吳 鋒 朱宏儒 楊 坤

江蘇省血吸蟲病防治研究所 衛(wèi)生部寄生蟲病預(yù)防和控制技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室

江蘇省寄生蟲分子生物學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 江蘇省寄生蟲病學(xué)重點(diǎn)學(xué)科，江蘇無錫 214064

藥物滅螺是利用對釘螺具有一定毒性的化學(xué)物質(zhì)，通過適當(dāng)方式達(dá)到殺滅釘螺的方法，具有省時(shí)、省力、見效快、可反復(fù)使用的特點(diǎn)，是我國目前主要的滅螺方法[1-2]。我國研制生產(chǎn)國產(chǎn)滅螺藥始于20世紀(jì)50 ～ 60年代，至今已從2000多種化合物和農(nóng)藥中篩選出多種有效殺螺藥，如殺蟲雙、溴乙酰胺、煙酰苯胺（浸螺殺）、殺蟲丁、四聚乙醛、硼礦粉等，并在國內(nèi)許多血吸蟲病流行區(qū)進(jìn)行了應(yīng)用和評(píng)估；但因多種原因未能得到全面推廣應(yīng)用[3-6]。氯硝柳胺是WHO唯一推薦使用的化學(xué)殺螺藥，但在實(shí)際應(yīng)用中該藥易沉淀且有釘螺上爬（逃避）現(xiàn)象，同時(shí)存在價(jià)格貴、對非靶水生物（魚類）毒性大等缺陷[7-9]。因此，篩選、研制和開發(fā)新的高效、低毒并使用方便的新型殺螺劑，是亟待解決的問題。為此我們采集篩選了新型除草類10種農(nóng)藥（藥樣）并進(jìn)行了室內(nèi)殺螺效果的實(shí)驗(yàn)觀察研究。

1 材料與方法

1.1 藥物

依據(jù)高效、低毒、且對環(huán)境污染小為原則，并排除以往已經(jīng)篩選過的藥品（或化合物），通過查閱文獻(xiàn)資料及相關(guān)農(nóng)藥信息，本次采集主要以農(nóng)藥除草劑類藥樣為主，10種藥樣中5種為粉劑或顆粒劑，5種為液體或乳油，分別采集于本省2個(gè)化工和生物農(nóng)藥廠。

1.2 釘螺

實(shí)驗(yàn)所用釘螺采自江蘇省南京市血吸蟲病流行區(qū)江灘，經(jīng)室內(nèi)作適應(yīng)性飼養(yǎng)3～5d后挑選活力強(qiáng)，具有7～8個(gè)螺旋的成螺用于實(shí)驗(yàn)。

1.3 方法

1.3.1 篩選步驟與實(shí)驗(yàn)分組 對5種粉劑或顆粒劑藥樣編為藥物代號(hào) A-001、A-002、A-003、A-004和 A-005，5種液體或乳油藥樣編為 B-006、B-007、B-008、B-009和 B-010。實(shí)驗(yàn)分為初篩和復(fù)篩2個(gè)階段。

1.3.2 初篩 按照各藥樣的實(shí)際有效含量確定1.0、10.0和30.0mg/L（g/m2）3個(gè)濃度組進(jìn)行浸泡（燒杯）法初篩殺螺效果觀察。

1.3.3 復(fù)篩 對初篩殺螺率＞80%的藥樣，根據(jù)藥樣實(shí)際有效含量等比稀釋并確定 0.5、1.0、2.0、4.0、8.0、16.0mg/L 和32.0mg/L（g/m2）7個(gè)組別，進(jìn)行復(fù)篩浸泡、噴灑和撒粉殺螺效果觀察。

1.4 浸泡法

取100mL玻璃燒杯，每杯放入活螺30只，上蓋塑料紗網(wǎng)以防止釘螺爬出，加藥液100mL，浸泡24、48h和72h觀察釘螺存活情況。

1.5 噴灑法

在20cm×25cm的搪瓷盤內(nèi)鋪經(jīng)20孔/25.4mm金屬篩篩過的干燥泥土500g刮平并加水175mL濕潤泥土，使泥土含水量控制在35%左右，實(shí)驗(yàn)前每盤投入活釘螺30只，自由爬動(dòng)10～15min，然后將不同劑量藥液用澆花壺作均勻噴灑，藥液量為1000mL/m2，噴灑3、7d和15d后取出釘螺觀察死亡情況。

1.6 撒粉法

實(shí)驗(yàn)環(huán)境與用藥量同噴灑法，本法實(shí)驗(yàn)時(shí)將不同組別藥量直接撒粉于試驗(yàn)盤內(nèi)，于3、7d和15d后取出釘螺觀察死亡情況。3種方法均設(shè)清水空白對照組，統(tǒng)一置于空調(diào)恒溫（25±2）℃環(huán)境下進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察。

