周臻濤林小軍

1.中山大學(xué)附屬梅州市人民醫(yī)院腫瘤外一科，廣東梅州514031；2.中山大學(xué)腫瘤防治中心肝膽腫瘤外科，廣東廣州510060

垂體腫瘤轉(zhuǎn)化基因1(Pituitary Tumor Transforming Gene 1,PTTG1)是一種新的癌基因,于1997年首先克隆自大鼠垂體腫瘤[1]。隨后于1998年自人睪丸中克隆出人PTTG1,位于5號(hào)染色體長(zhǎng)臂5q33[2]。體外實(shí)驗(yàn)顯示,該基因在小鼠成纖維細(xì)胞中過表達(dá)可導(dǎo)致細(xì)胞轉(zhuǎn)化,體內(nèi)實(shí)驗(yàn)則顯示可促進(jìn)腫瘤的形成[1]。在所有被研究的腫瘤細(xì)胞(包括肺癌、乳腺癌、結(jié)腸癌、垂體腫瘤等)中都有高表達(dá)，并與腫瘤的侵襲性相關(guān)[2-6]。有關(guān)PTTG1在肝細(xì)胞癌表達(dá)的研究報(bào)道較少，2009年1月—2012年期間該研究檢測(cè)原發(fā)性肝細(xì)胞癌（hepatocellular carcinoma HCC）組織及相應(yīng)癌旁肝組織中PTTG1蛋白的表達(dá)情況，旨在探討其臨床意義。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集該院行根治性切除，且臨床病理資料完整的肝細(xì)胞癌病例標(biāo)本及相應(yīng)的癌旁肝組織79例，均經(jīng)病理組織學(xué)證實(shí)為肝細(xì)胞癌。其中男性69例，女性10例；年齡17～72歲，中位年齡49歲；HBsAg陽(yáng)性73例；肝功能Child-Pugh分級(jí)，Child-A級(jí)78例，Child-B級(jí)1例；無(wú)肝硬化19例，輕度肝硬化39例，中度肝硬化18例，重度肝硬化3例；肝癌組織按Edmondson病理分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分級(jí)，Ⅰ級(jí)6例，Ⅱ級(jí)41例，Ⅲ級(jí)28例，Ⅳ級(jí)4例；按2001年第八屆全國(guó)肝癌學(xué)術(shù)會(huì)議提出的肝癌臨床分期標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分期，I期27例，II期52例，無(wú)Ⅲ、Ⅳ期患者。所有標(biāo)本均用10%福爾馬林固定，常規(guī)石蠟包埋，連續(xù)石蠟切片，厚4 μm，每個(gè)臘塊切片3張，2張免疫組化染色，另一張作HE染色。

1.2方法

免疫組織化學(xué)檢查采用EnVision兩步法。濃縮型兔抗人PTTG1多克隆抗體購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司，工作液濃度1∶200。即用型免疫組化chemMate TM EnVision二抗試劑盒購(gòu)自DaKo公司。實(shí)驗(yàn)步驟按試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行，最后DAB顯色。以試劑公司提供的陽(yáng)性對(duì)照片作為陽(yáng)性對(duì)照，以磷酸鹽緩沖液代替一抗作為陰性對(duì)照。

1.3結(jié)果判斷

在普通光學(xué)顯微鏡下閱片，在高倍鏡下（400×）隨機(jī)觀察5～10個(gè)視野，觀察細(xì)胞漿的染色深淺和計(jì)算胞漿陽(yáng)性的細(xì)胞所占的百分比。染色結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)參照Fromowitz等[7]陽(yáng)性細(xì)胞半定量分級(jí)法，在高倍鏡下對(duì)細(xì)胞染色作如下評(píng)分：根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞占整個(gè)腫瘤細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)打分：＜5%為0分，5%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，＞75%為4分。根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞染色深淺打分：無(wú)著色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為 3 分；兩項(xiàng)結(jié)果相加＜2 分為陰性(-)，2～3 分為弱陽(yáng)性(+)，4～5分為中度陽(yáng)性(++)，6～7 分為強(qiáng)陽(yáng)性(+++)，其中-～+視為低表達(dá)，++～+++視為高表達(dá)。以上結(jié)果均由2位病理科醫(yī)師采用雙盲法觀察并確定。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法

數(shù)據(jù)資料統(tǒng)計(jì)分析采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 PTTG1在肝癌組織、癌旁肝組織及正常肝組織中的表達(dá)

PTTG1在上述各組織中陽(yáng)性染色位于細(xì)胞漿，呈棕黃色顆粒狀，細(xì)胞核染色為陰性。在肝癌組織、癌旁肝組織中PTTG1高表達(dá)率分別為53.2%、1.3%。兩組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.000＜0.05），見表 1。

表1 2種組織中PTTG1的表達(dá)情況[n（%）]

2.2 肝癌組織中PTTG1的表達(dá)與臨床病理指標(biāo)的關(guān)系

免疫組化結(jié)果顯示PTTG1的表達(dá)水平與衛(wèi)星結(jié)節(jié)，Edmondson病理分級(jí)密切相關(guān)。PTTG1在無(wú)衛(wèi)星結(jié)節(jié)組和有衛(wèi)星結(jié)節(jié)組高表達(dá)率分別為39.7%、68.7%，兩組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＝0.037＜0.05）；PTTG1 在 Edmondson 分級(jí)Ⅰ、Ⅱ組和Ⅲ、Ⅳ組高表達(dá)率分別為 38.3%、62.5%，兩組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＝0.035＜0.05）。PTTG1 表達(dá)水平與性別、年齡、AFP、HBsAg、肝硬化程度、ICGR15、TNM分期、腫瘤大小及腫瘤包膜狀況無(wú)關(guān)（P>0.05）。見表2。

