李少波 石延霞 劉君麗 謝學(xué)文 李寶聚

（1沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)，遼寧沈陽(yáng) 110866；2中國(guó)農(nóng)業(yè)科 學(xué)院蔬菜花卉研究所，北京 100081）

番茄晚疫病又稱番茄疫病、黑桿病，是由卵菌門卵菌綱霜霉目腐霉科疫霉屬的致病疫霉〔Phytophthora infestans（Mont）de Bary〕侵染所致，在 北京、山西、云南、貴州、重慶、山東、陜西、河南、河北等省市均普遍發(fā)生。番茄晚疫病是保護(hù)地番茄的重要病害，一旦發(fā)生就會(huì)迅速蔓延，是一種毀滅性的病害。

生產(chǎn)中防治番茄晚疫病的方法主要為化學(xué)農(nóng)藥。目前常用的殺菌劑主要有75%百菌清可濕性粉劑（WP）、50%甲霜靈WP、72%霜脲·錳鋅WP、68%精甲霜·錳鋅WP、10%氰霜唑懸浮劑（SE）和70%丙森鋅WP（石延霞 等，2007），但長(zhǎng)期單一使用同類殺菌劑，使得病原菌對(duì)一些常用殺菌劑表現(xiàn)出抗藥性（沈國(guó)強(qiáng) 等，2006），且化學(xué)殺菌劑常用于病害發(fā)生后，不利于控制病害的大規(guī)模爆發(fā)，易造成田間減產(chǎn)甚至絕收。近幾年迅速發(fā)展的植物誘抗劑對(duì)病害具有預(yù)防作用，通過加強(qiáng)植物自身免疫達(dá)到對(duì)病原菌的抗性作用。本試驗(yàn)選用的4種誘抗劑在國(guó)內(nèi)或者國(guó)外均有登記，其作用對(duì)象各不相同，本試驗(yàn)通過葉面噴霧施藥，研究4種誘抗劑對(duì)番茄晚疫病的抗病反應(yīng)，為其在田間番茄晚疫病的防治應(yīng)用中提供相關(guān)參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

供試藥劑：1%苯并噻二唑水乳劑（EW），北京廣源益農(nóng)化學(xué)有限責(zé)任公司生產(chǎn)。3%氨基寡糖素水劑（AS），購(gòu)自大連奧德植保藥業(yè)有限公司。2%幾丁聚糖AS，購(gòu)自山東科大創(chuàng)業(yè)生物有限公司。2%香菇多糖AS，購(gòu)自黑龍江省大地豐農(nóng)業(yè)科技開發(fā)有限公司。

供試植株：番茄品種為中雜105。

供試病原菌：番茄晚疫病菌P. infestans分離自番茄晚疫病發(fā)病植株，經(jīng)致病性試驗(yàn)鑒定為強(qiáng)致病菌株，菌株編號(hào)為FQWY，由中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蔬菜花卉研究所分離鑒定保存。

1.2 4種誘抗劑對(duì)番茄晚疫病菌的抑菌活性

采用平皿法測(cè)定4種誘抗劑對(duì)番茄晚疫病菌的抑制活性，將4種誘抗劑分別稀釋配制成3種不同濃度（表1），對(duì)照殺菌劑為50%烯酰嗎啉WP。在無(wú)菌條件下，將預(yù)先融化的燕麥培養(yǎng)基（35 g燕麥，20 g瓊脂，1 000 mL H2O）定量加入無(wú)菌錐形瓶中，定量吸取藥液，分別加入錐形瓶后搖勻，等量倒入培養(yǎng)皿中，制成相應(yīng)濃度的含藥平板。在無(wú)菌條件下用滅菌打孔器取菌餅，將菌餅接種于含藥平板中央，菌絲面朝上，置于光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)條件：溫度28 ℃，光照12 h·d-1，光照強(qiáng)度10 000 lx。每個(gè)處理4次重復(fù)。3 d后調(diào)查病原菌菌絲生長(zhǎng)情況，用卡尺測(cè)量菌落直徑，用十字交叉法垂直測(cè)量直徑各一次，取其平均值。

