張?jiān)伱罚◤埣腋凼兄嗅t(yī)醫(yī)院，江蘇張家港 215600）

復(fù)方曲安奈德乳膏為我院自制制劑，由醋酸曲安奈德、鹽酸苯海拉明、硝酸咪康唑等制成。本品具有抗真菌感染作用，主要用于濕疹、神經(jīng)性皮炎、股癬、體癬等。由于原制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)無“含量測(cè)定”項(xiàng)，為了提高該制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，保障用藥安全有效，本文選擇其中的醋酸曲安奈德、鹽酸苯海拉明和硝酸咪康唑?yàn)橹笜?biāo)，建立了反相高效液相色譜（RP-HPLC）法同時(shí)測(cè)定制劑中3種組分含量的方法。結(jié)果表明，建立的方法方便、快速、準(zhǔn)確，可用于測(cè)定復(fù)方曲安奈德乳膏中醋酸曲安奈德、鹽酸苯海拉明和硝酸咪康唑的含量。

1 材料

e2695HPLC儀、2998二極管陣列檢測(cè)器、Empower2色譜工作站（美國Waters公司）；Aux220電子分析天平（日本島津公司）；S20K臺(tái)式pH計(jì)[瑞士梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司]；SHB-ⅢA循環(huán)水式多用真空泵（上海豫康科教儀器設(shè)備有限公司）；HH-S21-4電熱恒溫水浴鍋（上海恒昌儀器廠）。

醋酸曲安奈德對(duì)照品（批號(hào)：100125-201105，供含量測(cè)定用）、鹽酸苯海拉明對(duì)照品（批號(hào)：100066-200807，供含量測(cè)定用）、硝酸咪康唑?qū)φ掌罚ㄅ?hào)：100213-200705，供含量測(cè)定用）均來自中國食品藥品檢定研究院；復(fù)方曲安奈德乳膏（本院自制，批號(hào)：110330、110811、120206，規(guī)格：每盒20g；其中醋酸曲安奈德、鹽酸苯海拉明和硝酸咪康唑的含量分別為2.5、10、20mg/g）；甲醇為色譜純，水為娃哈哈純凈水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與色譜圖

色譜柱：SunFire C18（250mm×4.6mm；5μm）；流動(dòng)相：甲醇-水（每1000ml水加入三乙胺7ml，磷酸調(diào)pH為7.2）（70∶30，V/V），流速：1.0ml/min；檢測(cè)波長：230nm；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：10μl。

取“2.2”～“2.4”項(xiàng)下對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性對(duì)照溶液，進(jìn)樣分析，色譜見圖1。

2.2 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取醋酸曲安奈德對(duì)照品4.2mg，置于25ml量瓶內(nèi)，加甲醇完全溶解并定容至刻度，得0.168mg/ml的醋酸曲安奈德對(duì)照品溶液。精密稱取鹽酸苯海拉明對(duì)照品24.7mg，置于25ml量瓶內(nèi)，加甲醇完全溶解并定容至刻度，得0.988mg/ml的鹽酸苯海拉明對(duì)照品溶液。精密稱取硝酸咪康唑?qū)φ掌?4.9mg，置于25ml量瓶內(nèi)，加甲醇完全溶解并定容至刻度，得0.996mg/ml的硝酸咪康唑?qū)φ掌啡芤骸?/p>

2.3 供試品溶液的制備

圖1 高效液相色譜圖A.對(duì)照品溶液；B.供試品溶液；C.陰性對(duì)照溶液；1.醋酸曲安奈德；2.鹽酸苯海拉明；3.硝酸咪康唑Fig 1 HPLC chromatogramsA.reference solution；B.test solution；C.negative control solution；1.triamcinolone acetonide；2.diphenhydramine hydrochloride；3.miconazole nitrate

取復(fù)方曲安奈德乳膏約1g，精密稱定，置于錐形瓶內(nèi)，加甲醇30ml，于80℃水浴中溶解，全量轉(zhuǎn)移至50ml量瓶內(nèi)，放冷，用甲醇定容至刻度，置于冰浴中冷卻2h；過濾，取續(xù)濾液5ml置于10ml量瓶內(nèi)，用甲醇定容至刻度，搖勻，用0.45μm微孔濾膜過濾，以續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.4 陰性對(duì)照溶液的制備及專屬性試驗(yàn)

按本品處方與制備工藝，制備不含醋酸曲安奈德、鹽酸苯海拉明和硝酸咪康唑的陰性對(duì)照品，按“2.3”項(xiàng)下方法制備，得陰性對(duì)照溶液。

進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果見圖1C，可見陰性對(duì)照溶液在與對(duì)照品峰相應(yīng)的保留時(shí)間處無色譜峰，表明其他成分和基質(zhì)對(duì)目標(biāo)成分測(cè)定無干擾，該方法專屬性好。