表2 肝癌組織中PTTG1表達(dá)與其臨床病理指標(biāo)的關(guān)系[n（%）]

3 討論

PTTG1基因是一種癌基因，體外實(shí)驗(yàn)顯示，該基因在小鼠成纖維細(xì)胞中過表達(dá)可導(dǎo)致細(xì)胞轉(zhuǎn)化，體內(nèi)實(shí)驗(yàn)則顯示可促進(jìn)腫瘤的形成。PTTG1是Ramaswamy等[2]報(bào)道的17種與原發(fā)性實(shí)體腫瘤轉(zhuǎn)移有關(guān)的基因之一。目前認(rèn)為PTTG1促進(jìn)腫瘤發(fā)生發(fā)展的作用機(jī)制主要有以下幾個(gè)方面:①作為保全素(Securin)可抑制分裂期細(xì)胞姊妹染色單體的分離,使子代細(xì)胞非整倍體化，增加突變幾率，促進(jìn)腫瘤表型惡化；②PTTG1蛋白中含有的PXXP基序可與多種細(xì)胞內(nèi)接頭蛋白的SH3域結(jié)合,通過募集多種胞內(nèi)信號(hào)分子,將生長(zhǎng)刺激信號(hào)傳至核內(nèi),激活多種腫瘤相關(guān)基因的表達(dá),使細(xì)胞發(fā)生轉(zhuǎn)化；③PTTG1可上調(diào)bFGF，后者可誘導(dǎo)腫瘤組織新生血管形成，促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)、侵襲與轉(zhuǎn)移。有關(guān)PTTG1在肝癌組織中表達(dá)的研究國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)報(bào)道不多，F(xiàn)ujii等[8]報(bào)道肝癌組織中PTTG1 mRNA表達(dá)水平明顯高于癌旁肝組織，PTTG1蛋白在肝癌組織中高表達(dá)，定位在胞漿，而在癌旁肝組織中不表達(dá)。Su等[9]采用RT-PCR方法檢測(cè)147例肝癌組織發(fā)現(xiàn)PTTG1 mRNA高表達(dá)率為61%（80/147）。該實(shí)驗(yàn)通過免疫組化的方法研究表明PTTG1陽(yáng)性染色定位于細(xì)胞漿中，在肝癌組織中高表達(dá)率53.2%，明顯高于癌旁組織的高表達(dá)率1.3%(P<0.05)，提示PTTG1在原發(fā)性肝細(xì)胞癌的發(fā)生過程中可能起著某種作用，推測(cè)這種作用可能與PTTG1的促進(jìn)細(xì)胞增殖與惡性轉(zhuǎn)化功能有關(guān)，但其確切的作用機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。

有關(guān)PTTG1與臨床病理指標(biāo)的研究，在其他腫瘤中的研究較多。Rehfeld等[10]報(bào)道在非小細(xì)胞肺癌 （nonsmall-cell lung cancer，NSCLC）中，PTTG1高表達(dá)的患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移發(fā)生率高。在結(jié)腸癌中的研究[11]表明有周圍淋巴結(jié)浸潤(rùn)的結(jié)直腸癌較局限于腸壁的結(jié)直腸癌有更高的PTTG1表達(dá)。Wen[12]等研究發(fā)現(xiàn)PTTG1與胃癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。有關(guān)PTTG1的表達(dá)與肝細(xì)胞癌臨床病理指標(biāo)關(guān)系的研究，國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)報(bào)道較少。該研究表明，PTTG1的表達(dá)水平與衛(wèi)星結(jié)節(jié)、病理分級(jí)有關(guān)，即有衛(wèi)星結(jié)節(jié)、分化程度差者PTTG1高表達(dá)率較無(wú)衛(wèi)星結(jié)節(jié)、分化程度好者要高，而與患者性別、年齡、AFP水平、肝炎狀態(tài)、肝硬化程度、肝功能儲(chǔ)備情況、TNM分期、包膜情況及腫瘤大小無(wú)關(guān)。衛(wèi)星結(jié)節(jié)、病理分級(jí)可反映肝細(xì)胞癌惡性程度的高低，與肝細(xì)胞癌的預(yù)后密切相關(guān)。PTTG1高表達(dá)與衛(wèi)星結(jié)節(jié)有關(guān)，提示PTTG1可能參與肝癌的侵襲轉(zhuǎn)移過程。腫瘤的病理分級(jí)反映了腫瘤細(xì)胞的分化程度，病理分級(jí)越高，分化程度越差，而腫瘤細(xì)胞分化越差則惡性程度越高，PTTG1在病理分級(jí)高的肝癌中高表達(dá)率升高，提示PTTG1可能通過某種機(jī)制抑制了肝癌細(xì)胞的分化，增強(qiáng)了肝癌的惡性生物學(xué)行為。

肝癌的發(fā)生發(fā)展是一個(gè)十分復(fù)雜的過程，該研究中顯示肝癌組織中PTTG1的表達(dá)明顯高于癌旁肝組織及正常肝組織，肝癌組織中PTTG1的表達(dá)水平與衛(wèi)星結(jié)節(jié)、Edmondson病理分級(jí)相關(guān)，提示PTTG1可能在肝癌的發(fā)生過程中起著重要作用，并可能參與肝癌的侵襲轉(zhuǎn)移過程，但具體機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。

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