玄云澤，張 杰，鄭 磊，張建國△

（1.延邊大學(xué)附屬醫(yī)院口腔科，吉林 延吉 133000；2.北京大學(xué)口腔醫(yī)學(xué)院口腔頜面外科 100081）

化療是惡性腫瘤綜合治療的一個重要組成部分，全身化療有局部組織內(nèi)藥物水平低、毒副作用大等缺點(diǎn)，臨床上影響了療效。間質(zhì)化療不僅能提高局部組織內(nèi)藥物水平，還延長藥物在局部組織內(nèi)維持時間［1－3］。順鉑（cisplatin，CDDP）是臨床上常用的化療藥物，但是由于順鉑的腎毒性等使其應(yīng)用受到限制［4－5］。為了解緩釋型順鉑植入體內(nèi)后局部組織及其他部位中藥物分布情況，進(jìn)行了動物實(shí)驗(yàn)研究，以期為臨床應(yīng)用提供了依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動物 家兔32只，體質(zhì)量（1.5±0.2）kg，雌雄各半，由安徽醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供。合格證號為皖醫(yī)實(shí)動準(zhǔn)01號，經(jīng)檢疫驅(qū)蟲，分籠飼養(yǎng)2周。

1.2 方法

1.2.1 試劑與儀器 順鉑標(biāo)準(zhǔn)品（中國藥品生物制品檢驗(yàn)所）；鉑標(biāo)準(zhǔn)溶液（批號040301），鉑水平1 000mg／mL－1（國家鋼鐵材料測試中心）；順鉑（緩釋型，緩釋時間為15d，安徽中人科技有限公司）；原子吸收分光光度計（帶石墨爐），Z8000偏振塞曼型（日本日立公司）。

1.2.2 實(shí)驗(yàn)方法 將32只家兔分為兩組，靜脈注射組、局部植入組。靜脈注射組實(shí)驗(yàn)：共選8只家兔。先選家兔4只，雌雄各半，于耳緣靜脈注射順鉑4mg后1、2、4、8、12、24、48、72h取耳中央動脈血2mL，置肝素的離心管內(nèi)，隨即3 000r／min離心10min，分離血漿，置－20℃冰箱內(nèi)，測定藥物水平，確定血藥峰值水平時間。再選家兔4只，雌雄各半。順鉑4mg注射于耳緣靜脈后血藥峰值水平時，心內(nèi)注射空氣10mL處死，分別切取1g舌體中部組織、頸部淋巴結(jié)、心、肝、脾、肺、腎等組織，置－20℃冰箱內(nèi)待測。局部植入組實(shí)驗(yàn)：家兔24只隨機(jī)分為6組，每組4只動物，雌雄各半。以3% 戊巴比妥鈉（30mg／kg）靜脈麻醉，將順鉑（緩釋型）4mg植入于兔舌體中部肌肉內(nèi)。植入后分別于1、3、5、7、10、15d等6個時間，取耳中央動脈血2mL后，將各組動物處死，取植入部位及距離植入部位1cm的舌體組織、頸部淋巴結(jié)、心、肝、脾、肺、腎等組織，－20℃冰箱內(nèi)凍存、待測。

1.2.3 藥物水平的檢測 精密稱取適當(dāng)切碎的被測血漿樣0.5g放入具塞試管中，加入濃硝酸0.45mL、30%的H2O20.9mL、辛醇2滴?；靹颍苋笾?0～95℃水浴中，消解約2～4h，至消解液澄清，再以0.22μm水膜快速過濾。收集過濾液至5mL錐形離心試管中，以0.5mL水沖洗消解管并過濾合并入收集管中。將過濾液試管插砂浴中，置通風(fēng)櫥中設(shè)定成內(nèi)部溫度約120℃，溶液揮發(fā)干凈后轉(zhuǎn)移各試管至100℃恒溫箱，保溫至干。向揮干殘?jiān)鼉?nèi)加入200μL的1%的稀鹽酸溶液，立即以封口膜密封，渦旋5min。再放置約30min后待測。用石墨爐原子吸收光譜法分別測定血與組織藥物水平。