1.7 釘螺死亡鑒別觀察

實(shí)驗(yàn)結(jié)束后取出釘螺用清水沖洗殘留于釘螺體表的藥液，采用敲擊法鑒定死活[10-11]。

1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

計(jì)算不同方法、不同時(shí)間的釘螺死亡率和LC50及LD50[12]。數(shù)據(jù)采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。

2 結(jié)果

2.1 初篩殺螺效果

濃度為1.0、10.0和30.0mg/L各觀察組中，10種新型農(nóng)藥除草劑藥物經(jīng)浸泡48h和72h后，A-004、B-008和B-0093種藥樣的殺螺效果較穩(wěn)定，殺螺率分別為30.0%～100.0%和56.7%～100.0%，16.7%～96.7%和26.7%～100.0%，30.0%～100.0%和30.0%～100.0%。其他藥樣的殺螺率則較低或一般。

2.2 復(fù)篩殺螺效果

2.2.1 浸泡法 A-004、B-008和B-009 3種藥樣在濃度0.5、1.0、2.0、4.0、8.0、16.0、32.0mg/L 時(shí)，浸泡 24、48h 和 72h的殺螺率、LC50值和95%可信區(qū)間，見表1。其中48h和72h的LC50值明顯低于24h的，顯示了較好的滅螺活性。

表1 A-004、B-008和B-009浸泡法復(fù)篩殺螺效果

2.2.2 噴灑法 A-004、B-008和 B-009劑量 0.5、1.0、2.0、4.0、8.0、16.0、32.0g/m2時(shí)，噴灑 3、7d 和 15d后，B-009殺螺率為3.3%～90.0%、13.3%～96.7%和20.0%～100.0%，但亦需4.0g/m2噴灑7d才能達(dá)50%以上的殺螺率。其LD50分別為 4.949g/m2、2.415g/m2和 1.701g/m2，95% 可信區(qū)間分別 在 3.614～ 6.884、1.544～ 3.522和 1.139～ 2.360。其他藥樣A-004和B-008噴灑殺螺效果較好的僅在16.0和32.0g/m2的高劑量組，其噴灑3、7d和15d的殺螺率分別為46.7%～83.3%、100.0%～100.0%、96.7%～100.0%和70.0%～93.3%、86.7%～96.7%、86.7%～93.3%。

2.2.3 撒粉法 A-001和A-002（粉劑和可粒劑）2種低含量藥樣的水溶性較差，但在用 0.5、1.0、2.0、4.0、8.0、16.0、32.0g/m2時(shí)，撒粉3、7d和15d后顯示了較好的殺螺效果，見表2。

表2 A-001和A-002撒粉法復(fù)篩殺螺效果

3 討論

血吸蟲病是嚴(yán)重危害我國人民身體健康的五大寄生蟲病之一，而釘螺是日本血吸蟲唯一中間宿主，能在江河湖灘、內(nèi)陸溝渠以及丘陵山區(qū)各種環(huán)境孳生繁殖。實(shí)踐證明，釘螺與血吸蟲病流行有著密切的關(guān)系，凡有血吸蟲病流行的地方必有釘螺孳生[13-14]。因此，消滅釘螺即可切斷血吸蟲的傳播途徑，也是國際公認(rèn)的控制血吸蟲病的重要措施[15-16]，化學(xué)滅螺就是消滅或減少血吸蟲病流行和傳播最快捷有效的方法之一，迄今也是控制釘螺的主要手段。所以，加快研制和尋找高效、低毒的滅螺新藥已越來越受到人們的普遍關(guān)注。

本次篩選的10種新型農(nóng)藥同屬除草劑類藥物，廣泛用于水、旱田以及土壤中害蟲的防治，均屬高效低毒類新農(nóng)藥。室內(nèi)殺螺篩選試驗(yàn)表明，無論在浸泡法、噴灑法中均有一定殺滅釘螺的活性和效果；但擊倒力較弱，施藥后未見有釘螺逃避（上爬）現(xiàn)象。而在撒粉法殺螺實(shí)驗(yàn)中，A-001和A-002 2種藥樣在撒粉3、7d和15d的殺螺率均顯著高于其他藥樣浸泡和噴灑法效果，但該2種藥樣均難溶于水，可能是直接影響其浸泡和噴灑殺螺效果的主要原因；而其他8種藥樣雖易溶于水，且無明顯的沉淀現(xiàn)象，但殺螺實(shí)驗(yàn)顯示其滅螺效果并不理想，可能與其藥樣中有效殺螺成份低或?qū)β莸亩練⒆饔脵C(jī)制不同有關(guān)。

