鄒艷紅,遲瑛嬌,趙塔娜,聶 磊,王 禹,王李鳴,趙冬梅,李春玉

(佳木斯大學附屬第一醫(yī)院兒科,黑龍江 佳木斯 154003)

來氟米特(lefunomide,LEF)是一種新型免疫抑制劑 ,已廣泛應用于類風濕性關節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡等其他自身免疫性病、腎小球疾病及移植后排異反應等的治療[1～2],并取得了良好的療效。部分臨床用藥證實來氟米特確有能降低NS患者大量蛋白尿的作用。可以減輕腎臟病變程度及延緩NS向終末期進展[3],但其具體作用機制尚不明確。故本實驗制備阿霉素腎病大鼠模型,觀察腎病大鼠尿蛋白量和 VEGF的表達的關系,以及來氟米特對其可能的保護機制。

1 材料與方法

1.1 實驗動物和分組

健康雄性 Wistar大鼠 56只,體重160～180g,兩次尿蛋白定性試驗陰性,隨機分為正常組對照 A組(8只),腎病模型組(48只),(1)正常組:大鼠一次性尾靜脈注射 5mg/kg生理鹽水;(2)腎病模型組:大鼠一次性尾靜脈注射5mg/kg阿霉素;注射后分籠喂養(yǎng),自由進食、進水。兩周末腎病組大鼠出現(xiàn)周身浮腫,大量蛋白尿,低蛋白血癥,伴高膽固醇血癥 ,光鏡下腎小球基本正常。成功制作了微小病變型腎病模型。阿霉素注射后兩周末,將模型組大鼠隨機分為非治療組(B組)和治療組(C組 )。C組大鼠第 3周末起給予來氟米特10mg˙kg-1˙ d-1灌胃給藥,B組同時給予等量蒸餾水。所有大鼠均飼養(yǎng)在代謝籠中,給予標準飼料和水,所有模型組大鼠處死前均無死亡。分別于阿霉素注射后第2周、4周、6周處死模型治療組、模型非治療組及對照組大鼠,留取大鼠尿、腎臟。

1.2 實驗方法

采用酶免(ELISA)方法測定阿霉素腎病大鼠尿、腎臟VEGF的水平,并做相關分析。試劑盒購自于武漢博士德生物工程有限公司,考馬斯亮蘭法測定24h尿蛋白量。

1.3 統(tǒng)計學處理

采用 SPSS11.0進行統(tǒng)計學處理,組間比較采用方差分析,方差不齊時采用秩和檢驗,P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 一般情況觀察

正常對照組大鼠基本情況良好。腎病組注射阿霉素3d,大部分大鼠出現(xiàn)輕度腹瀉,活動減少,卷縮弓背,至第7天腹瀉停止。注射阿霉素2周后:腎病組大鼠精神煩躁 ,具有攻擊性。背毛蓬松,失去光澤,顏面及陰囊水腫,體重較正常組有所減輕,進食量及飲水量略減少。注射阿霉素 4周后:腎病組大鼠精神不振,活動遲緩,進食及飲水量明顯減少,體重減輕,被毛豎亂無光澤,尿量減少 ,顏面及足部 ,陰囊明顯水腫,腹部膨朧明顯,軟組織水腫。部分出現(xiàn)腹水。

2.2 24h尿蛋白檢測結果

見表1。

表1 實驗大鼠24h尿蛋白定量 (±s,mg/24h,n=8)

表1 實驗大鼠24h尿蛋白定量 (±s,mg/24h,n=8)

與 A組比較,*P ＜0.01;與 B組比較,●P＜0.01。

組別 2周 4周 6周A組 5.82± 1.16 5.97± 1.18 5.93± 1.27 B組 148.17± 9.89* 248.01± 15.92* 440.10± 62.10*C組 151.10±9.95*● 188.01±18.12*● 320.07±66.11* ●

表2 各組兩周末大鼠血清膽固醇、白蛋白的變化 (±s,n=8)

表2 各組兩周末大鼠血清膽固醇、白蛋白的變化 (±s,n=8)

與 A組比較,*P ＜ 0.01;與 B組比較,●P ＜ 0.01。

組別 白蛋白(g/L) 膽固醇(mmol/L)A組 33.16± 2.31 1.63± 0.14 B組 29.94± 2.16* 2.92± 0.15*C組 28.09±1.69*● 2.84±0.39*●

