艾迎春,王立平,李奕鑫

(1.佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院消化二科,黑龍江 佳木斯 154003;2.佳木斯大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)院,黑龍江 佳木斯 154003;3.佳木斯市醫(yī)保醫(yī)院,黑龍江佳木斯 154004)

大腸癌是常見(jiàn)的惡性腫瘤之一,其發(fā)病機(jī)制尚不十分明確。AKT2是一種絲氨酸 /蘇氨酸蛋白激酶 ,在細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)通路和調(diào)控細(xì)胞生存和凋亡的平衡中發(fā)揮重要作用。但對(duì)于AKT2在大腸癌發(fā)生發(fā)展中的作用國(guó)內(nèi)研究還很少。本試驗(yàn)用 SABC免疫組化技術(shù)檢測(cè) AKT2在大腸腺瘤及大腸腺瘤癌變組織中的表達(dá)并探討其在大腸腺瘤惡性轉(zhuǎn)化中的作用。

1 材料與方法

1.1 一般材料

選取哈爾濱市第二醫(yī)院 2005— 01～2011— 01確診臨床資料完整的 30例大腸癌(癌變的大腸腺瘤 )的存檔蠟塊 ,40例大腸腺瘤的存檔蠟塊,其中高危性腺瘤 14例,低位性腺瘤26例;管狀腺瘤19例,混合性腺瘤 9例,絨毛狀腺瘤12例。20例正常大腸黏膜蠟塊。所有癌癥病例術(shù)前均未進(jìn)行放化療。全部標(biāo)本均經(jīng)10%福爾馬林固定,常規(guī)脫水后石蠟包埋,制成蠟塊保存。載玻片為多聚賴(lài)氨酸防脫片,購(gòu)自福州邁新公司。每個(gè)蠟塊行連續(xù)切片,厚4μm,行 HE染色和免疫組化染色。

1.2 方法

1.2.1 試劑

兔抗人 AKT2多克隆抗體,編號(hào):BA-1512,購(gòu)自武漢博士德生物工程有限公司,4°C冰箱保存。廣譜型 SABC免疫組化試劑盒購(gòu)自武漢博士德生物工程有限公司。試驗(yàn)步驟:采用 SABC免疫組化法,嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明進(jìn)行。

1.2.2 陽(yáng)性結(jié)果判斷

AKT2蛋白陽(yáng)性為黃色顆粒主要定位于胞漿。400倍下計(jì)數(shù)5個(gè)視野,陽(yáng)性細(xì)胞率=陽(yáng)性細(xì)胞數(shù) /總細(xì)胞數(shù)×100%。結(jié)合陽(yáng)性細(xì)胞百分比和及陽(yáng)性細(xì)胞強(qiáng)弱計(jì)算免疫組化染色評(píng)分:①陽(yáng)性細(xì)胞≤ 5為0分,陽(yáng)性細(xì)胞6%～25%為1分 ,26%～50%為2分,＞ 50%為 3分。②0分為無(wú)色,陽(yáng)性細(xì)胞淡黃色為 1分,黃色為2分,棕黃色為 3分。①、②兩項(xiàng)乘積即為其免疫組化評(píng)分,得分 ＜2分為陰性,≥2分為陽(yáng)性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

應(yīng)用 SPS13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件,采用卡方檢驗(yàn),P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 AKT2在正常大腸組織,大腸腺瘤,大腸腺瘤癌變組織中的表達(dá)

三者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (i2= 19.68,P＜0.01)。正常組和大腸腺瘤組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (i2= 5.09,P＜0.05)。大腸腺瘤組和癌變的大腸腺瘤組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (i2=6.01,P＜0.05),癌變的大腸腺瘤組和正常組的比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (i2= 16.8,P＜0.01)。見(jiàn)表1。

2.2 AKT2與大腸腺瘤臨床病理因素的關(guān)系

各組織學(xué)類(lèi)型間比較,AKT2陽(yáng)性表達(dá)率無(wú)顯著性差異(P＞ 0.05)。高危性腺瘤和低危性腺瘤相比,AKT2陽(yáng)性表達(dá)率升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P ＜0.05);見(jiàn)表 2。