國內(nèi)對化學(xué)合成滅螺藥物的殺螺機(jī)制雖有探索但系統(tǒng)研究較少，所以至今真正具有廉價(jià)、低毒、高效且殺螺活性好并具有開發(fā)價(jià)值的新型滅螺劑尚未發(fā)現(xiàn)。因此，要想盡快尋找滅螺新藥目前仍主要采用傳統(tǒng)的方法，即通過篩選各種類型藥物（化合物或已知有效化合物衍生物），并根據(jù)其藥物對釘螺的不同作用、協(xié)同作用和是否具有提高滅螺效果等，以期從篩選藥樣中早日獲得線索并發(fā)現(xiàn)新藥，雖然這一方法是節(jié)省人、財(cái)、物和短平快的一種新模式并經(jīng)實(shí)踐證明比較有效，然而仍帶有一定的盲目性，而且費(fèi)時(shí)、費(fèi)力。隨著分子生物學(xué)方法的引入，無疑對尋找滅螺新藥具有很大的指導(dǎo)意義，并針對特定的靶部位設(shè)計(jì)新藥，不但能節(jié)省大量的人力、物力，而且所獲得的藥物選擇性強(qiáng)、不良反應(yīng)少，是滅螺新藥研究的方向[3]。但要真正開發(fā)成功一種新的殺螺劑（藥物），可能需要幾年甚或10余年或更長的時(shí)間，故研究和發(fā)展滅螺新藥仍然是任重而道遠(yuǎn)。

A-001和A-002兼有農(nóng)藥和化肥的功效并對環(huán)境安全，既可作為基肥使用，又能殺蟲、除草、改良土壤、促進(jìn)植物生長。因此，對其殺螺效果值得進(jìn)一步研究和探索。

[1] 中華人民共和國衛(wèi)生部疾病控制司.血吸蟲病防治手冊[M].第3版，上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，2000：13，201-202.

[2] 周曉農(nóng).實(shí)用釘螺學(xué)[M].北京：科學(xué)出版社，2005：266-270.

[3] 吳鋒.沙蠶毒系藥物滅螺研究進(jìn)展[J].中國血吸蟲病防治雜志，2007，19（6）：484.

[4] 吳鋒，姜玉驥，梁松，等.新劑型殺螟丹對魚類急性毒性的實(shí)驗(yàn)觀察[J].中國血吸蟲病防治雜志，2008，20（3）：217-218.

[5] 張科，劉寧，劉松懷，等.薄膜覆蓋法殺滅魚塘和溝渠釘螺的效果[J].中國血吸蟲病防治雜志，2011，23（6）：695-696.

[6] 朱丹，張儀，劉和香，等.HL殺滅湖北釘螺的效果觀察[J].中國人獸共患病學(xué)報(bào)，2009，25（2）：127-130.

[7] 戴建榮，梁幼生，李洪軍，等.氯硝柳胺懸浮劑的毒性評(píng)價(jià)[J].中國血吸蟲病防治雜志，2007，19（6）：45-47.

[8] 吳子松，張曉勝，徐亮，等.氯硝柳胺泥敷滅螺土壤殘留藥物對釘螺和魚類的毒性[J].中國血吸蟲病防治雜志，2008，20（6）：439-442.

[9] 祝紅慶，張貴榮，鐘波，等.氯硝柳胺加地膜覆蓋技術(shù)滅螺對魚毒性的觀察[J].中國血吸蟲病防治雜志，2011，23（1）：38-41.

[10] 李葉芳，王琳，神學(xué)慧，等.高濃度氯硝柳胺懸浮劑噴霧滅螺效果[J].中國血吸蟲病防治雜志，2008，20（6）：435-437.

[11] 李潔，錢萬紅.吡喃異黃酮Alpinumisoflavone的滅螺活性研究[J].中國血吸蟲病防治雜志，2007，19（2）：F0003.

[12] 張文彤，閆潔.SPSS統(tǒng)計(jì)分析基礎(chǔ)教程[M].北京：高等教育出版社，2004：302-324.

[13] 吳鋒，姜玉驥，奚偉萍，等.硼鎂石粉持效滅螺實(shí)驗(yàn)研究[J].中國寄生蟲病防治雜志，2004，17（6）：356-357.

[14] 李幼子，戴建榮.殺滅釘螺藥物的研究進(jìn)展[J].中國人獸共患病學(xué)報(bào)，2011，27（7）：653-656.

[15] 劉年猛，黃瓊瑤，彭飛，等.血水草生物堿聯(lián)合氯硝柳胺殺螺增效作用研究[J].中國血吸蟲病防治雜志，2006，18（2）：143-145.

[16] Yuan Y，Xu XJ，Dong HF，et al.Transmission control of schistosomiasis japonica：implemention and evaluation of different snail control interventions[J].Acta Tropica，2005，96（2-3）：191-197.