陳 博，張 莉，周 維，蘭昌云，徐 飛（重慶華邦制藥股份有限公司，重慶 401121）

異福片收載于2010年版《中國(guó)藥典》（二部）[1]，是治療肺結(jié)核病的臨床常用藥，主要成分為利福平和異煙肼。因利福平和異煙肼在水分影響下會(huì)快速降解，故目前大多數(shù)藥廠采用干法制粒工藝制備異福片，但該工藝存在生產(chǎn)效率低、粉塵污染嚴(yán)重等問題。筆者采用熔融制粒工藝替代干法制粒工藝，試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)采用前者制備產(chǎn)品，對(duì)其質(zhì)量無顯著影響，并明顯改善了生產(chǎn)效率，且工藝穩(wěn)定、重現(xiàn)性良好，避免了干法制粒帶來的粉塵污染問題，有利于生產(chǎn)操作人員的健康。由于原工藝對(duì)主藥含量進(jìn)行了嚴(yán)格控制，故此筆者主要考察利福平及醌式利福平、N-氧化利福平、利福霉素SV、異煙腙5種物質(zhì)的情況。

1 材料

1.1 儀器

DHG-9245A型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（浙江新豐醫(yī)療器械有限公司）；FG-15B型沸騰干燥器、LYK-160型搖擺制粒機(jī)（重慶南方制藥械廠）；ZPS008型旋轉(zhuǎn)式壓片機(jī)（上海天祥健臺(tái)制藥機(jī)械有限公司）；BG10D型高效包衣機(jī)（北京航空制造工程研究所）；島津LC-2010A高效液相色譜儀及紫外檢測(cè)器[島津企業(yè)管理（中國(guó)）有限公司]。

1.2 藥品與試劑

異福片[原干法工藝，自制，批號(hào)：2012005、2012008，規(guī)格：0.45g（含利福平0.3g、異煙肼0.15g）]；異福片[新工藝，自制，批號(hào)：20120601、20120602、20120701，規(guī)格：0.45g（含利福平0.3g、異煙肼0.15g）]；利福平原料藥（沈陽(yáng)抗生素廠，批號(hào)：201204007，純度：98.8%）；異煙肼原料藥（天津漢德威藥業(yè)有限公司，批號(hào)：T2012033，純度：99.3%）；聚乙二醇4000（PEG4000）、聚乙二醇6000（PEG6000）（南京威爾化工有限公司）；共聚維酮（深圳市優(yōu)普惠藥品有限公司）；交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮（PVPP）（上海昌為醫(yī)藥輔料技術(shù)有限公司）；硬脂酸鎂（湖州展望藥業(yè)有限公司）；利福平對(duì)照品（批號(hào)：130496-200702，純度：98.0%）、異煙肼對(duì)照品（批號(hào)：100578-200401，純度：99.7%）、醌式利福平對(duì)照品（批號(hào)：130413-201104，純度：＞99.0%）、N-氧化利福平對(duì)照品（批號(hào)：130522-201102，純度：＞99.0%）、利福霉素SV對(duì)照品（批號(hào)：0333-200006，純度：＞99.0%）均來自中國(guó)食品藥品檢定研究院；異煙腙對(duì)照品（自制，純度：99.1%）。

2 處方工藝研究

2.1 處方研究

參考原干法工藝處方設(shè)計(jì)處方，重點(diǎn)對(duì)熔融黏合劑種類及用量進(jìn)行了篩選及優(yōu)化，主要以片劑脆碎度及溶出度為考察指標(biāo)。處方篩選結(jié)果見表1。

表1 處方篩選結(jié)果Tab 1 Results of formulation optimization

預(yù)試前期片劑脆碎度和溶出度均不合格，分析由于處方中PEG黏性不足，導(dǎo)致片劑剛性較差，且PEG用量越多剛性越差。因此加入共聚維酮作為輔助黏合劑，同時(shí)適當(dāng)減少PEG4000用量，并增加PVPP用量，解決了脆碎度和溶出度不合格的問題。因采用PEG4000制備的素片包衣過程中出現(xiàn)變軟現(xiàn)象，故選擇了具有更高熔點(diǎn)的PEG6000予以改善。

