任堅忍，余凡，張詩蓓，雷迎，田光輝

（陜西理工學院化學與環(huán)境科學學院，陜西漢中 723001）

夏枯草（Spica Prunellae）為唇形目唇形科植物，別名麥穗夏枯草、鐵線夏枯草、鐵色草等，主要生長于疏林、荒山、田埂及路旁，花期4月～6月，果期7月～10月，夏至即枯。夏枯草具有清火明目、清肝火、降血壓、抗病原微生物等作用，是一種常見的中藥材。一般是在夏季采取半干燥果穗入藥，但在臺灣市場多見全草使用。在一般涼茶鋪都有賣夏枯草飲料[1－2]。齊墩果酸是五環(huán)三萜類化合物，以游離體和配糖體的形式存在于多種植物中。齊墩果酸主要具有護肝降酶、促進肝細胞再生、抗炎、強心、利尿、抗腫瘤等作用，還具有降血糖、降血脂、鎮(zhèn)靜的作用，是開發(fā)治療肝病和降血糖等藥物有效成分[3]。這里采取微波提取技術，其優(yōu)點是可以大幅度地提高有效成分的提取率，簡化提取操作步驟，縮短生產周期，節(jié)省溶劑，通過單因素實驗，探討夏枯草中齊墩果酸最佳提取工藝[4－6]，使夏枯草中齊墩果酸提取達到一個較高水平，為夏枯草中齊墩果酸的工業(yè)生產以及夏枯草在飲料產業(yè)的應用提供一定參考。

1 實驗部分

1.1 材料、試劑和儀器

1.1.1 材料

野生夏枯草收集于陜南秦巴山區(qū)，漂洗干凈，烘干研磨成粉狀，避光低溫密封備用。

1.1.2 試劑

乙醇、丙酮、甲醇、氯仿、正丁醇、冰醋酸、高氯酸、香草醛（均為國產分析純，西安試劑廠），齊墩果酸標準品（外購）。水為二次蒸餾水。

1.1.3 儀器

UV－6300PC紫外可見分光光度計：上海美譜達儀器有限公司；UWave－1000型微波萃取儀：上海新儀微波化學科技有限公司；DOB－2003型光電分析天平：重慶試驗設備廠；SHB－III循環(huán)水式多用真空泵：鄭州長城科工貿有限公司；101型電熱鼓風干燥箱：北京科偉永興儀器有限公司。

1.2 實驗方法

1.2.1 齊墩果酸標準溶液的配制和標準曲線的繪制

精密稱取齊墩果酸標準品10 mg，用無水乙醇溶解并定容到50 mL容量瓶，即得0.2 mg/mL的齊墩果酸標準溶液。準確移取齊墩果酸標準溶液0.5 mL置于5 mL比色管中，顯色（加熱揮發(fā)掉溶劑，加5%香草醛－冰醋酸0.2 mL，高氯酸0.8 mL，后60℃水浴15 min，取出后冰水浴冷卻2 min，再加4 mL乙酸乙酯，搖勻），以未加對照品的的試劑空白為參比，于波長300 nm～800 nm間進行掃描，的最大吸收波長為654 nm，見圖1，準確移取標準溶液 0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7 mL，顯色，在波長654 nm下測定其吸光度A654，繪制其標準曲線，見圖2。

圖1 夏枯草齊墩果酸光譜吸收Fig.1 Absorption spectrum of Spica Prunellae oleanolic acid

圖2 標準曲線Fig.2 Standard curve

1.2.2 夏枯草中齊墩果酸的提取

采用不同乙醇濃度、微波時間、溫度、料液比4個因素對夏枯草中齊墩果酸提取率的影響進行單因素考查。結合單因素實驗結果設計四因素三水平L9（34）的正交試驗如表1，尋求最佳提取工藝條件。

表1 正交試驗因素表Table 1 Factor level of orthogonal design

2 結果與討論

2.1 單因素實驗

2.1.1 溶劑的影響

分別準確稱取1.000 g夏枯草粉末，分別在10 mL蒸餾水、無水乙醇、丙酮、甲醇、正丁醇、氯仿溶劑中進行提取中，微波提取90 s，抽濾，再重復提取一次，定容，在波長為654.00 nm處測定不同濾液的吸光值A654，其結果如表2。無水乙醇作為溶劑時，所測吸光度最大，即齊墩果酸提取率最高，選用乙醇作為提取溶劑。

表2 不同溶劑對夏枯草中齊墩果酸提取率的影響Table 2 Effects of different solvents on Spica Prunellae oleanolic acid

2.1.2 微波提取時間的選擇

分別準確稱取夏枯草粉末1.000 g，加入10mL無水乙醇，依次在微波中提取 30、60、90、120、150 s，抽濾，重復提取一次，定容，在波長654.00 nm處測其吸光度A654，如表3所示微波時間對夏枯草中齊墩果酸提取率的影響曲線，說明微波提取90 s齊墩果酸的提取率最高，提取最佳時間為90 s。

