申 睿，郭 琪

抗炎止痛口服液是由羌活、獨活、防風、細辛、豨薟草、制川烏等12 味中藥材組成的中藥復方制劑，具有祛風散寒、除濕壯骨、活血止痛之功效，臨床適用于風濕性關節(jié)炎、類風濕性關節(jié)炎、強直性脊柱炎、老年性關節(jié)炎等疾病的治療［1-2］。本文參考中國藥典2010年版一部［3］對羌活、獨活、腫節(jié)風、制川烏等主要藥材的薄層色譜鑒別方法，建立了抗炎止痛口服液質量控制的薄層色譜鑒別法。

1 儀器與試藥

ZF 型紫外投射反射分析儀;KQ-300VDB 型超聲波清洗器;硅膠GF254板(青島海洋化工廠);羌活、獨活、腫節(jié)風對照藥材及異嗪皮啶對照品(由中國生物制品檢定所提供，批號:120935-201007，120940-201010，121048-200504，110837-200304);制川烏對照藥材(由中國生物制品檢定所標本館提供);抗炎止痛口服液(由解放軍252 醫(yī)院提供，批號:20100111、20100112、20100113)。所有試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 羌活的薄層色譜鑒別 取供試品20 ml，加甲醇20 ml，超聲處理20 min，濾過，濾液蒸干，加甲醇1 ml 溶解作為供試品溶液。另取羌活對照藥材1 g，同法制成對照藥材溶液。按處方量同法制備缺羌活的陰性對照溶液。吸取上述3 種溶液各10 μl，分別點于同一用4%醋酸鈉溶液制備的硅膠G 薄層板上，以三氯甲烷－ 甲醇(8∶ 2)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365 nm)下檢視［3-4］。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同的藍色熒光斑點(圖1)。

2.2 獨活的薄層色譜鑒別 取供試品20 ml，用石油醚(30～60℃)萃取2 次，每次20 ml，濾過，濾液揮干，加氯仿1 ml 溶解作為供試品溶液。另取獨活對照藥材1 g，加乙醚10 ml，超聲處理20 min，濾過，濾液揮干，殘渣加氯仿1 ml 溶解作為對照藥材溶液。按處方量同法制備缺獨活的陰性對照溶液。吸取上述3 種溶液各10 μl，分別點于GF254硅膠薄層板上，以石油醚(30～60℃)－乙酸乙酯(8∶ 2)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(254 nm)下檢視［3］。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(圖2)。

2.3 腫節(jié)風的薄層色譜鑒別 取供試品20 ml，用乙酸乙酯萃取2 次，每次20 ml，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇1 ml 溶解作為供試品溶液。另取腫節(jié)風對照藥材1 g，加水30 ml，超聲處理30 min，用乙酸乙酯萃取2 次，每次20 ml，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇1 ml 溶解作為對照藥材溶液。再取異嗪皮啶對照品，加甲醇制成每1 ml 含1 mg 的溶液，作為對照品溶液。按處方量同法制備缺腫節(jié)風的陰性對照溶液。吸取上述4 種溶液各10 μl，分別點于硅膠G薄層板上，以石油醚(30～60℃)－乙醚－甲酸(2∶10∶ 0.2)為展開劑，展開，取出，晾干，置氨蒸氣中熏10 min 后，與對照品色譜相應的斑點變?yōu)辄S綠色，置紫外光燈(365 nm)下檢視［3］。供試品色譜中，在與對照藥材及對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(圖3)。放置12 h 后，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯黃棕色的斑點。

2.4 制川烏的薄層色譜鑒別 取供試品20 ml，用稀鹽酸調節(jié)pH 至2～3，用乙醚萃取3 次，每次30 ml，棄去乙醚液。酸水層用氨試液堿化至pH 10～11，用乙醚萃取3 次，分別為30 ml，合并乙醚液，揮干，加二氯甲烷1 ml 溶解，制成供試品溶液。另取制川烏對照藥材1.5 g，加水50 ml，煎煮30 min，放冷，同法制成對照藥材溶液。按處方量同法制備缺制川烏的陰性對照溶液。吸取上述3 種溶液各20 μl，分別點于硅膠G 薄層板上，以正己烷－乙酸乙酯－甲醇(6.4∶ 3.6∶ 1)為展開劑，在氨蒸氣飽和20 min 的展缸內展開，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀溶液［3］。在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同的紅棕色斑點(圖4)。

圖1 羌活的薄層色譜圖

圖2 獨活的薄層色譜圖

圖3 腫節(jié)風的薄層色譜圖

圖4 制川烏的薄層色譜圖

3 討論

3.1 獨活薄層色譜條件的優(yōu)化 獨活薄層條件常采用硅膠G 薄層板，在365 nm 波長下檢測［5-7］，但是在該薄層條件下陰性樣品干擾較大。本文將硅膠G 薄層板改為硅膠GF254薄層板，采用石油醚－乙酸乙酯展開系統(tǒng)，并對石油醚－乙酸乙酯展開系統(tǒng)的比例(7.5∶ 2.5、8∶ 2、8.5∶ 1.5)進行了優(yōu)化，結果表明應用石油醚(30～60℃)－乙酸乙酯(8∶ 2)展開時分離效果最佳，色譜斑點清晰，且陰性樣品無干擾。

3.2 腫節(jié)風薄層色譜條件的優(yōu)化 甲苯－乙酸乙酯－甲酸(9∶ 4∶ 1)展開系統(tǒng)常用于腫節(jié)風的薄層鑒別［3，8］，參考文獻［9］的方法比較了甲苯－乙酸乙酯－甲酸(9∶ 4∶ 1)和石油醚(30～60℃)－乙醚－甲酸(2∶ 10∶ 0.2)展開系統(tǒng)，結果發(fā)現(xiàn)采用石油醚(30～60℃)－乙醚－甲酸(2∶ 10∶ 0.2)展開系統(tǒng)色譜斑點清晰，分離效果更好。

3.3 制川烏提取方法及薄層色譜條件的優(yōu)化 參考文獻［10-14］優(yōu)化了制川烏的提取方法:先用酸液浸泡，將其中生物堿成鹽，用乙醚萃取，使得生物堿與其他成分分離，然后調節(jié)水溶液至堿性，再用乙醚萃取，使烏頭堿類物質留在有機相中，可有效減少混雜成分的干擾，使樣品各成分之間更好地分離。在采用該提取方法的前提下，本文還比較了多種展開系統(tǒng)，結果表明采用優(yōu)化的提取方法以正己烷－乙酸乙酯－甲醇(6.4∶ 3.6∶ 1)為展開劑，在氨蒸氣飽和20 min 的展缸內展開，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀溶液顯色，色譜斑點清晰，分離度好，且陰性樣品無任何干擾。

本處方中藥味多，相互間干擾大，本文在優(yōu)化了薄層色譜條件后，對抗炎止痛口服液中的羌活、獨活、腫節(jié)風、制川烏成分進行了薄層色譜鑒別研究，在與對照藥材或對照品色譜相應的位置上顯相同顏色的斑點，而所有陰性樣品對鑒別均無干擾。試驗結果表明，用薄層色譜法鑒別抗炎止痛口服液中的羌活、獨活、腫節(jié)風、制川烏，方法可靠，斑點清晰，專屬性強、重現(xiàn)性好，可作為抗炎止痛口服液質量控制的鑒別方法。處方中含有毒性中藥材——制川烏，其毒性主要來源于雙酯型生物堿(烏頭堿)，為了更嚴格有效地控制抗炎止痛口服液的質量，確保用藥的安全性，其中烏頭堿等有毒成分的限量檢查及含量測定有待于進一步研究。

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