1.3 4種誘抗劑對(duì)苗期番茄晚疫病的誘導(dǎo)抗性

將4種誘抗劑分別配制成3種不同濃度，對(duì)照殺菌劑50%烯酰嗎啉WP稀釋成1 000倍液，選擇3～4片復(fù)葉期的番茄幼苗，將4種誘抗劑均勻噴施于番茄葉面，間隔5 d噴施1次，連續(xù)噴霧誘導(dǎo)3次，第3次誘導(dǎo)后24 h葉面噴霧接種晚疫病病原菌孢子懸浮液（1×106個(gè)·mL-1），每株接種孢子懸浮液3 mL。對(duì)照殺菌劑50%烯酰嗎啉WP采用葉面噴霧方式，施藥時(shí)間和次數(shù)同誘抗劑，另設(shè)只接種不施藥的清水對(duì)照處理，及不接種不施藥的空白對(duì)照。接種后將番茄放入保濕箱中保濕培養(yǎng)，培養(yǎng)條件：晝溫25 ℃，夜溫18 ℃，濕度90%～100%。每處理4次重復(fù)，每重復(fù)20株番茄幼苗，待清水對(duì)照充分發(fā)病后調(diào)查病情指數(shù)，計(jì)算誘導(dǎo)效果。

番茄晚疫病病情分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)（GB/T 17980. 31-2000）：0級(jí)，無(wú)病斑；1級(jí)，病斑面積占整個(gè)葉面積5%以下；3級(jí)，病斑面積占整個(gè)葉面積6%～10%；5級(jí)，病斑面積占整個(gè)葉面積11%～20%；7級(jí)，病斑面積占整個(gè)葉面積21%～50%；9級(jí)，病斑面積占整個(gè)葉面積50%以上。

1.4 4種誘抗劑對(duì)成株期番茄晚疫病的誘導(dǎo)抗性

分別于2010年9月和2011年10月在中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蔬菜花卉所試驗(yàn)溫室對(duì)番茄進(jìn)行誘導(dǎo)抗病性研究。在2010年9月中旬和2011年10月上旬番茄主莖7～9葉期，將不同濃度的4種誘抗劑均勻噴施于番茄植株上，施藥量為每小區(qū)1 L，間隔5 d誘導(dǎo)1次，連續(xù)誘導(dǎo)3次，對(duì)照殺菌劑50%烯酰嗎啉WP稀釋1 000倍液，施藥時(shí)間和次數(shù)同4種誘抗劑，另設(shè)不施藥清水對(duì)照，每處理4次重復(fù)，每重復(fù)1個(gè)小區(qū)，每小區(qū)20株番茄苗，待對(duì)照發(fā)病后調(diào)查病情指數(shù)，計(jì)算誘導(dǎo)抗病效果，調(diào)查分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)及病情指數(shù)計(jì)算方法同1.3。

式中：CK0為空白對(duì)照區(qū)誘導(dǎo)前病情指數(shù)；CK1為空白對(duì)照區(qū)誘導(dǎo)后病情指數(shù)；PT0為藥劑處理區(qū)誘導(dǎo)前病情指數(shù)；PT1為藥劑處理區(qū)誘導(dǎo)后病情指數(shù)。

1.5 數(shù)據(jù)處理

利用SAS 9.0軟件Duncan’s 新復(fù)極差法比較數(shù)據(jù)之間的差異顯著性。

2 結(jié)果與分析

2.1 4種誘抗劑對(duì)番茄晚疫病菌的抑菌活性

4種誘抗劑對(duì)番茄晚疫病菌的抑菌活性測(cè)定結(jié)果表明（表1），不同濃度1%苯并噻二唑EW、2%香菇多糖AS、2%幾丁聚糖AS和3%氨基寡糖素AS與對(duì)照殺菌劑50%烯酰嗎啉WP相比，并無(wú)明顯殺菌活性；4種誘抗劑的抑菌活性普遍低于30%，而對(duì)照殺菌劑抑菌活性為100%，證明這4種誘抗劑均無(wú)明顯的殺菌活性。