表3 不同超聲時間對夏枯草齊墩果酸提取率的影響Table 3 Effects of ultrasonic time on Spica Prunellae oleanolic acid

2.1.3 溫度的影響

準確稱取夏枯草粉末1.000 g，加入10 mL無水乙醇，分別在不同溫度條件下，微波提取90 s，抽濾，重復提取一次，定容于容量瓶中，然后在654.00 nm下測定吸光度A654，結果如表4，表明夏枯草齊墩果酸在30℃至70℃時提取率隨溫度上升而上升，在70℃時提取率達到最大。

表4 不同溫度對夏枯草齊墩果酸提取的影響Table 4 Effects of ultrasonic temperature on Spica Prunellae oleanolic acid

2.1.4 微波功率的選擇

分別準確稱取夏枯草粉末1.000 g，加入10 mL無水乙醇，依次在不同微波功率下提取90 s，抽濾，重復提取一次，定容，在波長654.00 nm處測其吸光度A654，如表5所示，微波功率為300 W夏枯草齊墩果酸提取率最高，故提取最佳功率為300 W。

表5 不同功率對夏枯草齊墩果酸提取的影響Table 5 Effects of microwave power ature on Spica Prunellae oleanolic acid

2.1.5 最佳料液比的尋找

準確稱取夏枯草粉末1.000 g，加入10 mL無水乙醇，分別按 1 ∶5、1 ∶10、1 ∶15、1 ∶20、1 ∶25、1 ∶30（g/mL）比例加入溶劑，微波（300 W，70℃）提取90 s，抽濾，重復提取一次，定容，然后在654.00 nm下測定吸光度A654，結果如表6，表明夏枯草齊墩果酸在料液比1∶5 g/mL～1∶20 g/mL時提取率隨溶劑增加而上升，在1∶20 g/mL時提取率達到最大。

表6 不同液料比對夏枯草齊墩果酸提取的影響Table 6 Effects of ultrasonic Liquid-solid ratio on Spica Prunellae oleanolic acid

2.1.6 乙醇濃度的影響

分別準確稱取夏枯草粉末1.000 g，分別在20 mL 50%、60%、70%、80%、90%、100%的乙醇溶液中進行提取，微波（300 W，70℃）提取90 s，抽濾，重復提取一次，定容，在波長為654.00 nm處測定不同濾液的吸光值A654，其結果如表7所示，90%乙醇溶液作為提取溶劑時，齊墩果酸提取率最高。

表7 不同乙醇濃度對夏枯草齊墩果酸提取率的影響Table 7 Effects of different Ethanol concentration on Spica Prunellae oleanolic acid

2.2 夏枯草齊墩果酸提取工藝優(yōu)化

2.2.1 因素與水平設計

將微波時間、溫度、乙醇濃度、料液比4個因素各取3個水平，結合單因素實驗結果設計的L9（34）正交試驗安排實驗，正交實驗結果如表8所示。

經極差分析可知，夏枯草齊墩果酸提取工藝的影響因素次序大小是C＞D＞B＞A，夏枯草齊墩果酸提取最佳工藝為C2D2B2A2，即微波時間為120 s，料液比為1∶20 g/mL，溶劑為90%的乙醇溶液，溫度為70℃，提取率比普通浸取高出將近一倍（普通浸取24 h提取率為 6.894 mg/g）。

表8 正交試驗方案和結果Table 8 Orthogonal experimental program and results

3 結論

夏枯草齊墩果酸在提取過程中用90%乙醇溶液作溶劑提取效果較好，對環(huán)境友好，價廉易得，且溶劑能回收循環(huán)利用。溫度、料液比、微波提取時間對夏枯草齊墩果酸提取率影響較大，夏枯草齊墩果酸的提取溫度不宜太高，應在60℃～70℃下為宜，夏枯草齊墩果酸提取過程中微波功率在300 W，料液比設定在 1∶20 g/mL，時間為90 s就能達到較好的提取效果，提取周期較短，且提取率達到13.276 mg/g，是一種綠色環(huán)保、節(jié)能經濟的提取過程。夏枯草是一種有開發(fā)價值的天然藥材，在保健飲品開發(fā)方面具有非常大的開發(fā)應用空間，其具體的應用還需要進一步探究。

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[1]付曉瑞,李繼昌,張明智.夏枯草近代研究進展概述[J].中醫(yī)研究,2005,18(6):60－61

[2]Silke Nolkemper,Jurgen Keichling,Florian C Stintzing,et al.Antiviral effect of aqueous extracts from species of lamiaceae family against herpes simplex virus type 1 and type 2 in vitro[J].Planta Med,2006,72:1378－1382

[3]曹艷萍,楊秀利,薛成虎.紅棗中齊墩果酸提取工藝的研究[J].食品科學,2007,28(10):165－167

[4]呂佳飛,李文飛,馮偉,等.微波輔助提取石榴皮中齊墩果酸的工藝研究[J].食品與發(fā)酵科技,2010,46(2):41－43,50

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