表1 AKT2在不同大腸組織中的表達(dá)

3 討論

AK T2是生長(zhǎng)因子受體酪氨酸激酶下游重要的調(diào)節(jié)靶點(diǎn),是磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)信號(hào)傳導(dǎo)通路的中心環(huán)節(jié)。PI3K/AKT2通路被證實(shí)參與了多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展。AKT2以直接或間接的方式影響下游多個(gè)因子,這些因子參與調(diào)控細(xì)胞存活和蛋白翻譯。目前的研究發(fā)現(xiàn) AKT2是腫瘤發(fā)生的重要信號(hào)分子,其異常表達(dá)在人類(lèi)的惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展和演進(jìn)過(guò)程中發(fā)揮重要作用。AKT2主要通過(guò)兩條路徑來(lái)調(diào)節(jié)細(xì)胞存活:(1)直接參與細(xì)胞凋亡。AKT可減弱細(xì)胞內(nèi)在的凋亡途徑,和外在的凋亡途徑不同之處是內(nèi)在途徑與細(xì)胞內(nèi)線粒體體系密切相關(guān)。(2)干擾部分基因轉(zhuǎn)錄。許多細(xì)胞凋亡刺激素要求啟動(dòng)細(xì)胞內(nèi)一些基因表達(dá)來(lái)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,AKT可干擾促進(jìn)細(xì)胞凋亡的轉(zhuǎn)錄程序,或通過(guò)激活生存轉(zhuǎn)錄程序來(lái)抑制細(xì)胞凋亡。再者磷酸化的 AKT可抑制 KB抑制因子激酶(ILK),啟動(dòng)核因子 Kb(N FkB)轉(zhuǎn)錄功能,促進(jìn) bcl-xL及凋亡蛋白抑制子(IAP)的表達(dá)來(lái)維持細(xì)胞生存。

在多種腫瘤組織中都有 AKT2的過(guò)度表達(dá)或活化,最新研究結(jié)果證明,在卵巢癌、乳腺癌、前列腺癌和胰腺癌等多種腫瘤中存在 AKT的持續(xù)激活[1～3]。AK T2在不同結(jié)直腸組織中的表達(dá) Roy[4]等發(fā)現(xiàn),57%的散發(fā)型結(jié)腸癌和結(jié)腸腺瘤AKT蛋白過(guò)量表達(dá)和活化 ,并以 AKT2亞型為主 ,提示其可能參與結(jié)腸上皮細(xì)胞早期增生癌變過(guò)程,是結(jié)直腸癌變過(guò)程的一個(gè)早期事件。翟云芝[5]等發(fā)現(xiàn) AKT2在結(jié)直腸癌組織中高表達(dá),陽(yáng)性率達(dá)57.9%,而在正常大腸黏膜組織中陽(yáng)性率僅為17.5%,兩者對(duì)比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,提示 AK T2可能在結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展中有重要作用。本實(shí)驗(yàn)顯示 AKT2在正常大腸黏膜組的陽(yáng)性表達(dá)率為10.0%、大腸腺瘤組的陽(yáng)性表達(dá)率42.5%、癌變的腺瘤組織中的陽(yáng)性表達(dá)率73.3%呈逐漸升高的趨勢(shì),且在大腸腺瘤與癌變腺瘤之間的陽(yáng)性表達(dá)率差異具有顯著性,說(shuō)明在大腸腺瘤向腺癌方向的轉(zhuǎn)化過(guò)程當(dāng)中,AKT2起到了重要的作用,可能是大腸腺瘤發(fā)生癌變的早期信號(hào)。AKT2的表達(dá)率與大腸腺瘤的組織學(xué)類(lèi)型無(wú)相關(guān)性,而隨著大腸腺瘤的危險(xiǎn)性增高陽(yáng)性表達(dá)率逐漸升高。本試驗(yàn)表明在大腸腺瘤的惡性轉(zhuǎn)化過(guò)程中 AKT2發(fā)揮了重要作用。檢測(cè) AKT2的表達(dá)可能做為臨床監(jiān)測(cè)大腸腺瘤的惡性轉(zhuǎn)化的指標(biāo),并為大腸癌的早期診斷提供新的思路和理論依據(jù)。

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