楊柳，王愛武，苗杰，霍然，徐廣琪（1.山東大學附屬省立醫(yī)院藥劑科，濟南250021；2.山東中醫(yī)藥大學，濟南 250355；3.山東大學附屬省立醫(yī)院燒傷整形科，濟南 250021；4.山東大學醫(yī)學院，濟南250012）

鹽酸普萘洛爾為非選擇性競爭抑制腎上腺素β受體阻滯藥，臨床上可用于治療心絞痛、心律失常、高血壓等疾病[1]。自2008年，法國Bordeaux兒童醫(yī)院的Léauté-Labrèze C等[2]發(fā)現(xiàn)鹽酸普萘洛爾可用于血管瘤的治療后，大量臨床研究表明鹽酸普萘洛爾治療嬰幼兒血管瘤有效，能夠促進瘤體萎縮變薄[3]。目前國內(nèi)常用的有片劑和注射劑兩種劑型。但口服鹽酸普萘洛爾有可能導致低血糖、低血壓等不良反應，同時其大部分通過肝臟時被代謝，生物利用度差[4-5]；而外用制劑具有不受肝臟首關效應和腸胃道破壞影響、可直達病灶的獨特優(yōu)點。筆者在前期臨床研究[6]已證實鹽酸普萘洛爾外用對血管瘤有較好的療效。為了進一步優(yōu)化鹽酸普萘洛爾乳膏的處方和工藝，本試驗考察了氮酮、油酸、丙二醇、氮酮+油酸、氮酮+丙二醇、油酸+丙二醇6種透皮吸收促進劑對鹽酸普萘洛爾乳膏透皮吸收性能的影響，為其處方優(yōu)化提供參考。

1 材料

1.1 儀器

ZTY智能透皮試驗儀（河南省鞏義市科瑞儀器有限公司）；LC-2010AHT液相色譜儀（北京普析通用儀器有限公司）；BSA223S電子天平（北京賽多利斯科學儀器有限公司）。

1.2 藥品與試劑

鹽酸普萘洛爾原料藥（湖北興銀河化工有限公司，批號：20110712，純度：≥99%）；鹽酸普萘洛爾對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：100783-200401，純度：≥98%）；硬脂酸（山東金達雙鵬集團有限公司）；白凡士林（南昌白云藥業(yè)有限公司）；單硬脂酸甘油酯（杭州油脂化工有限公司）；聚山梨酯80（天津市紅巖化學試劑廠）；甘油（湖南爾康制藥有限公司）；羥苯乙酯（臺山市新寧制藥有限公司）；氮酮（天津市科密歐化學試劑有限公司）；油酸、丙二醇（天津市大茂化學試劑廠）；甲醇 為色譜純，庚烷磺酸鈉、磷酸二氫鉀均為分析純，水為生理鹽水。

1.3 動物

健康Wistar大鼠60只，♀♂各半，SPF級，體質(zhì)量175～225g，購于山東大學實驗動物中心，許可證號：SCXK（魯）2009000101。

2 方法與結果

2.1 供試品的制備

油相：110g硬脂酸，75g單硬脂酸甘油酯，100g白凡士林，20g透皮吸收促進劑；水相：30g聚山梨酯80，150g甘油，1g羥苯乙酯，20g鹽酸普萘洛爾原料藥，蒸餾水適量。將上述處方中的油相和水相分別加熱至（75±2）℃，將油相緩緩倒入水相中，邊加邊攪拌，分別制成含有2%氮酮、2%油酸、2%丙二醇、2%氮酮+2%油酸、2%氮酮+2%丙二醇、2%油酸+2%丙二醇的鹽酸普萘洛爾乳膏。同法制備不含透皮吸收促進劑的鹽酸普萘洛爾乳膏和不含鹽酸普萘洛爾原料藥的空白基質(zhì)。

2.2 離體皮膚的制備

將大鼠腹部脫毛，用濕紗布擦拭干凈，飼養(yǎng)1d，保證脫毛部位皮膚無損傷。實驗時將大鼠頸椎脫臼處死，剪下脫毛處皮膚，小心剝離皮下脂肪及黏液組織，選取完整皮膚，用生理鹽水洗凈，濾紙吸干，4℃冰箱短期保存，備用。