最終確定的基礎(chǔ)處方為：每片含利福平300mg，異煙肼150mg，PEG600080mg，共聚維酮10mg，PVPP 20mg，硬脂酸鎂5mg，制成100片。

2.2 工藝研究

熔融制粒工藝主要原理是采用固體黏合劑與物料混合，具體為黏合劑在制備過程中受熱產(chǎn)生黏合力，從而黏合物料制成顆粒[2]。選擇熔融制粒工藝，主要看重該工藝可以黏合物料，避免制備過程中物料粉塵飛揚(yáng)及設(shè)備吸附，同時(shí)整個(gè)過程無水參與，對(duì)產(chǎn)品穩(wěn)定性有利。

熔融制粒最重要的環(huán)節(jié)就是固體黏合劑受熱熔融，初期采用烘箱干燥方式加熱物料。在試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，若控制溫度在60℃時(shí)，主藥與PEG6000（熔點(diǎn)：53～58℃）的混合粉末溫度上升緩慢，2h也未見完全熔融；而升高溫度至80℃，需45min可完全熔融；繼續(xù)升溫至100℃，20min即可完全熔融。雖然高溫可以加快熔融速度，提高生產(chǎn)效率，但過高的溫度對(duì)產(chǎn)品質(zhì)量可能存在一定影響，所以選擇適宜的熔融溫度是該工藝的研究重點(diǎn)。

取主藥與PEG6000適量，混合均勻，分別置于80℃和100℃加熱1h，制粒壓片，用聚氯乙烯（PVC）硬片+PTP鋁箔+雙鋁復(fù)合膜包裝后置于60℃下考察。溫度考察試驗(yàn)結(jié)果見表2。

由表2可見，過高溫度進(jìn)行熔融制粒對(duì)樣品質(zhì)量確有一定影響，因此宜將熔融時(shí)溫度控制在不超過80℃。但采用烘箱干燥有兩個(gè)問題，一是不僅熔融時(shí)間過長(zhǎng)，而且為避免物料受熱不均勻，加熱時(shí)需不時(shí)翻動(dòng)物料，操作麻煩且不安全；二是批量增大以后，不適合大生產(chǎn)。因此將工藝微調(diào)，由烘箱干燥改為沸騰干燥，因后者熱效率高，不僅可以降低加熱溫度，而且還縮短了熔融時(shí)間，便于大生產(chǎn)操作。

表2 溫度考察試驗(yàn)結(jié)果（%）Tab 2Results of temperature experiments（%）

最終確定工藝為（每片質(zhì)量）：將活性成分利福平300mg、異煙肼150mg與黏合劑PEG600080mg充分混合均勻后，置于沸騰干燥器中；設(shè)置風(fēng)機(jī)頻率30～40Hz，進(jìn)風(fēng)溫度設(shè)置為70℃，加熱使PEG6000熔融；待物料溫度達(dá)到60℃時(shí)，停止進(jìn)風(fēng)加熱，趁熱過16目篩制粒，放冷后整粒；再加入崩解劑PVPP 20mg、黏合劑共聚維酮10mg及潤(rùn)滑劑硬脂酸鎂5mg得中間品顆粒，壓片包衣即得成品，共5000片。

3 方法與結(jié)果

3.1 色譜條件

色譜柱：Kromasil C18（150mm×4.6mm，5μm）；流動(dòng)相：磷酸鹽緩沖液（0.01mol/L磷酸二氫鉀溶液，用0.01mol/L氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH值至7.0）-甲醇（40∶60），流速：1.0ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：254nm；進(jìn)樣量：20μl[3]。

3.2 溶液的制備

對(duì)照品溶液的制備：精密稱取利福平對(duì)照品適量，置于50ml量瓶中，加入流動(dòng)相稀釋制成每1ml中約含20μg利福平的溶液，作為對(duì)照品溶液；另精密稱取醌式利福平、N-氧化利福平、利福霉素SV及異煙腙對(duì)照品適量，加流動(dòng)相溶解并制成每1ml中約含各成分各10μg的混合溶液，作為雜質(zhì)對(duì)照品溶液（臨用新制，避光操作）。

