趙愛(ài)蓮 楊 林 劉建民

（遵義醫(yī)學(xué)院第五附屬（珠海）醫(yī)院 廣東 珠海 519000）

骨質(zhì)疏松癥是危及老年人健康的三大疾病之一，關(guān)于骨質(zhì)疏松的預(yù)防及治療仍沒(méi)有令人滿(mǎn)意的方法，臨床上關(guān)于骨質(zhì)疏松的實(shí)驗(yàn)研究很多，主要基于建立骨質(zhì)疏松癥動(dòng)物模型，兔是比較常用的動(dòng)物之一，本文敘述大耳兔去勢(shì)手術(shù)方法，并對(duì)脊柱骨質(zhì)的CT形態(tài)及QCT骨密度進(jìn)行研究，分析兔脊柱骨在手術(shù)后形態(tài)與骨密度的改變。

1 方法

將16只5月齡雌性大耳兔隨機(jī)分為手術(shù)組和偽手術(shù)組，每組各8只。

麻醉使用丙泊酚注射液，用生理鹽水按1∶5稀釋?zhuān)昧繛?.0－2.5mg／Kg體重，經(jīng)耳緣靜脈緩慢注射，一邊注射一邊觀察兔的角膜反應(yīng)、肌松程度、痛疼反應(yīng)，達(dá)到麻醉狀態(tài)后立即停止注藥，以防出現(xiàn)麻醉意外；待麻醉生效后保留靜脈通道，開(kāi)始進(jìn)行手術(shù)，術(shù)中根據(jù)兔麻醉情況適當(dāng)追加劑量，保證手術(shù)正常進(jìn)行。

麻醉生效后首選進(jìn)行備皮，用剪毛剪剪去兔腹部皮毛，用碘伏皮膚消毒，鋪無(wú)菌巾，用左手拇、食二指橫向繃緊腹壁，右手用手術(shù)刀在腹正中縱向切一小口，并切透腹膜，然后用食指和中指伸入切開(kāi)的小口，用手術(shù)剪在兩手指之間小心地沿腹正中線(xiàn)向上將腹膜、肌肉、皮膚一次剪開(kāi)4～5cm，注意不要損傷腹內(nèi)器官；腹壁切開(kāi)后，將腸管輕輕向一邊撥開(kāi)，在腎臟后面尋找淡紅色的卵巢；如果沒(méi)有發(fā)現(xiàn)可沿著子宮輸卵管，于輸卵管末端，脊柱兩側(cè)尋找；找到卵巢后，手術(shù)組首先結(jié)扎卵巢兩端組織及血管，然后分別切除兩側(cè)卵巢，關(guān)閉腹腔（注意不要把卵巢掉入腹腔）；偽手術(shù)組打開(kāi)腹腔并找到卵巢不做特殊處理后即關(guān)閉腹腔，用消毒過(guò)的腸線(xiàn)將腹膜、肌肉一次縫合，然后在傷口區(qū)灑上青霉素G80萬(wàn)單位，再用螺旋縫合法縫合皮膚，傷口縫合后在傷口上涂碘酊消毒；術(shù)后3天內(nèi)肌注青霉素G80萬(wàn)單位，每天1次。術(shù)后兔自由喂食、飲水，飼養(yǎng)溫度20－25℃，相對(duì)濕度為40%－70%。

脊柱骨的CT檢測(cè)用Siemens Somatom CT機(jī)、CT機(jī)配套的骨密度檢測(cè)模型及配套軟件；術(shù)前、術(shù)后1月、2月、3月及4月分別做CT腰椎骨層厚1mm薄層容積掃描；進(jìn)行QCT骨密度檢測(cè)，并稱(chēng)體重；做CT檢查對(duì)兔進(jìn)行麻醉，麻醉方法和手術(shù)麻醉一樣；術(shù)后用薄層掃描數(shù)據(jù)做冠狀位及矢狀位多平面重組以及SSD重建。

QCT檢測(cè)：將麻醉后的兔仰臥放在骨密度測(cè)量模型上面，測(cè)量靠近脊柱骨兩端的松質(zhì)部分，用3mm層厚序列掃描，通過(guò)機(jī)器配置的骨密度測(cè)量軟件自動(dòng)計(jì)算骨密度，每次復(fù)查檢測(cè)對(duì)比部位距腰椎骨端的距離一致。

2 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 15.0for windows統(tǒng)計(jì)軟件，組間均數(shù)比較用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，手術(shù)前后均數(shù)比較用配對(duì)t檢驗(yàn)。

3 結(jié)果

16只兔手術(shù)均一次成功，術(shù)后兔均正常生活至實(shí)驗(yàn)結(jié)束，其中12例順利在腎背后方找到卵巢，4例順著卵巢找到位于腎旁的卵巢，手術(shù)時(shí)間10分至25分鐘，平均約15分鐘；偽手術(shù)組時(shí)間比手術(shù)組平均短約2分鐘。