表1 順鉑（緩釋型）4mg兔舌內(nèi)植入后不同時間的藥物水平，μg／mL）

表1 順鉑（緩釋型）4mg兔舌內(nèi)植入后不同時間的藥物水平，μg／mL）

頸部淋巴結(jié)1d 0.16±0.08 15.77±3.17▲ 2.80±2.42▲ 4.53±1.18時間 外周血 植藥點(diǎn) 植藥點(diǎn)1cm▲3d 0.21±0.08 14.58±1.06▲ 5.41±1.83▲ 4.97±3.41▲5d 0.10±0.05 15.44±1.64▲ 3.04±1.36▲ 4.57±2.90▲7d 0.07±0.07 15.34±1.72▲ 6.44±5.42▲ 3.74±1.37▲10d 0.04±0.04 14.14±3.22▲ 7.39±3.75▲ 9.17±0.99▲15d 0.10±0.02 16.62±0.32▲ 7.16±1.12▲ 9.97±3.34▲

續(xù)表1 順鉑（緩釋型）4mg兔舌內(nèi)植入后不同時間的藥物水平μ

續(xù)表1 順鉑（緩釋型）4mg兔舌內(nèi)植入后不同時間的藥物水平μ

▲：P＜0.05，與外周血中水平比較；▼：P＜0.05與植藥點(diǎn)水平比較。

時間 心臟 肝臟 腎臟 脾臟 肺1d 0.47±0.15 1.47±0.06 2.79±0.49▲▼0.71±0.17 0.73±0.09 3d 0.13±0.02 1.97±1.11 4.31±1.41▲▼ 1.21±0.32 0.84±0.19 5d 0.36±0.16 2.85±0.64 6.11±1.59▲▼ 1.19±0.04 0.72±0.33 7d 0.71±0.14 1.67±0.18 4.81±0.95▲▼ 1.51±0.30 0.65±0.07 10d 1.22±1.23 2.13±0.86 3.36±0.86▲▼ 1.12±0.12 0.45±0.31 15d 1.55±0.06 2.78±1.53 5.03±1.14▲▼2.45±0.93 1.52±0.33

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS11.5進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計量資料采用表示，各組間采用多因素方差分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 靜脈給藥后不同時間點(diǎn)血中順鉑水平血藥峰值水平時藥物水平分布 順鉑4mg靜脈注射于4只家兔耳緣靜脈，1、2、4、8、12、24、48、72h時測定血中藥物水平，分別為（0.87±0.11）、（0.48±0.00）、（0.42±0.00 ）、（0.33±0.00）、（0.34±0.00）、（0.31±0.01）、（0.23±0.00）、（0.16±0.01）μg／mL。其中，1h其取樣時間點(diǎn)中最高水平，因此確定血藥峰值水平時相為1h。

2.2 靜脈給藥后血藥峰值水平時藥物水平分布 順鉑4mg靜脈注射于4只家兔耳緣靜脈，血藥峰值水平時外周血、舌、頸淋巴結(jié)、心臟、肝臟、腎臟、脾臟和肺中藥物水平分別為（0.87±0.11）、（1.03±0.14）、（1.19±0.05）、（0.75±0.17）、（2.14±0.08）、（5.31±1.21）、（0.95±0.15）、（1.35±0.06）μg／mL。外周血、舌、頸淋巴結(jié)與腎臟之間比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；外周血、舌、頸淋巴結(jié)之間比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。

2.3 順鉑（緩釋型）植入舌體后4mg兔舌內(nèi)植入后不同時間的藥物水平 植藥點(diǎn)、植藥點(diǎn)1cm、頸部淋巴結(jié)、腎臟中藥物水平與外周血中水平比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；腎臟中藥物水平與植藥點(diǎn)中水平比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