表3 各組大鼠尿液 VEGF的含量(±s,pg/mL,n=8)

表3 各組大鼠尿液 VEGF的含量(±s,pg/mL,n=8)

與 A組比較,*P ＜0.01;與 B組比較,●P ＜0.01。

組別 2周 4周 6周A組 4.23± 0.66 4.47± 0.59 4.38± 0.41 B組 15.88± 3.21* 27.26± 5.24* 39.22± 1.32*C組 16.21+2.10● 18.18+3.09● 21.26+ 2.17●

表4 各組大鼠腎臟組織中 VEGF的含量 (±s,pg/mL,n=8)

表4 各組大鼠腎臟組織中 VEGF的含量 (±s,pg/mL,n=8)

組別 2周 4周 6周A組 3.34± 0.40 3.30± 0.50 3.35± 0.99 B組 12.17± 3.51* 21.05± 4.16* 31.05± 4.18*C組 11.21±2.10● 13.18± 1.73● 14.26± 2.78●

2.3 相關分析

阿霉素腎病大鼠尿液、腎臟 VEGF的含量與24h尿蛋白呈正相關 (r= 0.81;0.63;P＜0.01)。

3 討論

腎病綜合征(NS)是兒童常見的腎臟疾病。它的治療首選糖皮質激素,據(jù)統(tǒng)計大約85%患兒可有復發(fā),若反復復發(fā)最終將進展為終末期腎臟病[4]。大量蛋白尿是促進腎小球硬化、加速腎功能損害的主要原因之一,故對于 NS治療上宜以降低蛋白尿、減緩腎功能惡化為主。VEGF是調節(jié)血管通透性的重要因子[5],近年研究發(fā)現(xiàn),VEGF的異常表達與某些腎臟疾病密切相關 ,且與24h蛋白尿量呈正相關[6]?？赡苁荲EGF減少腎小球基底膜(GBM)陰離子數(shù)目,還可誘導內皮細胞小窗的形成及細胞間連接打開來調節(jié)腎小球的通透性[7],從而出現(xiàn)蛋白尿。本實驗也證實 VEGF與尿蛋白呈正相關。說明 VEGF在 N S發(fā)生發(fā)展過程中可能起到一定的致病作用。來氟米特是一個具有抗增殖活性的異惡唑類新型免疫抑制劑,近年來在免疫性疾病領域應用范圍不斷拓展,在難治性腎病綜合征的治療中取得了良好的療效。本研究發(fā)現(xiàn)C組比 B組的大鼠 24 h尿蛋白排泄減少,提示 LEF可以減少尿蛋白排泄,減輕腎臟改變,延緩 NS進展的作用?？傊?VEGF在 NS的發(fā)生及發(fā)展中起到一定的致病作用。本研究結果表明來氟米特對 N S模型的 VEGF表達具有一定的調節(jié)作用,可以減輕腎臟病變程度及延緩 NS發(fā)展成腎功能衰竭,但其具體作用機制有待于進一步研究。

[1]Pinto P,Dougados M.Leflunomide in clinical practice[J].Acta Reumatol Port,2006,31(3):215-224

[2]Hail N Jr,Chen P,Bushman LR.Teriflunomide(leflunomide)promote scytostatic,antioxidant, and apoptotic effects in transformed prostate epithelialcells:evidence supporting a role for teriflunomide in prostate cancer chemoprevention[J].Neoplasia,2010,12(6):464-475

[3]楊紹基,任紅.傳染病學[M].第7版.北京:人民衛(wèi)生出版社,2008

[4]鐘逸斐,陳以平.有關 Ig A腎病蛋白尿治療的進展 [J].中國中西醫(yī)結合腎病雜志,2004,5(1):54-55

[5]劉莉,張鵬霞,魏曉東.VEGF與白血病關系的研究進展 [J].黑龍江醫(yī)藥科學,2007,30(2):77-78

[6]楊維娜,任淑婷,錢亦華,等.阿霉素腎病大鼠腎小球中足細胞數(shù)量及 nephrin、VEGF的表達變化 [J].四川大學學報,2010,41(3):458-462

[7]李世軍,胡新偉.蛋白尿形成的分子基礎 [J].腎臟病與透析腎移植雜志,2001,10(6):560-563