2.5 線性關(guān)系考察

精密吸取等量（0.5、1、1.5、2、2.5、3ml）0.168mg/ml的醋酸曲安奈德對(duì)照品溶液、0.988mg/ml的鹽酸苯海拉明對(duì)照品溶液和0.996mg/ml的硝酸咪康唑?qū)φ掌啡芤海糜?0ml量瓶，加甲醇定容至刻度，得到分別含醋酸曲安奈德0.0084、0.0168、0.0252、0.0336、0.0420、0.0504mg/ml，鹽酸苯海拉明0.0494、0.0988、0.1482、0.1976、0.2470、0.2964mg/ml和硝酸咪康唑0.0498、0.0996、0.1494、0.1992、0.2490、0.2988mg/ml的系列混合對(duì)照品溶液。分別精密吸取10μl進(jìn)樣，測(cè)定，以峰面積積分值（y）為縱坐標(biāo)、進(jìn)樣質(zhì)量濃度（x）為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得醋酸曲安奈德回歸方程為y＝1232714.115x－9141.366（r＝0.9997），鹽酸苯海拉明回歸方程為y＝541882.012x+38862（r＝0.9997），硝酸咪康唑回歸方程為y＝95876x+53086（r＝0.9998）。結(jié)果表明，醋酸曲安奈德、鹽酸苯海拉明和硝酸咪康唑檢測(cè)質(zhì)量濃度線性范圍分別為0.0084～0.0504、0.0494～0.2964、0.0498～0.2988mg/ml。

2.6 精密度試驗(yàn)

將3種對(duì)照品溶液混合后取10μl進(jìn)樣，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定。結(jié)果，醋酸曲安奈德、鹽酸苯海拉明和硝酸咪康唑的RSD分別為1.9%、1.5%、1.0%，表明方法精密度良好。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批號(hào)（批號(hào)：110330）樣品6份，按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果醋酸曲安奈德、鹽酸苯海拉明和硝酸咪康唑含量的RSD分別為1.7%、1.3%、0.6%，表明方法重復(fù)性好。

2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一批號(hào)（110330）供試品溶液，分別于配制后的0、2、4、8、12、24h，精密吸取10μl進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果，醋酸曲安奈德、鹽酸苯海拉明和硝酸咪康唑含量的RSD分別為1.7%、1.9%、1.0%，表明供試品溶液中3種組分在24h內(nèi)是穩(wěn)定的。

2.9 加樣回收率試驗(yàn)

采用加樣回收試驗(yàn)方法，取批號(hào)為110330（醋酸曲安奈德2.60mg/g，鹽酸苯海拉明10.19mg/g，硝酸咪康唑19.47mg/g）的樣品0.5g，精密稱定，分別按樣品濃度的80%、100%、120%加入對(duì)照品，各平行3份，按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果（n＝9）Tab 1Results of recovery test（n＝9）

2.10 樣品含量測(cè)定

按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，測(cè)定3批樣品（批號(hào)分別為110330、110811、120206）的含量。結(jié)果3批樣品中醋酸曲安奈德的含量分別為2.49、2.55、2.41mg/g，平均值為2.48mg/g；鹽酸苯海拉明的含量分別為9.97、10.00、9.86mg/g，平均值為9.94mg/g；硝酸咪康唑的含量分別為18.72、19.76、19.77mg/g，平均值為19.42mg/g。醋酸曲安奈德、鹽酸苯海拉明和硝酸咪康唑占標(biāo)示量百分比平均值分別為99.2%、99.4%、97.1%。

3 討論

（1）根據(jù)文獻(xiàn)，有水-甲醇-四氫呋喃（60∶28∶12）[1]、甲醇-水（75∶25）[2]、甲醇-乙腈-0.15%醋酸銨（45∶35∶20）[3]、甲醇-水相（三乙胺2ml，加水至 300ml，磷酸調(diào) pH至 7.6）（70∶30）[4]、0.5%三乙胺（用醋酸調(diào)pH至3）-甲醇（50∶50）[5]等不同組成、不同比例的流動(dòng)相可用于檢測(cè)曲安奈德。筆者通過比較不同流動(dòng)相的分離結(jié)果，最終確定了甲醇-水（每1000ml加入三乙胺7ml，磷酸調(diào)pH為7.2）（70∶30）為流動(dòng)相。結(jié)果顯示，在此流動(dòng)相下，陰性對(duì)照溶液對(duì)目標(biāo)成分未見干擾，加樣回收率符合要求；流動(dòng)相中加入三乙胺以及用磷酸調(diào)節(jié)pH可以顯著改善色譜圖的峰形。

（2）通過全波長掃描，發(fā)現(xiàn)醋酸曲安奈德在240nm波長處吸光度值最大，但是鹽酸苯海拉明、硝酸咪康唑在此波長下吸光度值較??；而當(dāng)選擇230nm波長時(shí)，三者均有較好的吸收，故選擇230nm為檢測(cè)波長。

（3）本試驗(yàn)結(jié)果表明所建立的方法方便、快速、準(zhǔn)確。由于復(fù)方曲安奈德乳膏原有的制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中無“含量測(cè)定”項(xiàng)，本試驗(yàn)方法的建立可提高本品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，保障臨床用藥安全、有效。

[1] 黃興漢，費(fèi)路華，陸春游.HPLC法測(cè)定復(fù)方醋酸曲安奈德乳膏的含量[J].中國藥師，2011，14（1）：89.

[2] 陸興義.HPLC法測(cè)定醋酸曲安奈德乳膏中醋酸曲安奈德的含量[J].藥物分析雜志，2007，27（10）：1652.

[3] 陳文，田勇，周偉.HPLC法測(cè)定復(fù)方硝酸咪康唑乳膏中3組分的含量[J].中國藥房，2009，20（4）：292.

[4] 費(fèi)路華，聶小春.高效液相色譜法測(cè)定復(fù)方健療霜中三組分含量[J].藥物分析雜志，1999，19（3）：165.

[5] 劉百義.派瑞松乳膏中曲安奈德和硝酸益康唑的含量測(cè)定[J].中國藥業(yè)，2009，18（7）：26.