孫曉鵬,劉 超

(佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院,黑龍江 佳木斯 154003)

類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(Rheumatoid arthritis,RA)是指滑膜多關(guān)節(jié)對(duì)稱性炎癥為主,并可累及關(guān)節(jié)周圍軟骨、韌帶、肌腱及全身各組織的慢性系統(tǒng)性疾病。RA到現(xiàn)今為止,詳盡的病因?qū)W及發(fā)病機(jī)制仍然不夠明確,不過伴隨著分子生物學(xué)與醫(yī)學(xué)免疫學(xué)的加速發(fā)展,慢慢發(fā)現(xiàn)多種細(xì)胞因子及炎癥介質(zhì)等參與了 RA的發(fā)病過程中的各個(gè)免疫調(diào)節(jié)環(huán)節(jié)。本次實(shí)驗(yàn)研究通過測(cè)定佐劑性關(guān)節(jié)炎模型大鼠血清 IL-1、TGF-β水平,來深入探究阿奇霉素對(duì)佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠的治療療效。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng) 物:清 潔級(jí) Wistar大鼠 45只 ,雌性 ,大 約 8～

12周齡,160～210g。 [大連醫(yī)科大學(xué),動(dòng)物許可證號(hào):SCXK(遼 )2800— 0002]。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)器材:阿奇霉素注射液 (衛(wèi)材藥業(yè)有限公司),完全弗氏佐劑(CFA,50mg/支、Sigma公司),IL-1、TGF-β酶聯(lián)免疫試劑盒(天津索羅門生物科技有限公司 ),電熱恒溫水槽、ST-21低溫高速離心機(jī)(均由佳木斯大學(xué)提供)。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠模型的建立:將 BCG與 CFA使用前充分混合搖勻,從中取適量 BCG和 CFA經(jīng)由雙注射器來回推吸乳化,配制為20mg BCG/mL乳劑。將45只佐劑性關(guān)節(jié)炎模型大鼠隨機(jī)抽樣分為正常組 (Ⅰ組)、模型組(Ⅱ組 )和阿奇霉素治療組 (Ⅲ 組),每組均為15只。Ⅱ 組與Ⅲ組的老鼠分別用75%酒精消毒后,于足跖部注射上述配制的乳劑0.2mL(含 BCG4mg),Ⅰ組分別于相應(yīng)部位注射等劑量的0.2mL生理鹽水。開始造模后分別于第 6、12天給予加強(qiáng)注射10mg BCG/mL的乳劑0.1mL,強(qiáng)化免疫炎癥反應(yīng)。

1.2.2 佐劑性關(guān)節(jié)炎模型大鼠的干預(yù):成功免疫后第14天開始,第Ⅰ、Ⅱ組分別以生理鹽水 (1mL/100g體重)腹腔注射兩周,Ⅲ組給予腹腔注射阿奇霉素注射液兩周,用藥量大約相當(dāng)于人150mg/d。

1.2.3 實(shí)驗(yàn)標(biāo)本采集和檢測(cè):干預(yù)治療后大鼠分別斷頭取血約5mL,離心機(jī)低溫離心,留取上清液,-80℃保存。用酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定血清中 IL-1、TGF-β的濃度。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

見表 1。

表1 大鼠血清中 IL-1、TGF-β表達(dá)水平的比較 (±s,n=10)

表1 大鼠血清中 IL-1、TGF-β表達(dá)水平的比較 (±s,n=10)

注:*與正常組相比較 P＜0.05;&與模型組比較 P＜0.05;#與治療組比較 P＞ 0.05。

組別 TGF-β IL-1正常組 0.81± 0.06# 16.78± 1.40#造模組 0.37± 0.11* 46.40± 2.30*阿奇霉素組 0.63±0.14& 26.73±3.59*

3 討論

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的具體發(fā)病機(jī)理目前仍不清楚。細(xì)胞因子和炎癥介質(zhì)的增加很可能是導(dǎo)致關(guān)節(jié)的滑膜炎癥、骨質(zhì)結(jié)構(gòu)與功能破壞,進(jìn)而造成畸變的主要緣由。類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的病患分泌的各種細(xì)胞因子主要是單核滑膜細(xì)胞與 A型滑膜細(xì)胞。除此之外成纖維細(xì)胞、軟骨細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞等都可分泌一些不同的細(xì)胞因子。按照其起源的差異可分為兩組:一類是來源于 T細(xì)胞產(chǎn)生的,這里包含有 IL-2、IL-4、IL-10、IFN-γ、TNF-β等,另一方面是由巨噬細(xì)胞產(chǎn)生的單核細(xì)胞因子,包含的因子有 IL-1、IL-6、IL-8、TN F-α、GM-CSF、TGF-β等。上述的各種細(xì)胞因子在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的病程發(fā)展過程中分別不同程度起促炎或抑炎的正負(fù)反饋的免疫調(diào)節(jié)作用。

