劉曉哲

(河南省南陽市食品藥品檢驗所，河南南陽 473059)

香砂六君丸收載于《中國藥典》2010年版一部［1］，處方來源于《重訂通俗傷寒論》，由木香、砂仁、黨參、白術(shù) (炒)等十味藥組成，具有益氣健脾、和胃的功效。臨床上用于脾虛氣滯、消化不良、噯氣食少、脘腹脹滿、大便溏泄等癥。方中君藥木香的功效與活性成分木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯有關(guān)，具有行氣止痛、健脾消食的功效。目前該制劑的質(zhì)量標準含量測定項僅測定了橙皮苷的量，參考相關(guān)報道，增加了對其木香 (君藥)的有效成分木香烴內(nèi)酯［2-5］和去氫木香內(nèi)酯［6-8］的定量測定，以便更好地控制藥品的質(zhì)量。本實驗利用同一流動相系統(tǒng)，同時測定香砂六君丸中木香烴內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)酯及橙皮苷［9-12］的量。通過方法學(xué)驗證，該方法操作簡便、準確、重復(fù)性好，有利于更好地對香砂六君丸進行質(zhì)量評價和監(jiān)控。

1 儀器與試藥

Agilent 1200液相色譜儀，配有1200系統(tǒng) (四元泵、自動進樣器、柱溫箱、可變波長紫外檢測器)，Agilent色譜化學(xué)工作站;Sartorious BP211D電子天平;WT—1200超聲波清洗器 (濟寧萬通超聲儀器設(shè)備廠)。

木香烴內(nèi)酯 (供定量測定用、批號111524-200503)、去氫木香內(nèi)酯 (供定量測定用、批號111525-200706)、橙皮苷 (供定量測定用、批號110721-200613)對照品均購自于中國藥品生物制品檢定所。

香 砂 六 君 丸 (批 號:100301、100302、100305、100308)及陰性對照樣品均由河南省宛西制藥股份有限公司提供。

乙腈為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 乙腈-水 (25∶75)為流動相，采用等度洗脫;Kromasil C18色譜柱 (250 mm×4.6 mm，5 μm);柱溫30℃;體積流量0.8 mL/min;檢測波長為0～10 min，橙皮苷 (280 nm)，10～25 min，木香烴內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)酯 (225 nm);進樣量10 μL。色譜圖見圖1。

圖1 對照品 (A)、陰性樣品 (B)、供試品 (C)HPLC色譜圖Fig.1 HPLC chromatograms of reference substances(A)，negative sample(B)and sample(C)

2.2 對照品溶液的制備 分別精密稱取木香烴內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)酯、橙皮苷對照品適量，置同一量瓶中，加甲醇配制成質(zhì)量濃度分別為115.4、119.1、182.7 μg/mL的混合對照品貯備溶液。

2.3 供試品溶液的制備 取供試品細粉0.403 6 g，置50 mL量瓶中，加甲醇約45 mL，搖勻，放置過夜，超聲提取30 min，放冷至室溫，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，用0.45 μm微孔濾膜濾過，作為樣品溶液。

2.4 陰性樣品溶液的制備 取不加木香、陳皮的空白樣品按照供試品溶液項下的方法，制成溶液，即得。

2.5 線性關(guān)系考察 精密量取木香烴內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)酯、橙皮苷對照品貯備液1、2、5、10、25 mL置50 mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，制成標準系列溶液。按照2.1項的色譜條件測定，分別進樣10 μL，測得峰面積的積分值。以對照品質(zhì)量濃度為橫坐標，峰面積積分值為縱坐標，繪制標準曲線。木香烴內(nèi)酯回歸方程為A=28.403C-5.818 3，相關(guān)系數(shù)r2=0.999 5，進樣量在2.308～57.70 μg/mL范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好線性;去氫木香內(nèi)酯回歸方程為A=21.536C-0.850 3，相關(guān)系數(shù)r2=0.999 6，進樣量在2.382～59.55 μg/mL范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好線性;橙皮苷回歸方程為A=21.061C+8.806，相關(guān)系數(shù)r2=0.999 3，進樣量在3.654～91.35 μg/mL范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好線性。

2.6 穩(wěn)定性試驗 取同一香砂六君丸供試品溶液(批號100301)，按照2.1項下色譜條件，分別于0、2、4、6、8 h進樣，測定峰面積值，計算得木香烴內(nèi)酯RSD為1.52%、去氫木香內(nèi)酯RSD為0.75%、橙皮苷RSD為1.45%，證明該溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.7 精密度試驗 取同一香砂六君丸供試品溶液(批號100301)，連續(xù)進樣6次，測定峰面積，計算得木香烴內(nèi)酯RSD為1.37%、去氫木香內(nèi)酯RSD為0.89%、橙皮苷為1.12%，表明該方法精密度良好。