3 討 論

順鉑的抗癌療效與藥物水平和藥物對腫瘤細(xì)胞作用時間有關(guān)。順鉑及其降解產(chǎn)物主要由腎臟排除，在腎臟中藥物水平很高，對腎的毒性也大。為了了解或減少順鉑的腎毒性，各國學(xué)者進(jìn)行了大量研究［5］。本研究結(jié)果表明，腎臟中藥物水平最高，而局部組織（舌體）及頸淋巴結(jié)中藥物水平與腎臟中水平相比很低，與Cai等［6］報道一致。本實(shí)驗(yàn)中外周血、舌體、頸淋巴結(jié)內(nèi)水平顯著低于腎臟中藥物水平，而外周血、舌體、頸淋巴結(jié)內(nèi)水平之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義。分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果，靜脈途徑應(yīng)用順鉑對靶器官－舌體的作用較弱。

抗癌藥物的療效取決于藥物在腫瘤組織內(nèi)有效藥物水平與維持時間乘積（AUC）［7］，所以提高AUC是抗癌藥物研究的重點(diǎn)。研究證明，只有保持組織內(nèi)較高水平，以及延長藥物的作用時間，才能達(dá)到良好的療效［8］。盧金利等［9］檢測靜脈化療后血漿和腫瘤組織中鉑含量，發(fā)現(xiàn)順鉑在腫瘤組織中代謝較快，下降幅度大于血漿。Landrito等［10］瘤體內(nèi)分別注射碘化油為載體的順鉑與順鉑水溶液，前組中組織內(nèi)藥物水平比后組分別高出9倍和12倍。順鉑（緩釋型）是順鉑與生物相容性良好、具有降解性能的聚乳酸（PLA）的聚合物，不改變原藥成分，僅改變給藥途徑和控制緩釋時間來治療癌癥。PLA的體內(nèi)代謝最終產(chǎn)物為CO2和H2O，降解產(chǎn)物可通過腎臟排出體外［11］。順鉑（緩釋型）植入局部組織后隨著載體的緩慢降解，順鉑釋放進(jìn)入到癌或其周圍組織，使局部組織內(nèi)形成持續(xù)的高水平，并持續(xù)作用于癌細(xì)胞，岑德意等［12］的實(shí)驗(yàn)研究也已證實(shí)這點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，植入藥物部位舌體、植入藥物1cm部位組織的藥物平均水平均高于外周血中水平，植入藥物部位藥物水平基本上保持在較高水平，而且植入藥物1㎝部位和頸淋巴結(jié)中水平隨時間延長緩慢上升，但外周血中水平反而隨時間延長緩慢下降。此外，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果還表明，頸部淋巴結(jié)中藥物水平明顯高于外周血和腎臟中水平，所以順鉑（緩釋型）植入舌體后能夠提高頸淋巴結(jié)內(nèi)藥物水平，延長其作用時間。Cai等［6］比較靜脈給藥透明質(zhì)酸和順鉑聚合物與單純順鉑組，前組AUC高于后組2.7倍，降低血漿峰值水平。還報道，透明質(zhì)酸與順鉑聚合物皮下注射于鼠乳腺，明顯增加了血漿及組織內(nèi)鉑的AUC，同側(cè)腋窩淋巴結(jié)內(nèi)藥物水平比靜脈注射順鉑組相比提高了3.6倍，延長了藥物作用時間，未見明顯毒副作用。有文獻(xiàn)報道術(shù)前癌組織及癌旁組織內(nèi)植入緩釋順鉑，可見原發(fā)灶和轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)均有病理變化，局部組織及區(qū)域淋巴結(jié)內(nèi)檢測到較高藥物水平［13－14］。提示順鉑（緩釋型）進(jìn)行間質(zhì)化療，符合間質(zhì)化療的局部高水平和全身低水平的特點(diǎn)，提高局部組織內(nèi)藥物水平和藥物的療效。

總之，家兔舌體組織內(nèi)植入順鉑（緩釋型）與靜脈給藥相比，明顯提高局部組織及淋巴結(jié)內(nèi)藥物水平，延長藥物作用時間，為間質(zhì)化療治療舌癌的臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。

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