供試品溶液的制備：取同一批號(hào)的樣品10片，除去薄膜衣，研細(xì)，精密稱取約含利福平40mg的細(xì)粉，置于100ml量瓶中，取流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，迅速搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液（臨用新制，避光操作）。

空白溶液的制備：按處方量稱取不含利福平及異煙肼的其余輔料，照“2.2”項(xiàng)下最終確定工藝制備片劑，按供試品溶液的制備方法制備空白溶液。

3.3 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

分別取利福平、醌式利福平、N-氧化利福平、利福霉素SV以及異煙腙對(duì)照品適量，按“3.2”項(xiàng)下制備方法制成雜質(zhì)對(duì)照品溶液，作為系統(tǒng)適用性試驗(yàn)溶液，按“3.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定。結(jié)果，除N-氧化利福平峰與異煙腙峰外，其余各相鄰雜質(zhì)峰分離度均＞1.5，理論板數(shù)以利福平峰計(jì)不低于3000。

3.4 方法學(xué)考察

3.4.1 專屬性試驗(yàn)。精密稱取利福平對(duì)照品適量，按“3.2”項(xiàng)下制備對(duì)照品溶液和空白溶液，各取20μl注入液相色譜儀，照“3.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定。結(jié)果，在利福平保留時(shí)間相應(yīng)的位置無其他色譜峰出現(xiàn)，溶劑和輔料對(duì)測(cè)定無干擾，異煙肼在此色譜條件中不出峰。高效液相色譜見圖1。

圖1 高效液相色譜圖A.空白溶液；B.利福平對(duì)照品溶液；C.供試品溶液；1.N-氧化利福平；2.異煙腙；3.利福霉素SV；4.醌式利福平；5.利福平Fig 1 HPLC chromatogramsA.blank solution；B.rifampicin control solution；C.test sample solution；1.N-oxide rifampicin；2.isoniazone；3.rifamycin SV；4.rifampicin quinone；5.rifampin

精密稱取同一批號(hào)的樣品細(xì)粉適量（約相當(dāng)于利福平10mg），置于10ml量瓶中，按下列方法進(jìn)行破壞性試驗(yàn)：加入1mol/L鹽酸溶液0.5ml，混勻，80℃水浴鍋中放置1h，取出，放冷，加入2mol/L氫氧化鈉中和至pH值7.0，加流動(dòng)相稀釋至刻度，濾過，取續(xù)濾液作為酸降解溶液；加入1mol/L氫氧化鈉溶液0.5ml，混勻，80℃水浴鍋中放置1h，取出，放冷，加入2mol/L鹽酸中和至pH值7.0，加流動(dòng)相稀釋至刻度，濾過，取續(xù)濾液作為堿降解溶液；加入20%過氧化氫溶液1ml，80℃水浴鍋中放置1h，取出，放冷，加流動(dòng)相稀釋至刻度，濾過，取續(xù)濾液作為氧化降解溶液；置于80℃水浴中加熱1h，取出，放冷，加流動(dòng)相稀釋至刻度，濾過，取續(xù)濾液作為高溫降解溶液；置于照度為（4500±500）lx的強(qiáng)光下照射10d后，置于10ml量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，作為光降解溶液。同法制備空白溶液。吸取上述各降解溶液20μl，注入液相色譜儀測(cè)定。結(jié)果表明，該法能有效檢測(cè)出各破壞性試驗(yàn)產(chǎn)生的降解物，且溶劑和輔料對(duì)有關(guān)物質(zhì)測(cè)定無干擾。降解溶液高效液相色譜見圖2（因高溫和堿降解試驗(yàn)中未見明顯降解雜質(zhì)峰，故圖略）。

3.4.2 線性關(guān)系考察。分別精密稱取利福平、醌式利福平、N-氧化利福平、利福霉素SV和異煙腙對(duì)照品各20mg，置于100ml量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取各溶液5ml，置于50ml量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，制成每1ml中含各成分20μg溶液作為對(duì)照貯備液。精密量取上述利福平對(duì)照貯備液0.1、0.5、1、5和10ml，分別置于10ml量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，制成質(zhì)量濃度分別為0.2、1、2、10和20mg/L的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。

