì)胞的胞漿，而且見(jiàn)于血管內(nèi)皮細(xì)胞的胞漿，棕黃色顆粒彌漫分布于整個(gè)胞漿或沿核膜周邊呈線狀分布；VEGF表達(dá)于多數(shù)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞和少數(shù)血管內(nèi)皮細(xì)胞的胞漿；COX-2在正常增生期子宮內(nèi)膜、子宮內(nèi)膜增生癥及子宮內(nèi)膜癌中表達(dá)陽(yáng)性率分別為0.0%、58.9%、88.0%，VEGF在正常增生期子宮內(nèi)膜、子宮內(nèi)膜增生癥及子宮內(nèi)膜癌中表達(dá)陽(yáng)性率分別為6.7%、66.7%、92.0%。COX-2與VEGF在三種組織中的表達(dá)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0.05）。 見(jiàn)表 3、4。

2.4 COX-2與VEGF表達(dá)的相關(guān)性

COX-2與VEGF在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)通過(guò)Spearman相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)呈正相關(guān)（P＜0.05）。

3 討論

COX-2是前列腺素合成過(guò)程中的重要限速酶，COX-2是一種可誘導(dǎo)型酶具有促進(jìn)細(xì)胞增生、抑制細(xì)胞凋亡以及刺激新生血管的生成等多種功能[2]。近年研究發(fā)現(xiàn)，COX-2在人的很多癌前病變和惡性腫瘤中高表達(dá)，并可能參與腫瘤的增殖、轉(zhuǎn)移及分化[3-4]。正常情況下絕大部分組織細(xì)胞COX-2基因不表達(dá)，只有在細(xì)胞外廣泛的刺激作用下才誘導(dǎo)表達(dá)，如：炎性細(xì)胞因子、生長(zhǎng)因子和促癌因素等均可誘導(dǎo)體內(nèi)組織產(chǎn)生COX-2。本研究顯示，COX-2蛋白在正常子宮內(nèi)膜中無(wú)表達(dá)，這與眾多實(shí)驗(yàn)研究結(jié)論相符。COX-2蛋白在子宮內(nèi)膜增生癥中有較高表達(dá)，與病理組織學(xué)類(lèi)型有相關(guān)性，在單純性增生、復(fù)雜性增生與不典型增生之間比較有明顯差別，且COX-2在子宮內(nèi)膜癌中表達(dá)明顯高于子宮內(nèi)膜增生癥中的表達(dá)。提示COX-2的表達(dá)水平與子宮內(nèi)膜增生癥的形成及內(nèi)膜細(xì)胞的增殖密切相關(guān)，COX-2可能在子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生發(fā)展中起到重要作用。

VEGF是一種對(duì)血管生長(zhǎng)有極強(qiáng)誘導(dǎo)作用的因子，能特異性作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞，是目前所知的唯一作用于血管內(nèi)皮的生長(zhǎng)因子。VEGF一個(gè)極其重要的生物學(xué)功能就是能增加血管通透性，促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞的增殖和遷移，從而促進(jìn)血管生成。VEGF在成年正常組織多呈低水平表達(dá)或不表達(dá)，血管的生成在正常生理狀態(tài)是被封閉的。Kawano Y等[5]發(fā)現(xiàn)VEGF的表達(dá)與增生期子宮內(nèi)膜的新血管生成呈正相關(guān)。Ancelin M等[6]發(fā)現(xiàn)VEGF（189）在細(xì)胞中的表達(dá)可能與子宮內(nèi)膜水腫和不規(guī)則出血有相關(guān)性。據(jù)文獻(xiàn)[7]報(bào)道VEGF在子宮內(nèi)膜癌中呈現(xiàn)高表達(dá)，能夠協(xié)同促進(jìn)子宮內(nèi)膜癌血管形成，可提高子宮內(nèi)膜癌的侵襲能力，以及對(duì)預(yù)測(cè)子宮內(nèi)膜癌的組織病理學(xué)、臨床預(yù)后有價(jià)值。本研究提示，在正常子宮內(nèi)膜可見(jiàn)VEGF少量表達(dá)，與VEGF參與女性正常子宮內(nèi)膜增生期血管生成相符。本研究發(fā)現(xiàn)，VEGF蛋白在子宮內(nèi)膜增生癥及子宮內(nèi)膜腺癌中的表達(dá)量較正常子宮內(nèi)膜的表達(dá)明顯增高，且在子宮內(nèi)膜腺癌中的表達(dá)明顯高于其他兩種組織類(lèi)型。提示VEGF參與了子宮內(nèi)膜增生過(guò)長(zhǎng)的血管生成及血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖，VEGF與子宮內(nèi)膜癌血管生成有關(guān)，在子宮內(nèi)膜癌發(fā)生、發(fā)展的連續(xù)過(guò)程中，VEGF表達(dá)呈進(jìn)行性升高，且與增殖密切相關(guān)。

