劉勝春，趙學剛，馮雅慧，康海霞，滑千里，王乃浩（1.河北省中醫(yī)院，石家莊050011；.河北奧星集團藥業(yè)有限公司，石家莊 050700）

福爾可定是中樞性鎮(zhèn)咳藥，與磷酸可待因具有相似的中樞性鎮(zhèn)咳作用，也有鎮(zhèn)靜和鎮(zhèn)痛作用，但成癮性較磷酸可待因弱，常用于劇烈干咳和中度疼痛。臨床上已有的制劑有福爾可定片、復方福爾可定糖漿、復方福爾可定口服溶液。新生兒和兒童易于耐受此藥，不會引起便秘和消化紊亂[1]。根據(jù)河北奧星集團藥業(yè)有限公司提供的福爾可定及其合成起始原料的工藝路線得知，福爾可定原料藥在合成過程中使用了甲醇、乙醇、苯、丁醇、甲苯5種有機溶劑，這些溶劑對人體健康和環(huán)境可造成危害。為了保證藥品的安全，筆者建立了福爾可定原料藥中5種有機溶劑殘留量的檢查方法。筆者根據(jù)2010年版《中國藥典》（二部）[2]的相關規(guī)定和人用藥品注冊技術規(guī)范的國際協(xié)調(diào)會（ICH）指導原則[3]，同時參考文獻[4]方法以0.25mol/L硫酸溶液為介質(zhì)，采用頂空毛細管氣相色譜法，同時測定上述5種有機溶劑的殘留量。結(jié)果表明，建立的方法快速、靈敏、準確，可用于福爾可定原料藥中有機溶劑殘留量的測定。

1 材料

1.1 儀器

6890N氣相色譜儀、7694E頂空進樣器（美國Agilent公司）；CPA225D電子天平（德國Sartorius公司）。

1.2 藥品與試劑

福爾可定原料藥（河北奧星集團藥業(yè)有限公司，批號：061101、061102、061103，純度：99.87%、99.88%、99.87%）；甲醇、乙醇、苯、丁醇、甲苯均為分析純（含量：均＞99%），水為純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：DB-624毛細管柱（30m×530μm，3μm）；柱溫：80℃維持7min，以15℃/min的速率升至120℃，維持10min；檢測器：氫火焰離子化檢測器（FID），檢測器溫度：250℃；分流進樣，分流比：1∶1；進樣口溫度：200℃；載氣：氮氣，流速：3.0ml/min；頂空進樣，平衡溫度：85℃，平衡時間：30min，頂空瓶加壓時間：0.2min，進樣時間：1min，定量環(huán)體積：1ml，定量環(huán)溫度：95℃，傳輸線溫度：105℃。

2.2 專屬性試驗

分別取甲醇、乙醇、苯、丁醇、甲苯、N，N-二甲基甲酰胺（DMF）制備成單獨的對照品溶液和“2.3.2”項下的對照品混合溶液，分別按“2.1”項下條件頂空進樣，記錄色譜圖。結(jié)果，出峰順序依次為甲醇、乙醇、苯、丁醇、甲苯、DMF；取福爾可定原料藥約0.5g，精密稱定，置于20ml頂空瓶中，精密加入0.25 mol/L硫酸溶液5ml，密封，振搖使溶解，作為供試品溶液。頂空進樣，記錄色譜圖。結(jié)果各有機溶劑間的分離良好，專屬性良好。6種有機溶劑的色譜圖見圖1A，混合溶液色譜圖見圖1B，供試品溶液色譜圖見圖1C。

圖1 專屬性試驗氣相色譜圖A.溶劑對照品溶液；B.對照品混合溶液；C.供試品溶液；1.甲醇；2.乙醇；3.苯；4.丁醇；5.甲苯；6.DMFFig 1 GC chromatograms of specificity testA.control solutions；B.mixed control solutions；C.test samples solution；1.methanol；2.ethanol；3.benzene； 4.butanol；5.toluene；6.DMF

2.3 溶液的制備

2.3.1 對照品混合貯備液。精密稱取甲醇3000mg、乙醇5000mg、丁醇5000mg、苯2mg、甲苯890mg，置于同一100ml量瓶中，加入體積分數(shù)50%的DMF水溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密量取上述溶液5ml，置于50ml量瓶中，用0.25mol/L硫酸溶液稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.3.2 對照品混合溶液。精密量取對照品混合貯備液5ml，置于50ml量瓶中，用0.25mol/L硫酸溶液稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.4 線性關系考察

精密量取對照品混合貯備液1、2、4、5、6、7ml，分別置于50ml量瓶中，用0.25mol/L硫酸溶液稀釋至刻度，搖勻。進樣分析，以峰面積（y）為縱坐標、樣品質(zhì)量濃度（x）為橫坐標，進行線性回歸，結(jié)果見表1。

