張迪，姜梅，郭宏偉，李沫，李尚穎，孫苓苓#（.遼寧省食品藥品檢驗(yàn)所，沈陽(yáng)003；.沈陽(yáng)市藥品檢驗(yàn)所，沈陽(yáng) 000）

脂質(zhì)體作為藥物載體具有使藥物帶有靶向性、降低藥物毒性、提高藥物穩(wěn)定性等特點(diǎn)[1]，而其包封率是評(píng)價(jià)這類(lèi)制劑質(zhì)量的重要指標(biāo)。常用的脂質(zhì)體與游離藥物的分離方法有：葡聚糖凝膠過(guò)濾法[2-3]、超速離心法[4]、超濾膜過(guò)濾法、超濾離心法等，而本文的研究對(duì)象來(lái)自某企業(yè)研制的復(fù)方氟尿嘧啶注射液為一種多相脂質(zhì)體，準(zhǔn)確測(cè)定其包封率有一定的困難。為建立其科學(xué)、合理的包封率測(cè)定方法，筆者試驗(yàn)了超濾離心法測(cè)定該制劑的包封率，同時(shí)進(jìn)行了方法學(xué)研究。結(jié)果表明，建立的方法操作簡(jiǎn)單，結(jié)果準(zhǔn)確、重復(fù)性好。

1 材料

1.1 儀器

2010型高效液相色譜（HPLC）儀（日本島津公司）；CP225D型十萬(wàn)分之一分析天平（德國(guó)Sartorius公司）；高速低溫離心機(jī)（日本日立公司）。

1.2 藥品與試劑

復(fù)方氟尿嘧啶注射液（A企業(yè)，小試樣品，批號(hào)：20100601、20100602、20100603，規(guī)格：10ml∶40mg）；氟尿嘧啶對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：100187-200602，純度：100.0%）；甲醇為色譜純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件[5]

用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑（200mm×4.6mm，5μm）；以水（0.05mol/L磷酸溶液調(diào)節(jié)pH 值至3.5）-甲醇（95∶5）為流動(dòng)相，流速為1.0ml/min；紫外檢測(cè)波長(zhǎng)為265nm；柱溫為35℃；進(jìn)樣量為10μl。

2.2 線(xiàn)性關(guān)系考察

精密稱(chēng)取氟尿嘧啶對(duì)照品9.73mg，置于25ml量瓶中，加甲醇15ml使溶解，加水稀釋至刻度，搖勻；精密量取0.1、0.2、0.5、1、2、5ml，分別置于10ml量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻。分別精密量取10μl注入色譜儀，記錄峰面積。以氟尿嘧啶峰面積（y）為縱坐標(biāo)、質(zhì)量濃度（x）為橫坐標(biāo)進(jìn)行線(xiàn)性回歸，得y＝3×106x+33186（r＝0.9999，n＝6）。結(jié)果表明，氟尿嘧啶檢測(cè)質(zhì)量濃度線(xiàn)性范圍為3.892～194.6μg/ml。

2.3 精密度試驗(yàn)

取同一對(duì)照品溶液進(jìn)樣，每次10μl，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定氟尿嘧啶峰面積RSD＝0.1%。

2.4 專(zhuān)屬性試驗(yàn)

按處方取相當(dāng)于10ml注射液的其他原輔料（除氟尿嘧啶外），置于100ml量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)。取續(xù)濾液，進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果表明，其他原輔料對(duì)氟尿嘧啶的測(cè)定無(wú)干擾，色譜見(jiàn)圖1A。

圖1 高效液相色譜圖A.輔料；B.供試品；C.對(duì)照品；1.氟尿嘧啶Fig 1 HPLC chromatogramsA.recipients；B.test sample；C.substance control；1.fluorouracil

2.5 對(duì)空白脂質(zhì)體透過(guò)能力的考察

取空白脂質(zhì)體適量，分別置于100kD和3kD截留分子質(zhì)量的超濾離心管中，10000r/min離心30min，采用HPLC-蒸發(fā)光散射（ELSD）法測(cè)定續(xù)濾液中磷脂酰膽堿的含量[6]。結(jié)果表明，濾液中均未檢測(cè)到磷脂酰膽堿，說(shuō)明2種超濾離心管均可以完全截留脂質(zhì)體，且離心方法不會(huì)破壞脂質(zhì)體。

2.6 游離藥物的回收率

精密量取空白脂質(zhì)體（A企業(yè)提供，取除氟尿嘧啶外的原輔料，照生產(chǎn)工藝同法制備）10ml，置于具塞試管中，加入相當(dāng)于處方量50%、100%和150%的氟尿嘧啶對(duì)照品各3份，精密稱(chēng)定，反復(fù)翻轉(zhuǎn)至氟尿嘧啶全部溶解。用100kD截留分子質(zhì)量的超濾離心管，10000r/min離心30min。各精密量取續(xù)濾液1ml，置于100ml量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻。精密量取濾液10μl注入色譜儀，記錄色譜圖，以外標(biāo)法計(jì)算回收率。結(jié)果表明，超濾離心管對(duì)樣品無(wú)吸附，回收率符合規(guī)定，詳見(jiàn)表1。

