李法孟

(夏津縣人民醫(yī)院，山東夏津 253200)

新生兒缺氧缺血性腦病(HIE)是導致新生兒死亡和兒童傷殘的主要原因之一。早期診斷和評估其嚴重度對篩選合適患者進行早期干預極為重要。但目前的診斷方法如臨床評價、頭顱超聲、CT或MRI、腦電圖等早期診斷價值不大。血pH、乳酸及Apgar評分早期診斷HIE的特異性和敏感性均較低。近年來發(fā)現(xiàn)S-100蛋白在血清和腦脊液中的濃度變化可反映中樞神經(jīng)系統(tǒng)損害的程度，已成為判斷和評估腦損害的特異性指標［1］。但血液和腦脊液標本的獲得有一定難度，且為有創(chuàng)檢查，不易動態(tài)監(jiān)測。S-100蛋白主要從腎臟排出，而尿液標本較易早期獲得，且為無創(chuàng)檢查，可以多次監(jiān)測動態(tài)觀察。2009年6月～2010年6月，我們測定尿液S-100蛋白，評價其在新生兒HIE早期診斷和嚴重度評價方面的臨床價值。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 2009年6月～2010年6月我院產(chǎn)科出生的足月窒息新生兒118例，所有窒息新生兒按照HIE的分度標準進行分別于生后12、24、36、48和72 h行臨床評估。其中無HIE(無HIE組)、輕度HIE(輕度HIE組)、中重度HIE(中重度HIE組)患兒分別為24、29和65例，均符合HIE診斷和分度標準［2］。三組間胎齡、出生體質(zhì)量、分娩方式、性別、血清肌酐和尿素氮水平差異均無統(tǒng)計學意義。選擇同期住院的無窒息史和其它腦損傷(如顱內(nèi)出血、腦梗塞、先天發(fā)育異常等)的52例患兒作為對照組。

1.2 標本收集 分別在出生后6 h以內(nèi)、12、24、36、48和72 h留取尿液標本，不能自主排尿者通過導尿獲得標本。標本獲得后即刻進行離心10 min。取上清液放置－70℃冰箱冷凍保存留待監(jiān)測。

1.3 尿S-100蛋白測定 采用酶聯(lián)免疫吸附試驗雙抗體夾心法，放免試劑盒購自瑞典AB sanptecmedica公司，操作由專人按其說明嚴格執(zhí)行。

1.4 統(tǒng)計學方法 采用SPSS 11.0軟件，所有數(shù)據(jù)以表示，多組均數(shù)比較采用one-Way ANOVA方法，結(jié)果顯示有統(tǒng)計學意義時，再用Student-Newman-Keuls(SNK)法進行組間比較。相關(guān)性分析采用Spearman相關(guān)性分析。P≤0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 尿液S-100蛋白濃度 輕度HIE組尿液S-100蛋白濃度在各個時間點較無HIE和對照組均增高(P＜0.05);中重度HIE組S-100蛋白在各個時間點均高于無HIE組、輕度HIE組及對照組(P均＜0.01)。

2.2 尿液S-100蛋白濃度與HIE嚴重度相關(guān)性各時間點尿液S-100蛋白濃度與HIE嚴重度均呈顯著正相關(guān)，＜6 h、12 h、24 h、36 h、48 h 和 72 h 相關(guān)系數(shù) r分別為0.62、0.71、0.72、0.65、0.68、0.67，P均 ＜0.05。

3 討論

早期診斷和評價新生兒HIE嚴重度具有重要的臨床意義。新生兒HIE的治療存在時間窗，即在發(fā)生第二次能量衰竭之前進行干預［3］。研究表明第二次能量衰竭發(fā)生在12 h以內(nèi)，因此只有早期診斷才能進行早期干預。此外，選擇合適的患者進行干預也非常重要，如低溫治療對中度HIE可能有效［3］，因此早期正確評價新生兒HIE嚴重度也非常重要。

表1 各組患兒各個檢測時間點尿液S-100蛋白濃度()

表1 各組患兒各個檢測時間點尿液S-100蛋白濃度()

注:與對照組比較，﹡ P ＜0.05;與無HIE 組比較，#P ＜0.05;與輕度 HIE 組比較，△P ＜0.01

組別 n尿液S-100蛋白濃度(μg/L)＜6 h 12 h 24 h 36 h 48 h 72 h無 HIE 組 24 0.18 ±0.11 0.19 ±0.10 0.19 ±0.09 0.26 ±0.11 0.26 ±0.15 0.30 ±0.16輕度 HIE 組 29 1.12 ±0.43﹡# 1.26 ±0.57﹡# 1.35 ±0.62﹡# 1.61 ±0.68﹡# 1.71 ±0.72﹡# 1.85 ±0.65﹡#中重度 HIE 組 65 2.01 ±1.12﹡#△ 2.38 ±1.21﹡#△ 2.27 ±1.46﹡#△ 2.25 ±1.28﹡#△ 2.67 ±1.32﹡#△ 2.83 ±2.12﹡#△對照組 52 0.14 ±0.06 0.14 ±0.08 0.21 ±0.10 0.22 ±0.10 0.27 ±0.13 0.29 ±0.11