表1 各溶劑線性關系Tab 1 Linear relationship of each solvents

2.5 精密度試驗

精密量取對照品混合溶液5ml，置于20ml頂空瓶中，共6份，密封；進樣分析，計算甲醇、乙醇、苯、丁醇、甲苯的峰面積的RSD值分別為4.59%、4.01%、3.49%、3.57%、4.01%，均小于10%，表明精密度良好。

2.6 回收率試驗

取樣品約0.5g，精密稱定，置于20ml頂空瓶中，共9份；分別精密量取對照品混合貯備液0.8、1.0、1.2ml，各3份，置于10ml量瓶中，再用0.25mol/L硫酸溶液稀釋至刻度，搖勻。分別精密量取9份溶液各5ml，分別置于上述20ml頂空瓶中，密封，分析、測定。結(jié)果表明，測定方法準確可靠，詳見表2。

表2 回收率試驗結(jié)果（n＝3）Tab 2Results of recovery tests（n＝3）

2.7 穩(wěn)定性試驗

精密量取對照品混合溶液5ml，分別置于20ml頂空瓶中，密封，于室溫下放置0、1、4、8、12h，進樣分析，記錄色譜圖。結(jié)果，甲醇、乙醇、苯、丁醇、甲苯在12h測定的峰面積的RSD分別為1.43%、1.36%、3.29%、1.21%、2.69%，表明溶液均在12h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 定量限試驗

取對照品混合溶液逐步稀釋，然后頂空進樣，以峰高為基線噪聲的10倍計算，結(jié)果甲醇、乙醇、苯、丁醇、甲苯的定量限分別為0.5、0.5、0.02、0.08、0.5μg/ml。

2.9 耐用性試驗

將對照品混合溶液按照改變柱溫起始溫度（±5℃）、載氣柱流速（±1.0ml/min），分別頂空進樣分析，記錄色譜圖，分別考察甲醇、乙醇、苯、丁醇、甲苯在不同條件下的分離度。結(jié)果表明分離度均符合方法學要求，耐用性良好。

2.10 樣品有機溶劑殘留量測定及限度的確定

取3批樣品制備成供試品溶液，按外標法計算5種有機溶劑的含量。結(jié)果3批樣品中甲醇的殘留量均為0.02%，乙醇的殘留量均為0.05%，苯、丁醇、甲苯均未檢出。

根據(jù)ICH指導原則和2010年版《中國藥典》（二部）殘留溶劑限度和樣品的實測結(jié)果，將甲醇、乙醇、苯、丁醇、甲苯的檢查均納入質(zhì)量標準之中，限度分別為0.3%、0.5%、0.0002%、0.5%、0.089%。

3 討論

3.1 進樣方法的選擇

筆者根據(jù)殘留溶劑測定的推薦方法，首選毛細管色譜柱-頂空進樣系統(tǒng)，首先因為頂空分析法操作簡單，只取氣相部分進行分析，因此大大減少了樣品基質(zhì)對分析的干擾；其次，頂空分析有不同模式，可以通過優(yōu)化操作參數(shù)而適合于各種樣品；第三，頂空分析的靈敏度能滿足方法學的要求；最后，頂空氣相色譜完全能夠進行準確的定量分析。

3.2 介質(zhì)的選擇

因為福爾可定略溶于水，為了使樣品完全溶解，筆者選用了無揮發(fā)性的硫酸溶液為介質(zhì)（頂空進樣中不能使用揮發(fā)性的酸，對色譜柱有損害）；并且對硫酸溶液的濃度進行篩選，確定最低濃度為0.25mol/L。

3.3 色譜柱的選擇

筆者先后考察了HP-5、FFAP、DB-624等不同極性的色譜柱，結(jié)果以在DB-624色譜柱上的峰形和分離度最佳，因此最終選擇DB-624色譜柱作為本次試驗的色譜柱。

3.4 頂空溫度的選擇

參照2010年版《中國藥典》（二部）附錄ⅧP殘留溶劑測定法項下內(nèi)容[2]，并參考ICH指導原則，考察了不同的頂空平衡溫度對樣品測定的影響，結(jié)果詳見表3。

表3結(jié)果表明，隨著溫度的升高，苯和甲苯的峰面積減少，甲醇、乙醇、丁醇峰面積則增大。為了提高檢測靈敏度，同時考慮到甲苯的響應值過大也會影響到檢測的準確性，因此選擇85℃作為頂空平衡溫度。

表3 平衡溫度考察結(jié)果Tab 3 Results of equilibrium temperature inspection

[1] 陳新謙，金有豫，湯光.新編藥物學[M].17版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2007：427.

[2] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：二部[S].2010年版.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：1092、附錄61-65.

[3] 周海鈞.藥品注冊的國際技術要求：質(zhì)量部分[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2007：126.

[4] 陳寧，陳朝艷.頂空氣相色譜法測定頭孢替坦二鈉中的殘留溶劑[J].中國抗生素雜志，2010，36（11）：849.