COX-2與血管生成密切相關(guān)。有研究發(fā)現(xiàn)，COX-2的催化產(chǎn)物前列腺素E2（PEG-2）通過(guò)EP受體激活Her2/neu酪氨酸激酶信號(hào)通路及活化劑蛋白和轉(zhuǎn)錄激活因子促進(jìn)VEGF表達(dá)，VEGF反過(guò)來(lái)又能促進(jìn)COX-2的表達(dá)，其相互作用被某些因素（如炎癥）激發(fā)后，即可加速惡性腫瘤的發(fā)生與發(fā)展[8-9]新近國(guó)外有資料證實(shí)COX-2能夠上調(diào)VEGF表達(dá)，促進(jìn)腫瘤新生血管形成，抑制COX-2則可抑制VEGF的表達(dá)[10]。COX-2可能通過(guò)產(chǎn)生前列腺素E調(diào)節(jié)VEGF的表達(dá)，單一前列腺素E在體內(nèi)可刺激血管的生成，外源性前列腺素E可逆轉(zhuǎn)吲哚美辛引起的VEGF表達(dá)下調(diào)[11]。本研究發(fā)現(xiàn)，子宮內(nèi)膜癌中COX-2表達(dá)與VEGF表達(dá)呈正相關(guān)性，說(shuō)明在子宮內(nèi)膜癌中COX-2表達(dá)與VEGF表達(dá)密切相關(guān)，COX-2可能通過(guò)促進(jìn)腫瘤血管形成來(lái)影響子宮內(nèi)膜癌的侵襲和轉(zhuǎn)移。因此COX-2抑制劑有可能成為治療子宮內(nèi)膜癌的新方法。近年來(lái)有關(guān)臨床研究表明，COX-2的表達(dá)多與預(yù)后不良有關(guān)。根據(jù)COX-2在不同子宮內(nèi)膜增生癥患者中的不同表達(dá)，來(lái)分析判斷患者的預(yù)后及向惡性疾病 （子宮內(nèi)膜癌）的發(fā)展趨勢(shì)?？筛鶕?jù)COX-2在子宮內(nèi)膜癌患者中的不同表達(dá)，來(lái)分析判斷患者的預(yù)后及腫瘤的發(fā)生發(fā)展及轉(zhuǎn)移的趨勢(shì)。

表3 3種組織中COX-2的表達(dá)[n（%）]

表4 3種組織中VEGF的表達(dá)[n（%）]

[1]Bartosch C，Manuel Lopes J，Oliva E.Endometrial carcinomas：areview emphasizing overlapping and distinctive morphological andimmunohistochemical features[J].Adv Anat Pathol，2011，18（6）：415-437.

[2]Ali-Fehmi R，Morris RT，Bandyopadhyay S，et al.Expression ofcyclooxygenase-2 in advanced stage ovarian serous carcinoma：Correlationwith tumor cell proliferation，apoptosis，angiogenesis，and survival[J].Am J Obstet Gynecol，2005，192（3）：819-825

[3]Gunnarsson C，Jansson A，Holmlund B，et al.Expression of COX-2 andsteroid converting enzymes in breast cancer[J].Oncol Rep，2006，16（2）：219-224.

[4]Crowell PL，Schmidt CM，Yip-Schneider MT，et al.Cyclooxygenase-2expression in hamster and human pancreatic neoplasia[J].Neoplasia，2006，8（6）：437-445.

[5]Kawano Y，Nakamura S，Nasu K，et al.The effect of epidermal growth fator on vascular endothelial growth fator secretion by endometrial stromal cells[J].Clin Exp Med，2002，2（2）：69-75.

[6]Ancelin M，Buteau-Lozano H，Meduri G，et al.A dynamic shift of VEGF isoforms with a transient and selective progesterone-induced expression of VEGF 189 regulates angiogenesis and vascular permeaility in humanb uterusJ[J].Proc Natl Acad Sci USA，2002，9（9）：6023-6028.

[7]鄒積艷，盛敏佳，潘穎，等.PTEN和VEGF蛋白在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)及臨床意義[J].中國(guó)婦幼保健，2010，25（25）：3645-3647.

[8]Jain S，Chakraborty G，Raja R，et al.Prostaglandin E2 regulates tumor angiogenesis in prostate cancer[J].Cancer Res，2008，68（19）：7750-7759.

[9]Da Mx，Wu Xt，Wang J，et al.Expression of cyclooxygenase-2 and vascular endothelial growth factor-C correlates with lymphangiogenesis and lymphatic invasion in human gastric cancer[J].Arch Med Res，2008，39（1）：92-99.

[10]Marrogi AJ，Travis WD，Welsh JA，et al.Nitric oxidesynthase，cyclooxygenase-2，and vascular endothelial growth factor in the angiogenesis of non-small cell lung carcinoma[J].Clin Cancer Res，2000，6：539-547.

[11]Ghosh AK，Hirasawa N，Niki H，et al.Cyclooxygenase-2 mediated angiogenesis in carrageenin induced granulation tissue[J].J Pharmacol Exp Ther，2000，295：802-809.