目前新生兒HIE的診斷和評價方法包括臨床和影像學檢查以及腦電生理檢查，但均不能敏感地早期診斷和評價其嚴重度。生化檢查如血pH值、乳酸、血清酶學檢查等并不能直接反應腦損傷的程度，且其它疾病時也可異常。

神經(jīng)特異性蛋白檢查在新生兒HIE診斷和評價中具有重要價值，特別是S-100蛋白。S-100蛋白是一種鈣結(jié)合蛋白，由中樞神經(jīng)系統(tǒng)星形膠質(zhì)細胞合成，是組成膠質(zhì)細胞的主要成分。研究表明S-100蛋白是一種可以反映腦細胞損傷程度的標記物，HIE腦損傷膠質(zhì)細胞變性壞死時，S-100蛋白便從胞質(zhì)中釋放到CSF中，進而進入血液循環(huán)。因此腦損傷時CSF和血清中S-100蛋白濃度均增高增高。既往研究表明血清和腦脊液中S-100蛋白濃度與HIE嚴重度呈正相關(guān)，特別是腦脊液中濃度，可以早期診斷和評估HIE嚴重度，但血液或腦脊液標本獲得存在一定難度且不易動態(tài)檢測［4］。既往研究表明顱內(nèi)出血的早產(chǎn)兒尿中S-100蛋白濃度增高［5］，而腎臟本身并不分泌S-100蛋白，因此尿中檢測到的S-100蛋白來源于血液循環(huán)［6］，通過檢測尿液中S-100蛋白濃度可以反映腦損傷的程度。

本研究發(fā)現(xiàn)，存在HIE的新生兒尿液S-100蛋白濃度增加，且中重度HIE患兒尿液S-100蛋白濃度高于無或輕度HIE的患兒。與其他研究結(jié)果類似，Gazzolo等［7～9］研究表明中重度HIE患兒尿液內(nèi)S-100蛋白濃度顯著高于輕度HIE患兒，預后不良的患兒顯著高于預后良好者。由于腎臟本身不分泌S-100蛋白，因此尿液中升高的S-100蛋白濃度提示S-100蛋白來源于損傷的中樞神經(jīng)系統(tǒng);尿液中持續(xù)升高的S-100蛋白提示嚴重的腦細胞損傷。本研究結(jié)果提示中重度HIE生后6 h內(nèi)尿S-100蛋白濃度已經(jīng)高于無或輕度HIE患兒和對照組，且可持續(xù)72 h，提示尿液S-100蛋白測定可以作為新生兒HIE早期診斷和嚴重度評估的早期指標。另外S-100蛋白的半衰期很短，僅為1 h，動態(tài)檢測尿液S-100濃度也可以作為評價治療效果的指標之一，值得進一步研究。

由于中重度HIE患兒常表現(xiàn)為腎功能障礙，另外為了排除腎功能障礙對結(jié)果的影響，我們對腎功能進行了監(jiān)測，窒息患兒血BUN和Cr與對照組沒有顯著差異。中重度HIE與無或輕度HIE比較也沒有顯著差異，因此提示尿液S-100蛋白的顯著性差異反映了HIE嚴重度不同，并不是由于腎功能差異而導致的。

本研究表明，檢測尿液S-100蛋白濃度可以早期診斷和評價新生兒HIE嚴重度，而尿液標本容易獲得，且可動態(tài)觀察，可以作為臨床早期選擇合適患兒進行干預的依據(jù)，在療效評價和預后評估方面的價值值得進一步探討。

［1］Michetti F，Gazzolo D.S-100B protein in biological fluids:a tool for perinatal medicine［J］.Clin Chem，2002，48(12):2097-2104.

［2］楊于嘉，姚裕家.新生兒缺氧缺血性腦病診斷標準［J］.中華兒科雜志，2005，43(8):584-584.

［3］邵肖梅.新生兒缺氧缺血性腦病的診治進展及相關(guān)問題［J］.臨床兒科雜志，2007，25(3):179-182.

［4］Ramaswamy V，Horton J，Vandermeer B，et al.Systematic review of biomarkers of brain injury in term neonatal encephalopathy［J］.Pediatr Neurol，2009，40(3):215-226.

［5］Gazzolo D，Bruschettini M，Lituania M，et al.S100B protein levels in urine are correlated with gestational age in healthy preterm and term newborns［J］.Clin Chem，2001，47(6):1132-1133.

［6］Baudier J，Glasser N，Haglid K，et al.Purification，characterization and ion binding properties of human brain S100b protein［J］.Biochim Biophys Acta，1984，790(2):164-173.

［7］Gazzolo D，F(xiàn)lorio P，Ciotti S，et al.S100B protein in urine of preterm newborns with ominous outcome［J］.Pediatr Res，2005，58(6):1170-1174.

［8］Gazzolo D，Marinoni E，Di Iorio R，et al.Measurement of urinary S100B protein concentrations for the early identification of brain damage in asphyxiated full-term infants［J］.Arch Pediatr Adolesc Med，2003，157(12):1163-1168.

［9］Gazzolo D，F(xiàn)rigiola A，Bashir M，et al.Diagnostic accuracy of S100B urinary testing at birth in full-term asphyxiated newborns to predict neonatal death［J］.PLoS One，2009，4(2):e4298.