2.8 重復(fù)性試驗 取同一批香砂六君丸 (批號100301)6份，按照供試品溶液制備項下方法平行制備6份供試品溶液，按照2.1項下色譜條件測定，將測得的木香烴內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)酯、橙皮苷的峰面積分別代入2.5項下的回歸方程計算。結(jié)果含木香烴內(nèi)酯平均質(zhì)量分數(shù)為0.897 mg/g，RSD為1.69%;去氫木香內(nèi)酯平均質(zhì)量分數(shù)為0.673 mg/g，RSD為1.03%;橙皮苷平均質(zhì)量分數(shù)為7.603 mg/g，RSD為1.29%。表明該方法有較好的重復(fù)性。

2.9 加樣回收試驗 稱取已知量的香砂六君丸(批號100301)6份，精密稱取0.2 g(約相當于木香烴內(nèi)酯0.179 mg;去氫木香內(nèi)酯0.135 mg;橙皮苷1.52 mg)，分別置50 mL量瓶中，精密加入對照品溶液 (木香烴內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)酯、橙皮苷分別為0.090 1、0.064 75、0.743 5 mg/mL)2 mL，加入甲醇45 mL，放置過夜，超聲提取30 min，放冷至室溫，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，用0.45 μm微孔濾膜濾過，作為樣品溶液。按照2.1項下色譜條件進行測定，將測得的木香烴內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)酯、橙皮苷的峰面積分別代入2.5項下的回歸方程計算。計算回收率，結(jié)果本法回收率良好，結(jié)果見表1～3。

表1 木香烴內(nèi)酯的加樣回收率試驗結(jié)果Tab.1 Results of recovery test of costunolide

表2 去氫木香內(nèi)酯的加樣回收率試驗結(jié)果Tab.2 Results of recovery test of dehydrocostus lactone

表3 橙皮苷的加樣回收率試驗結(jié)果Tab.3 Results of recovery test of hesperidin

2.10 樣品的測定 取香砂六君丸3批，按2.3項下的制備方法制備樣品溶液，按照2.1項下色譜條件測定，將測得的木香烴內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)酯、橙皮苷的峰面積分別代入2.5項下的回歸方程計算其含有量，結(jié)果見表4。

表4 香砂六君丸中有效成分的測定結(jié)果(n=3)Tab.4 Determination of active components in Xiangsha Liujun Pills(n=3)

3 討論

3.1 提取方法的選擇 使用加熱回流1 h、3 h和冷浸過夜后超聲提取30 min、60 min兩種方法進行提取比較，結(jié)果顯示兩種提取方法效果無顯著性差異。故選擇冷浸過夜后超聲30 min提取。

3.2 流動相的選擇 分別采用乙腈－0.3%磷酸溶液 (20∶80)及乙腈－水 (25∶75)為流動相，結(jié)果分離效果均良好。因乙腈－水 (25∶75)簡便易行，故選乙腈－水為流動相。

3.3 吸收波長的選擇 用紫外分光光度計分別對對照品溶液進行200～300 nm波長范圍的掃描，木香烴內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)酯在225 nm處有最大吸收，橙皮苷在284 nm波長處有最大吸收。為了使被檢測成分更好地檢出，利用Agilent 1200紫外檢測器可變波長功能，選擇225 nm作為木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯的檢測波長，280 nm作為橙皮苷的檢測波長。

［1］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典:2010年版一部［S］.北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:897-898.

［2］倪 琳，楊 錫.HPLC法同時測定達斯瑪保丸中木香烴內(nèi)酯、異土木香內(nèi)酯和土木香內(nèi)酯［J］.中成藥，2012，34(4):664-667.

［3］項 菲.高效液相色譜法測定八味痛經(jīng)片中木香烴內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)酯和芍藥苷［J］.中成藥，2011，33(4):616-618.

［4］馮 欣，魯曉光，羅布扎西，等.HPLC法同時測定藏藥七味鐵屑丸中木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯［J］.中成藥，2011，33(9):1535-1538.

［5］李 力，張振秋.不同炮制方法對木香中有效成分含量的影響［J］.華西藥學(xué)雜志，2011，26(2):117-119.

［6］李 慧，陳寶田，翁立冬，等.木香炮制品中木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯的 HPLC測定［J］.中草藥，2007，38(11):64-66.

［7］謝秉湘，倪 贊.HPLC法測定腸康片中木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯的含量［J］.海峽藥學(xué)，2010，22(9):49-50.

［8］趙小民，殷高彬.不同產(chǎn)地木香中木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯的 HPLC測定［J］.安徽醫(yī)藥，2009，13(6):617-618.

［9］謝強勝，王 坤，尹寧寧.RP-HPLC法測定橘紅丸中甘草苷、柚皮苷、橙皮苷和迷迭香酸［J］.中成藥，2011，33(12):2085-2088.

［10］張寓云，毛素芳，鄭奕輝，等.HPLC測定胃舒散中橙皮苷的含量［J］.中成藥，2004，26(3):256-257.

［11］王海英，趙建澤.HPLC測定香砂養(yǎng)胃丸中橙皮苷的含量［J］.中成藥，2005，27(9):1115-1116.

［12］王 娜，黃羅生，趙浩如.調(diào)神攻堅顆粒中橙皮苷和黃芩苷的含量測定［J］.江蘇中醫(yī)藥，2008，40(10):88-89.