李培培 王建華 張寶珣 （青島市畜牧獸醫(yī)研究所 山東 青島 266100）

植物性飼料中的磷通常是以植酸磷的形式存在，是一個含六個磷酸基團(tuán)的環(huán)狀化合物。通常將植酸磷列入抗?fàn)I養(yǎng)因子，不僅與植物中大多數(shù)磷結(jié)合(40%～70%)，還與金屬離子、蛋白質(zhì)、氨基酸、淀粉等營養(yǎng)物質(zhì)結(jié)合成為不溶性的絡(luò)合物，使礦物質(zhì)、營養(yǎng)物質(zhì)的消化、吸收受到影響，降低了飼料的營養(yǎng)價值。另一方面，磷是動物所必需的營養(yǎng)物質(zhì)，由于植物性飼料中總磷的消化利用率很低，在畜禽飼料中不得不補(bǔ)充大量的磷元素，勢必造成磷源的浪費，導(dǎo)致磷的過量排放。因此，測定飼料中的植酸磷含量，對于評價飼料、研究動物營養(yǎng)、減少有害物質(zhì)的排放、促進(jìn)畜牧業(yè)發(fā)展具有重要意義。

測定植物性飼料中植酸磷含量的方法主要有：TCA法(三氯乙酸法，Trichloroacetic acid method)，離子交換法(Ion exchange process)，高效液相色譜法，極譜法(Polarography)，近紅外光譜法(Near-infraredspectrometry;NIR)等，后幾種方法因需要大型精密儀器難以普及，TCA法分析步驟繁瑣，本文改進(jìn)了鐵離子沉淀法，使之成為一種簡單、快速、重復(fù)性好的測定植酸磷的方法。

1 材料與方法

1.1 儀器

分析天平(日本島津，精確到0.0001g)，恒溫振蕩搖床(上海智誠)；數(shù)顯恒溫水浴鍋(上海金壇)；自動平衡離心機(jī)(湖南賽特湘儀)；調(diào)溫電熱套(博大精科)；723A型可見光光度計(上海分析儀器總廠)。

1.2 試劑

1.2.1 濃硫酸 98%，ρ=1.84g/ml。

1.2.2 濃硝酸 ρ=1.40g/ml。

1.2.3 1.2%鹽酸溶液 量取26.8ml鹽酸，100g無水硫酸鈉，加水溶解后稀釋至1L。

1.2.4 1.0%三氯化鐵溶液 稱取10gFeCl3.6H2O，加入500ml1.2%的鹽酸溶液，溶解后用水稀釋至1L；

1.2.5 0.80mol/L硫酸溶液 量取42ml硫酸慢慢倒入水中，稀釋至1L；

1.2.6 10%鉬酸銨溶液 10g鉬酸銨加入約60℃的水溶解，冷卻后定容至100ml；

1.2.7 2.0%抗壞血酸 2g抗壞血酸溶于水中，定容至100ml，現(xiàn)用現(xiàn)配；

1.2.8 磷標(biāo)準(zhǔn)溶液配制 磷標(biāo)準(zhǔn)溶液：將磷酸二氫鉀105℃烘干2h，冷卻30min，稱取0.8780g用水溶解后，加入3ml濃硝酸，用水稀釋至1L，此溶液磷濃度為200mg/L；

1.2.9 磷標(biāo)準(zhǔn)工作溶液 將磷標(biāo)準(zhǔn)溶液用水準(zhǔn)確稀釋10倍后使用，此溶液濃度為20mg/L。

2 試驗方法

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

移取已配好的磷標(biāo)準(zhǔn)工作溶液0、2、4、6、8、10ml于50ml容量瓶中，分別加入0.80mol/L硫酸溶液4ml，10%鉬酸銨0.4ml，2.0%抗壞血酸0.5ml，加水稀釋至刻度，立即搖勻；顯色20min，在723A型分光光度計660nm下測定溶液吸光度，并繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線。

圖1 磷標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.2 分析方法

（1）稱取飼料樣品1g(精確到0.0001g)，放入150ml帶蓋錐形瓶中，準(zhǔn)確加入1.2%鹽酸溶液100ml(植酸含量低于0.5%的樣品加50ml)，150rpm振蕩1h，用定性濾紙過濾。（2）準(zhǔn)確移取濾液10ml于20ml離心管中，加1.0%三氯化鐵溶液4ml(植酸磷含量低于0.5%的樣品加2ml)，置于沸水浴中30min，取出后迅速冷卻至常溫，2000rpm離心25min。（3）棄去上清液，向沉淀物中加入5ml濃硝酸和2ml濃硫酸，將沉淀物攪起，用水沖洗，全部轉(zhuǎn)入50ml凱氏瓶中，并加入2粒玻璃珠，防止暴沸；將凱氏瓶置于調(diào)溫電熱套上消解至冒白煙，加10ml蒸餾水煮沸至沉淀全部溶解，冷卻到常溫后將液體全部轉(zhuǎn)移至100ml容量瓶中，定容，搖勻，靜置10min。（4）準(zhǔn)確移取消解液10ml于50ml容量瓶中，加入0.80mol/L硫酸溶液4ml，10%鉬酸銨0.4ml，去離子水30ml，搖勻，加2.0%抗壞血酸0.5ml，加水稀釋至刻度，立即搖勻；準(zhǔn)確顯色20min，在723A型分光光度計660nm下測定溶液吸光度；

2.3 植酸磷含量計算公式

3 結(jié)果與討論

3.1 各種植物性飼料中植酸磷含量

植酸磷/總磷的比值變動范圍在0%～93 %之間(Viveros等，2000)，不同植物性飼料其植酸磷的含量差異很大。對5種飼料樣品的植酸磷含量進(jìn)行了分析(表1)，含量差異較大，麩皮植酸磷含量為0.555%，玉米含量最低，為0.140%。Maga(1982)指出植酸磷含量受土壤、環(huán)境條件的影響，實驗中的玉米樣品均產(chǎn)自膠東半島，受土壤環(huán)境影響較小，因此變異系數(shù)和標(biāo)準(zhǔn)差最??；其它樣品產(chǎn)地分散，所以標(biāo)準(zhǔn)差和變異系數(shù)較大。

表1 各種植物性飼料植酸磷含量

3.2 精密度和準(zhǔn)確度試驗

用本方法對5個樣品重復(fù)測定6次，其變異系數(shù)都小于5%(見表2)，說明實驗精密度較高。準(zhǔn)確度實驗：選5個植酸磷含量已知的樣品，稱取1g(準(zhǔn)確到0.0001g)，準(zhǔn)確加入0.05g(準(zhǔn)確到0.0001g)植酸鈉標(biāo)樣，按文中方法對其進(jìn)行分析，重復(fù)6次，所得結(jié)果減去飼料樣品中含量，即得植酸鈉中植酸含量，結(jié)果見表3。5個樣品平均回收率變化范圍為97.5～100.1，表明本方法有較好的準(zhǔn)確度。

表2 精密度試驗 (%)

表3 準(zhǔn)確度試驗 (g、%)

綜上所述，該方法可用于植物性飼料原料中植酸磷含量檢測，通過準(zhǔn)確度和精密度實驗，說明該方法可靠，操作簡單，重復(fù)性好，靈敏度高，便于推廣應(yīng)用。

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