2.3 擴散裝置與接收介質(zhì)的選擇

采用ZTY智能透皮試驗儀進行體外透皮吸收試驗。擴散池由2個玻璃組件組成，鼠皮夾在中間形成上下室，上室是供給池，下室是接收池，放入（32±0.5）℃恒溫水浴中。擴散池的有效擴散直徑為25mm，接收池容積為25ml。在透皮釋放介質(zhì)的選擇上，通過比較鹽酸普萘洛爾在生理鹽水及不同pH磷酸鹽緩沖液中的溶解度，發(fā)現(xiàn)在不損害皮膚組織結構的條件下，以生理鹽水為接收介質(zhì)最佳。

2.4 色譜條件

色譜柱：Shimadzu Shim-pack VP-ODS C18（250mm×4.6mm，5μm）；流動相：甲醇-含0.1%庚烷磺酸鈉的0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液（57∶43），流速：1.0ml/min；檢測波長：290nm；進樣量：20μl；柱溫：室溫。在上述色譜條件下，鹽酸普萘洛爾對照品、供試品及空白基質(zhì)的色譜見圖1。

2.5 線性關系考察

精密稱取105℃干燥至恒重的鹽酸普萘洛爾對照品5mg，置于10ml量瓶中，用生理鹽水稀釋定容至刻度。精密量取上述溶液1ml，置于10ml量瓶中，用生理鹽水稀釋定容至刻度，配制成50μg/ml的標準溶液。精密量取上述標準溶液1.00、2.00、3.00、4.00、5.00、6.00、7.00ml，分別置于10ml量瓶中，加生理鹽水稀釋定容至刻度，搖勻，制得5.00、10.00、15.00、20.00、25.00、30.00、35.00μg/ml的系列溶液，經(jīng)0.45μm 微孔濾膜過濾后進樣測定。以鹽酸普萘洛爾的質(zhì)量濃度（c）為橫坐標、峰面積（y）為縱坐標，進行線性回歸。得回歸方程為y＝0.022c－0.0036（r＝0.9999）。結果表明，鹽酸普萘洛爾檢測質(zhì)量濃度的線性范圍為5.00～35.00μg/ml。

圖1 高效液相色譜圖A.對照品；B.供試品；C.空白基質(zhì)；1.鹽酸普萘洛爾Fig 1 HPLC chromatogramsA.substance control；B.test samples；C.blank matrix；1.propranolol hydrochloride

2.6 精密度試驗

用生理鹽水溶解適量的鹽酸普萘洛爾對照品，過濾后按“2.4”項下色譜條件進樣測定，連續(xù)進樣6次，記錄峰面積。結果，RSD＝1.14%，表明該檢測方法精密度良好。

2.7 回收率試驗

將鹽酸普萘洛爾對照品溶液，加入已知含量的透皮吸收溶液（2%油酸、2%氮酮）中，配制成樣品溶液，另以空白基質(zhì)為對照，各3份，過濾后按“2.4”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積，計算回收率，結果見表1。

表1 回收率試驗結果（n＝3）Tab 1Results of recovery tests（n＝3）

2.8 體外透皮試驗

用濾紙吸干鼠皮表面水分，角質(zhì)層向上夾于擴散池中，在鼠皮上均勻涂上空白基質(zhì)、含有不同透皮吸收促進劑的鹽酸普萘洛爾乳膏和不含透皮吸收促進劑的鹽酸普萘洛爾乳膏，涂藥量約為0.25g/cm2。供給池上口用保鮮膜封住，接受池加滿生理鹽水并加入磁子。將擴散池置于（32±0.5）℃的恒溫水浴槽中，攪拌速度恒定，分別于0.5、1、2、4、6、8、10、12h取出接收液15ml，同時補充同體積且等溫的生理鹽水。將各時段的接收液經(jīng)0.45μm微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液，采用高效液相色譜法測定接收液中鹽酸普萘洛爾的峰面積。以鹽酸普萘洛爾吸收峰面積A＝A樣品－A空白，按外標法計算接收液中鹽酸普萘洛爾的含量，并計算單位面積累積透過量（Q）＝[cn·V+∑（ci×V1）]/s。式中，Q為藥物單位面積經(jīng)皮累積滲透量，s為有效皮膚滲透面積，V為接收池中接收液體積，ci為第1次至上次取樣時接收液中藥物濃度，cn為該次取樣時接收液中藥物濃度，V1為所取接收液的體積。對藥物滲透曲線（Q-t）的穩(wěn)態(tài)部分作切線，切線的斜率即為藥物經(jīng)皮滲透速率（J）。對加入透皮吸收促進劑的鹽酸普萘洛爾乳膏的經(jīng)皮滲透參數(shù)與無促進劑乳膏的經(jīng)皮滲透參數(shù)進行t檢驗。促滲性能即按下列公式計算：QEF＝Q12h（促進劑）/Q12h（無促進劑），JEF＝J12h（促進劑）/J12h（無促進劑）。不同透皮吸收促進劑對鹽酸普萘洛爾乳膏透皮吸收性能的影響見表2。