表1 4種誘抗劑對(duì)致病疫霉菌菌絲生長(zhǎng)的抑制效果

2.2 4種誘抗劑對(duì)苗期番茄晚疫病的誘導(dǎo)抗性效果

通過苗期盆栽試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)（表2），葉面噴施4種誘抗劑后，番茄對(duì)晚疫病均產(chǎn)生了很好的抗性，不同濃度產(chǎn)生的誘導(dǎo)抗性效果不同，平均效果均在60%以上，對(duì)照殺菌劑50%烯酰嗎啉WP在處理前期防治效果為94.12%，在處理后28 d防治效果有所下降；3%氨基寡糖素AS和2%幾丁聚糖AS誘導(dǎo)效果較好，不同濃度處理效果均達(dá)到了80%以上，其中100 mg·L-1的3%氨基寡糖素AS在處理后21 d和28 d的誘導(dǎo)效果分別為84.13%和88.42%，500 mg·L-1的2%幾丁聚糖AS在處理后21 d和28 d的誘導(dǎo)效果分別為88.85%和90.06%，持效性好于對(duì)照殺菌劑50%烯酰嗎啉WP（85.49%）。

2.3 4種誘抗劑對(duì)成株期番茄晚疫病的誘導(dǎo)抗性效果

通過田間溫室試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，不同濃度的4種誘抗劑對(duì)田間番茄晚疫病起到了很好的誘導(dǎo)抗性效果（表3），大部分誘導(dǎo)抗病效果高于對(duì)照50%烯酰嗎啉WP。2010年試驗(yàn)中50 mg·L-1的1%苯并噻二唑EW的誘導(dǎo)抗病效果最佳，為94.71%，100 mg·L-1和50 mg·L-1的3% 氨基寡糖素 AS、500 mg·L-1的2%幾丁聚糖AS的誘抗效果也均超過了90%；2011年試驗(yàn)中100 mg·L-1的3%氨基寡糖素AS的誘導(dǎo)抗病效果最佳，為95.89%，50 mg·L-1的1%苯并噻二唑EW和500 mg·L-1的2%幾丁聚糖AS的誘導(dǎo)抗病效果也超過了90%。

表2 4種誘抗劑對(duì)苗期番茄晚疫病誘導(dǎo)抗性效果

3 結(jié)論與討論

本試驗(yàn)以番茄晚疫病為試驗(yàn)對(duì)象，研究4種誘抗劑對(duì)番茄晚疫病的誘導(dǎo)抗病性表達(dá)，通過抑菌活性測(cè)定證實(shí)4種誘抗劑對(duì)番茄晚疫病菌的菌絲生長(zhǎng)沒有明顯的抑制作用，抑菌效果均在30%以下，證明這4種誘抗劑無(wú)明顯的抑菌活性；盆栽和田間試驗(yàn)結(jié)果表明，4種誘抗劑對(duì)番茄晚疫病的防病效果為誘導(dǎo)抗病性，盆栽試驗(yàn)結(jié)果表明不同濃度的4種誘抗劑對(duì)苗期番茄晚疫病的誘導(dǎo)抗病效果均超過了60%，田間試驗(yàn)結(jié)果表明4種誘抗劑對(duì)成株期番茄晚疫病誘導(dǎo)抗病效果均超過了70%（除12.5 mg·L-1的2%幾丁聚糖AS處理外）。且和對(duì)照殺菌劑50%烯酰嗎啉WP相比持效性更好。

在蔬菜生產(chǎn)中，通常采用噴施化學(xué)農(nóng)藥的方法來控制病害的發(fā)生，但化學(xué)殺菌劑多施用于病害發(fā)生以后，具有不可控性，容易造成大面積減產(chǎn)，且長(zhǎng)期大量的使用化學(xué)農(nóng)藥，尤其單一的使用某種殺菌劑，易導(dǎo)致病原菌產(chǎn)生抗藥性、農(nóng)產(chǎn)品中藥劑殘留和環(huán)境污染等一系列的問題，嚴(yán)重制約了農(nóng)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展。近年來，利用誘抗劑誘導(dǎo)果蔬產(chǎn)生抗病性逐漸成為作物病害防治的發(fā)展方向，目前有應(yīng)用潛力的誘抗劑有很多，包括寡糖類生物農(nóng)藥、苯并噻二唑、水楊酸等，這些誘抗劑本身沒有殺菌活性，但能激活植物體內(nèi)防御機(jī)制，誘導(dǎo)植物抗病信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和相關(guān)抗病基因的表達(dá)，從而起到抗病的作用，誘導(dǎo)抗病技術(shù)在園藝作物病害防治領(lǐng)域起著越來越重要重要的作用。