阿奇霉素是在紅霉素結(jié)構(gòu)上修飾后得到的一種廣譜抗生素,阿奇霉素與紅霉素在抗菌的病因機(jī)制中具有共同性,都是經(jīng)過和敏感細(xì)菌核糖體亞基的結(jié)合,來抑制肽?；莆?進(jìn)而抑制移位酶,阻止肽鏈的延長(zhǎng)。最終阻礙細(xì)菌內(nèi)的蛋白質(zhì)合成來發(fā)揮殺菌功效。來自臨床的大量實(shí)驗(yàn)表明:通過下調(diào)致炎性因子和吞噬細(xì)胞的氧化產(chǎn)物在感染免疫性疾病以及其他炎癥條件中起到調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)機(jī)制的作用。此類抗生素的免疫調(diào)節(jié)機(jī)制對(duì)各種炎癥介質(zhì)和細(xì)胞因子的作用有密切關(guān)系。加上其促進(jìn)單核巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞凋亡作用也說明了此類抗生素的免疫調(diào)節(jié)作用與細(xì)胞凋亡有著密切的聯(lián)系。

轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β(TGF-β)是一組包括有轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子、骨形成蛋白、抑制素、繆勒氏管抑制物質(zhì)等物質(zhì)的蛋白超家族。TGF-β因其是多效能的生長(zhǎng)因子,一方面在促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)的分泌,誘使胚胎、骨、血管以及血細(xì)胞生成,調(diào)整細(xì)胞的遷移與凋亡和免疫應(yīng)答反應(yīng)中起著重要的調(diào)節(jié)作用。另外,轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β既能增強(qiáng)和控制單核細(xì)胞的功能,也能阻止 T-細(xì)胞、B-細(xì)胞的增殖,抑制巨噬細(xì)胞的成熟與活性,還可抑制自然殺傷細(xì)胞和淋巴因子-激活的殺傷細(xì)胞LAK活性,阻止細(xì)胞因子的產(chǎn)生。這表明 TGF-β在自身免疫炎癥方面有著重要意義。

本研究中造模后大鼠血清中 TGF-β水平相較正常對(duì)照組有明顯下降,和過去的研究結(jié)果基本符合。使用阿奇霉素注射液藥物治療后大鼠血清中 TGF-β的水平相較模型組大鼠有明顯升高,據(jù)此猜測(cè)阿奇霉素有促進(jìn)抑炎因子 TGF-β的分泌和釋放的功效。認(rèn)為可能的機(jī)制是通過調(diào)節(jié)細(xì)胞因子作用,來糾正 TH1/TH2比例的不協(xié)調(diào),從而穩(wěn)定肥大細(xì)胞的膜組織,調(diào)整紊亂的細(xì)胞免疫和體液免疫,以此達(dá)到抗過敏作用。

IL-1是人類迄今為止發(fā)現(xiàn)的最早的細(xì)胞因子,其來源主要是單核-巨噬細(xì)胞系統(tǒng)。從類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎病患的血清和關(guān)節(jié)液中檢測(cè)出了高水平的 IL-1,這一點(diǎn)業(yè)已得到證實(shí)。據(jù)研究報(bào)道表明:血清中 IL-1的水平與疾病的活動(dòng)性特征,比如關(guān)節(jié)滑膜肥大,白細(xì)胞的大量浸潤(rùn),關(guān)節(jié)液的軟骨降解產(chǎn)物增多 ,細(xì)胞外基質(zhì)合成減少等都有密切關(guān)系。IL-1還可以協(xié)調(diào)多種細(xì)胞黏附分子、免疫調(diào)節(jié)分子以及前炎癥介質(zhì)的表達(dá)水平,在 RA的骨侵蝕及滑膜破壞中發(fā)揮重要作用機(jī)制。

本次實(shí)驗(yàn)中佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠血清中 IL-1水平相較正常組有明顯升高,和既往的研究結(jié)果基本一致。運(yùn)用阿奇霉素注射液后大鼠血清中 IL-1的水平相較模型組有明顯降低,由此推測(cè)阿奇霉素注射液能有效抑制致炎因子 IL-1的分泌和釋放。其機(jī)制有可能是阿奇霉素明顯抑制了抗原提呈細(xì)胞對(duì) T細(xì)胞的激活,遏制了 TGF介導(dǎo)的細(xì)胞免疫作用,來調(diào)節(jié)免疫反應(yīng),改善其免疫功能。

總之,阿奇霉素注射液通過增強(qiáng)抑炎因子 TGF-β在模型大鼠中的表達(dá),阻礙致炎性因子 IL-1的分泌和釋放,來調(diào)控大鼠體內(nèi)的各種炎癥性細(xì)胞因子的平衡,明顯延緩佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠的病情發(fā)展,從而推測(cè)其對(duì) RA具有一定的治療功效。

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