表2 不同透皮吸收促進劑對鹽酸普萘洛爾乳膏透皮吸收性能的影響（n＝3）Tab 2 Effects of different penetration enhancers on percutaneous enhancers absorption of Propranolol hydrochloride cream（n＝3）

由表2結果表明，6種透皮吸收促進劑對鹽酸普萘洛爾乳膏均有促透作用，促透作用依次為：油酸＞氮酮＞油酸+丙二醇＞丙二醇＞氮酮+油酸＞氮酮+丙二醇＞無促進劑。其中油酸對鹽酸普萘洛爾的促透作用最好，其Q約為2552.01μg/cm2，是無促進劑乳膏的2.48倍；J約為30.28μg/（cm2·h），是無促進劑乳膏的2.27倍。

3 討論

透皮吸收制劑是一種新型藥物劑型，具有可維持穩(wěn)定的血藥濃度、避免胃腸道酶解作用和肝臟的首關效應、降低藥物的毒副作用、給藥方便等優(yōu)點。而皮膚表皮的角質(zhì)層對大多數(shù)外用藥物形成一道難以滲透的生理屏障，添加適宜的透皮吸收促進劑是通過改變皮膚角質(zhì)層扁平細胞的有序疊集結構，增大角質(zhì)層細胞間隙的空隙，使藥物迅速進入皮內(nèi)而被吸收[7]。透皮吸收中常用的促進劑有氮酮、油酸、丙二醇及其組合物等。氮酮是目前常用的化學促滲劑之一，其滲入皮膚中能影響表皮角質(zhì)層中扁平角化細胞的有序疊集結構，也作用于細胞類脂質(zhì)雙分子層，增加雙分子層的流動性，降低相變溫度，從而增加藥物的滲透性。丙二醇能滲入角質(zhì)層并在其中形成蓄積，增加藥物在角質(zhì)層中的溶解性質(zhì)和分配性質(zhì)[8]，特別適合于在丙二醇中有較大溶解度的藥物。油酸為含有不飽和雙鍵的長鏈脂肪酸，與皮膚中的脂肪酸有相似的結構，但由于雙鍵的存在而形成不對稱空間結構，兩者相互作用使角質(zhì)細胞間形成空隙，細胞間類脂分子排列發(fā)生變化，增加了類脂的流動性，這些腔隙成為藥物分子穿過角質(zhì)層的通道，減小了擴散阻力，使皮膚的滲透性增大[8]。另外，鹽酸普萘洛爾為陽離子型藥物，油酸對陽離子藥物有獨特的促進效果，油酸與陽離子藥物形成離子對而提高了脂溶性，對角質(zhì)層具有較好的滲透性。

有關透皮吸收促進劑對鹽酸普萘洛爾透皮吸收性能的影響，孫群[9]曾以鹽酸普萘洛爾原料藥作為供試液進行了研究，結果顯示氮酮為其最佳促進劑。筆者以鹽酸普萘洛爾乳膏為研究對象，探討了不同透皮吸收促進劑對其透皮吸收性能的影響。結果表明鹽酸普萘洛爾乳膏加入透皮吸收促進劑的滲透效果優(yōu)于不加促進劑，單用油酸優(yōu)于與氮酮、丙二醇等合用的促透效果。其原因可能是，氮酮與乳膏基質(zhì)中的凡士林等有較強的親和力，降低了向角質(zhì)層的分配比例，從而影響了其促透效果[10]；丙二醇具有較大黏度，油酸與丙二醇合用后黏度增加，抑制了皮膚的水合作用，使水溶性藥物經(jīng)皮滲透性降低。

[1] 楊寶峰.藥理學[M].7版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2008：325.

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