表3 4種誘抗劑對(duì)成株期番茄晚疫病誘導(dǎo)抗性效果

目前國(guó)外報(bào)道苯并噻二唑 可用來誘導(dǎo)番茄抗花葉病毒?。═obac co mosaic virus）、甘藍(lán)抗霜霉病（Peronospora parasitica）、豌豆抗銹?。║romyces pisi）、花椰菜抗霜霉?。≒eronospora parasitica）等（Anfoka，2000；Barilli et al.，2012），其中葉面噴施苯并噻二唑后霜霉病對(duì)甘藍(lán)的侵染由95%減少到15%，種子處理后對(duì)甘藍(lán)的侵染由99%減少到73%；5～75 mg·L-1苯并噻二唑處理的花椰菜種子對(duì)霜霉病的抗性效果均超過了69%（Godard，1999），在番木瓜上也可引起植株的系統(tǒng)抗性（Zhu et al.，2003）。葉面噴施幾丁聚糖對(duì)水稻紋枯病菌（Thanatephorus cucumeris）的誘導(dǎo)抗性效果均超過了60%（Liu et al.，2012），還能引起作物對(duì)鐮刀菌屬（Fusarium）和茄匍柄霉（Stemphylium solani）的誘導(dǎo)抗病性（Li et al.，2012），在煙草上可用來防治煙草黑脛?。≒hytophtora parasiticavar.nicotianae）（Falcón-Rodríguez et al.，2011），也有報(bào)道稱幾丁聚糖和硼酸復(fù)配為可濕性粉劑對(duì)茄病鐮刀菌（Fusarium solani）具有直接的殺菌作用（Saita et al.，2012）；苯并噻二唑?qū)衿ぬ鸸系暮诎卟。ˋlternaria alternata）、番茄和辣椒的細(xì)菌性斑點(diǎn)?。╔anthomonas campstrispv.Vesicatoria）、葡萄灰霉?。˙otrytis cinerea）、黃瓜蔓枯?。―idymella bryoniae）等多種果蔬病害均具有誘導(dǎo)抗性效果（Godard et al.，1999；Bokshi et al.，2003；Iriti＆Faoro，2003），其中對(duì)霜霉病誘抗效果明顯，如10～70 mg·L-1的苯并噻二唑葉面處理黃瓜植株對(duì)霜霉病的誘導(dǎo)抗病效果均超過63%（王莉 等，2005；蔡洪生 等，2007）。本試驗(yàn)選用的4種誘抗劑國(guó)內(nèi)均有登記，但防治對(duì)象各不相同，國(guó)內(nèi)登記的氨基寡糖素AS有0.5%、2%、3%和5%，防治對(duì)象為番茄晚疫?。≒. infestans）、西瓜枯萎?。∕ycosphaerella melonis）、白菜軟腐?。‥rwinia carotovorasubsp.carotovora）、煙草病毒病（TMV）、番茄病毒?。═MV）等；而2%幾丁聚糖AS防治對(duì)象則主要為番茄晚疫?。≒. infestans）、番茄病毒?。═MV）、黃瓜白粉?。≒odosphaera fusca）、黃瓜霜霉?。≒seudoperonospora cubensis）；香菇多糖AS已登記有0.5%、1%和2%，防治對(duì)象為煙草花葉病毒?。═MV）、番茄病毒?。═MV）、辣椒病毒?。–apsicum mottle virus）等病毒性病害（http://www.chinapesticide.gov. cn）。

番茄晚疫病是保護(hù)地番茄生產(chǎn)的毀滅性病害，近幾年在田間生產(chǎn)上常造成大面積減產(chǎn)，在晚疫病發(fā)生前或者發(fā)生初期使用誘導(dǎo)抗病劑，具有很好的預(yù)防作用，可以有效的減少田間損失，在未來園藝作物病害防治中，誘導(dǎo)抗病技術(shù)有著廣闊的應(yīng)用前景。在田間實(shí)際應(yīng)用中，由于誘抗劑需提前施藥預(yù)防病害的發(fā)生，對(duì)病害發(fā)生后防治有一定的難度，因此幾種誘抗劑在發(fā)病前的最佳施藥間隔期和施藥次數(shù)還有待進(jìn)一步研究，以便達(dá)到對(duì)番茄晚疫病最經(jīng)濟(jì)有效的預(yù)防和防治。

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