2.7 截留分子質(zhì)量的選擇

取“2.6”項(xiàng)下試驗(yàn)樣品，另采用3kD截留分子質(zhì)量的超濾離心管，同法操作，計(jì)算回收率。結(jié)果表明，3kD截留分子質(zhì)量的超濾離心管也對(duì)測(cè)定結(jié)果無(wú)影響，詳見(jiàn)表1。說(shuō)明2種超濾離心管均可。本方法選用100kD的超濾離心管。

2.8 重復(fù)性試驗(yàn)

精密量取本品1ml，共6份，用100kD截留分子質(zhì)量的超濾離心管，10000r/min離心30min。精密量取濾液1ml，置于100ml量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻。精密量取10μl注入色譜儀，記錄色譜圖，結(jié)果峰面積的RSD＝0.8%。表明本方法重復(fù)性良好。

2.9 藥物總量的測(cè)定[7]

精密量取本品1ml，置于100ml量瓶中，加甲醇10ml使溶解，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻。經(jīng)0.45μm濾膜濾過(guò)后取續(xù)濾液10μl注入色譜儀，記錄色譜圖。

2.10 包封率測(cè)定方法

取本品，用100kD截留分子質(zhì)量的超濾離心管，10000r/min離心30min；精密量取濾液1ml，置于100ml量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻。取10μl注入色譜儀，記錄色譜圖，得峰面積為A；同時(shí)精密量取本品1ml，照“2.9”項(xiàng)下方法進(jìn)樣測(cè)定，得峰面積為B，按公式[（B－A）/B×100%]計(jì)算包封率。

表1 2種超濾離心管條件下的回收試驗(yàn)結(jié)果（n＝9）Tal 1 Results of recovery tests by 2kinds of ultrafiltration centrifuge tube（n＝9）

2.11 2種方法包封率的測(cè)定

（1）按照“2.10”項(xiàng)下方法，取復(fù)方氟尿嘧啶注射液適量，測(cè)定包封率。結(jié)果，3批樣品包封率分別為9.1%、8.8%和8.7%，對(duì)照品及供試品色譜圖見(jiàn)圖1B、C。

（2）采用原標(biāo)準(zhǔn)方法[8]，精密量取本品10ml，采用超速低溫離心法[18000r/min，溫度（10±2）℃]離心15min，吸取脂質(zhì)體層，置于10ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻；精密量取1ml，置于50ml量瓶中，用甲醇-水（1∶5）溶液稀釋至刻度，搖勻，照HPLC法[2010年版《中國(guó)藥典》（二部）附錄ⅤD][5]試驗(yàn)。用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇-水-三乙胺（16∶84∶0.2）為流動(dòng)相，用80%磷酸溶液調(diào)節(jié)pH值至4.0，檢測(cè)波長(zhǎng)為266nm。取10μl注入色譜儀，記錄色譜圖，得峰面積為A′；同時(shí)精密量取本品1ml，置于50ml量瓶中，按上述方法自“用甲醇-水（1∶5）的溶液稀釋至刻度”起，同法操作，得峰面積為B′，按公式（A′/B′×100%）計(jì)算[8]包封率分別為30.8%、31.6%和28.3%。

3 討論

由于氟尿嘧啶為親水性物質(zhì)，在生產(chǎn)及貯存過(guò)程中易發(fā)生滲漏現(xiàn)象。該品種的含量測(cè)定結(jié)果[7]符合質(zhì)量要求，但包封率均不高，而采用本方法測(cè)定其包封率也僅約為10%。

原標(biāo)準(zhǔn)[8]采用超速低溫離心法，經(jīng)試驗(yàn)，采用該方法無(wú)法將本品的外水相和脂質(zhì)體完全分離，上清液不澄清；且離心后脂質(zhì)體間易包裹部分外水相，導(dǎo)致測(cè)定的結(jié)果偏高（約30%），無(wú)法準(zhǔn)確地反映產(chǎn)品質(zhì)量。如果選用葡聚糖凝膠過(guò)濾法，脂質(zhì)體在分子篩間篩選的過(guò)程中容易破裂，致使已包裹在脂質(zhì)體中的藥物溢出至外水相，導(dǎo)致包封率測(cè)定結(jié)果偏低，甚至是零。故最終選定超濾離心法作為測(cè)定方法。

超濾離心法是以壓差為動(dòng)力的膜分離技術(shù)，利用特定截留分子質(zhì)量的濾膜使游離藥物被過(guò)濾而脂質(zhì)體被截留，從而使脂質(zhì)體與游離藥物分離。通過(guò)對(duì)空白脂質(zhì)體透過(guò)能力的考察，結(jié)果表明該方法可完全截留脂質(zhì)體，且不會(huì)破壞脂質(zhì)體，保證了測(cè)定結(jié)果的可靠性。游離藥物的回收率試驗(yàn)結(jié)果表明，該方法不會(huì)對(duì)游離藥物造成吸附，可準(zhǔn)確測(cè)定游離藥物的含量。

綜上所述，本文建立的方法可方便、準(zhǔn)確地測(cè)定復(fù)方氟尿嘧啶注射液的包封率。

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