精密量取上述醌式利福平、N-氧化利福平、利福霉素SV和異煙腙對(duì)照貯備液0.1、0.5、1、2和5ml，分別置于10ml量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，制成質(zhì)量濃度分別為0.2、1、2、4和10mg/L的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。

圖2 降解溶液高效液相色譜圖A.氧化降解溶液；B.光降解溶液；C.酸降解溶液；1.N-氧化利福平；2.異煙腙；3.利福霉素SV；4.醌式利福平；5.利福平Fig 2 HPLC chromatograms of degraded solutionA.degraded by oxidation solution；B.degraded by illumination solution；C.degraded by acid solution；1.N-oxide rifampicin；2.isoniazone；3.rifamycin SV；4.rifampicin quinone；5.rifampin

取上述系列標(biāo)準(zhǔn)溶液適量，按質(zhì)量濃度從低到高的順序，照“3.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，記錄色譜圖。以質(zhì)量濃度（x）為橫坐標(biāo)、峰面積（y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行回歸，得線性方程如下：醌式利福平為y＝1024.1x－11.8（r＝0.99990）；利福霉素SV為y＝1435.3x－23.6（r＝0.99994）；N-氧化利福平為y＝2013.2x－12.3（r＝0.99995）；異煙腙為y＝1142.2x－54.1（r＝0.99991）；利福平為y＝3214.2x－215.1（r＝0.99993）。表明利福平檢測(cè)質(zhì)量濃度在0.2～20mg/L范圍內(nèi)與其峰面積積分值呈良好的線性關(guān)系。醌式利福平、利福霉素SV、N-氧化利福平和異煙腙檢測(cè)質(zhì)量濃度在0.2～10mg/L范圍內(nèi)與其峰面積積分值呈良好的線性關(guān)系。

3.4.3 定量限及檢測(cè)限確定。精密稱取利福平、醌式利福平、利福霉素SV、N-氧化利福平和異煙腙對(duì)照品適量，加流動(dòng)相逐步稀釋至信噪比約為10，進(jìn)樣20μl。結(jié)果，利福平、醌式利福平、利福霉素SV、N-氧化利福平和異煙腙定量限分別為0.26、0.30、0.31、0.22和0.23mg/L。繼續(xù)稀釋至信噪比約為3，進(jìn)樣20μl。結(jié)果，利福平、醌式利福平、利福霉素 SV、N-氧化利福平和異煙腙檢測(cè)限分別為0.12、0.15、0.15、0.11和0.11mg/L。

3.4.4 精密度試驗(yàn)。配制對(duì)照品溶液適量，各6份，分別進(jìn)樣20μl。結(jié)果，利福平、醌式利福平、利福霉素 SV、N-氧化利福平和異煙腙的RSD分別為1.73%、2.12%、1.54%、2.33%和2.67%（n＝6），表明儀器精密度良好。

3.4.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)。取同一供試品溶液及對(duì)照品溶液適量，在0、2、4、8、12、24h時(shí)分別進(jìn)樣20μl，記錄利福平峰面積。結(jié)果，RSD分別為0.63%和0.47%（n＝6），表明供試品溶液和對(duì)照品溶液在室溫放置24h內(nèi)均穩(wěn)定。

3.4.6 回收率試驗(yàn)。精密稱取同一批號(hào)的樣品細(xì)粉適量（約相當(dāng)于利福平50mg），置于100ml量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成每1ml中約含利福平0.2mg的溶液，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。取該供試品溶液2ml，共9份，每組3份，分別加入質(zhì)量濃度為2、4和8mg/L的醌式利福平、利福霉素SV、N-氧化利福平和異煙腙對(duì)照品溶液各1ml，進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算3個(gè)質(zhì)量濃度的平均回收率。結(jié)果平均回收率分別為：醌式利福平99.5%、利福霉素SV 99.8%、N-氧化利福平100.3%和異煙腙100.4%，RSD依次分別為2.11%、0.98%、1.37%和1.54%（n＝9）。

3.5 影響因素試驗(yàn)

取2批原干法工藝制備的異福片（批號(hào)：2012005、2012008）與3批新工藝制備的異福片（批號(hào)：20120601、20120602、20120701）置于高溫（60℃）中進(jìn)行10d影響因素試驗(yàn)（PVC硬片+PTP鋁箔+雙鋁復(fù)合袋包裝），試驗(yàn)結(jié)果見表3。

表3 影響因素試驗(yàn)結(jié)果（%）Tab 3Results of influential factor test（%）

由表3可見，兩種工藝所制備的產(chǎn)品質(zhì)量無明顯差異。

3.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

為進(jìn)一步考察兩種工藝制備的產(chǎn)品質(zhì)量，將“3.5”項(xiàng)下5批異福片置于40℃中進(jìn)行6個(gè)月加速穩(wěn)定性試驗(yàn)（PVC硬片+PTP鋁箔+雙鋁復(fù)合袋包裝），結(jié)果詳見表4。

由表4可見，兩種工藝所制備產(chǎn)品質(zhì)量無明顯差異。

4 討論

（1）干法制粒粉塵污染很大程度上是由于國(guó)內(nèi)現(xiàn)有干法制粒設(shè)備設(shè)計(jì)不合理造成。這些設(shè)備設(shè)計(jì)過于簡(jiǎn)單，未過多考慮粉塵問題，特別是在篩分環(huán)節(jié)，粉塵量巨大。由于異福片處方中多為細(xì)粉，生產(chǎn)過程中極易擴(kuò)散，且隨著生產(chǎn)過程中設(shè)備的振動(dòng)，又進(jìn)一步加大了粉塵產(chǎn)生及擴(kuò)散。大量細(xì)粉不僅影響車間環(huán)境，而且對(duì)操作人員健康不利，因此筆者進(jìn)行了工藝改進(jìn)。當(dāng)然，選用優(yōu)良的干法設(shè)備，控制干法制粒系統(tǒng)處于完全密封的環(huán)境，也可以減少生產(chǎn)過程中的粉塵污染，但鑒于目前較高的設(shè)備更換費(fèi)用，生產(chǎn)企業(yè)全面更換并不現(xiàn)實(shí)。熔融制粒為企業(yè)提供了多一種選擇。因此筆者認(rèn)為在目前環(huán)境下熔融制粒工藝是有其優(yōu)越性的。

（2）本次試驗(yàn)采用的是中試規(guī)模壓片機(jī)（8沖），且批量較?。?000片）。因PEG6000的熔點(diǎn)為53～58℃，所以大生產(chǎn)規(guī)模長(zhǎng)時(shí)間壓片后，高速壓片機(jī)（40沖）發(fā)熱有可能會(huì)導(dǎo)致PEG出現(xiàn)微熔現(xiàn)象，從而引起黏沖，這還需在今后大生產(chǎn)中進(jìn)一步考察優(yōu)化。

表4 穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果（%）Tab 4Results of stability test（%）

（3）除異福片外，異福酰胺片同理也可采用此工藝。該工藝不僅可作為此類品種的通用制備方法，也可適用于其他無熱敏性物料干法工藝品種的改進(jìn)。

（4）由于該制劑對(duì)濕不穩(wěn)定，所以生產(chǎn)一直采用鋁塑加雙鋁復(fù)合袋方式包裝。

根據(jù)我公司以往質(zhì)量研究經(jīng)驗(yàn)，本品主藥易降解，自身穩(wěn)定性較差，因此將有關(guān)物質(zhì)作為本文研究的重點(diǎn)。雖然試驗(yàn)同時(shí)對(duì)水分、含量、溶出度等其他質(zhì)量指標(biāo)也進(jìn)行了研究，但鑒于篇福未一一列出。本次試驗(yàn)旨在改進(jìn)制備工藝，并不對(duì)包材進(jìn)行篩選，因此仍然延用生產(chǎn)包裝進(jìn)行考察，此包裝條件可有效隔絕濕度對(duì)制劑的影響，故本次試驗(yàn)未考慮高濕條件對(duì)制劑的影響。

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典：二部[S].2010年版.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：297-298.

[2] 朱海彥，方增軍，孫杰，等.熱熔制粒在口服固體制劑中的應(yīng)用[J].中國(guó)現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)，2011，28（7）：623.

[3] 畢秀玲，錢小平，趙迎春，等.高效液相色譜法測(cè)定異福片中利福平含量[J].中國(guó)藥業(yè)，2013，22（2）：17.