脊柱骨在術(shù)后3月密質(zhì)骨明顯變薄，兩端松質(zhì)骨密度減低，松質(zhì)部分范圍縮小，偽手術(shù)組變化不明顯。

手術(shù)組及偽手術(shù)組術(shù)前腰椎骨端松質(zhì)骨平均骨密度無(wú)差異；手術(shù)組術(shù)后松質(zhì)骨密度逐漸下降，但1、2月與術(shù)前比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；3、4月與術(shù)前比較骨密度減少有顯著差異（P＜0.01），術(shù)后第4個(gè)月松質(zhì)骨密度較術(shù)前減低27.14%（符合骨質(zhì)疏松診斷標(biāo)準(zhǔn)）。偽手術(shù)組術(shù)后各月變化沒(méi)有統(tǒng)計(jì)意義，兩組間的腰椎骨端松質(zhì)骨骨密度在術(shù)后1、2月無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差別，3、4月份兩組間都有顯著差異（P＜0.01）。

4 討論

骨質(zhì)疏松癥是以骨組織顯微結(jié)構(gòu)退化，骨礦物成分和骨基質(zhì)等比例地減少，骨皮質(zhì)變薄，骨小梁數(shù)量減少，骨脆性增加和骨折危險(xiǎn)度升高的一種全身骨代謝障礙的疾病，嚴(yán)重危及老年人健康，臨床上有很多關(guān)于骨質(zhì)疏松的研究，主要基于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，在骨質(zhì)疏松癥動(dòng)物模型的報(bào)道中，選用的動(dòng)物多為大鼠，而大鼠的骨體積小、骨量較少；一些作者［1，2］選用兔制作骨質(zhì)疏松模型，兔具有以下優(yōu)點(diǎn)：性情溫順，易于獲取，便于飼養(yǎng)，成本低廉，取血方便而利于動(dòng)態(tài)觀察。骨骼轉(zhuǎn)化快，約為人的三倍，故短期內(nèi)即可觀察到骨組織的改變［3］；兔骨質(zhì)疏松模型的建立主要方法也是去勢(shì)法，詳細(xì)介紹雌兔去勢(shì)手術(shù)的文章不多。

兔的卵巢為卵圓形，長(zhǎng)1.0－1.7cm，寬0.3－0.7cm，淡紅色，表面常有半透明的顆粒狀突起，形似桑椹，位于腹腔背側(cè)脊柱兩側(cè)緣，輸卵管的前端附近［4］，Merle［5］指出卵巢一般位于腎臟的背側(cè)尾端脂肪內(nèi)，卵巢懸韌帶的足夠長(zhǎng)，這樣就容易將卵巢、輸卵管和子宮角拉出卵巢窩，方便手術(shù)。

Merle對(duì)兔在內(nèi)的嚙齒類(lèi)去勢(shì)手術(shù)方式采取俯臥，從背部做小切口，然后從脊柱兩旁最后面了骨下緣進(jìn)入腹內(nèi)切除卵巢，這種方法創(chuàng)傷小，但操作難度大，要求手術(shù)者必須非常熟練，并且容易損傷肝脾及腎。

盧慶琢［6］的方法是自膝皺褶前緣向腹中線(xiàn)作垂線(xiàn)，其交點(diǎn)為切口部位，沿腹正中線(xiàn)向前將腹膜、肌肉、皮膚一次剪開(kāi)4－5cm，，這種方式切口大，利于尋找并切除卵巢；術(shù)后無(wú)需特殊護(hù)理。

我們采用兔仰臥，腹部正中切口，根據(jù)視野可適當(dāng)擴(kuò)大切口，一般從腸管側(cè)緣找到腎臟，在腎臟的背后側(cè)常常都能順利找到卵巢，少數(shù)是通過(guò)子宮角、卵巢找到卵巢。

腹壁采用分兩次縫合，在腹膜肌肉層縫合后在傷口上涂抹青霉素G，術(shù)后注射三天，全組未出現(xiàn)感染及其它并發(fā)癥。

本實(shí)驗(yàn)顯示手術(shù)組腰椎骨端松質(zhì)骨骨密度在手術(shù)后2月開(kāi)始下降，第3、4月下降明顯，與手術(shù)組術(shù)前及偽手術(shù)組術(shù)后同時(shí)間比較都有統(tǒng)計(jì)學(xué)的差異（P＜0.01）；第4月時(shí)與術(shù)前骨密度比較減低大于25%，根據(jù)中國(guó)人骨質(zhì)疏松癥建議診斷標(biāo)準(zhǔn)（第二稿）［7］，符合骨質(zhì)疏松診斷標(biāo)準(zhǔn)。偽手術(shù)組術(shù)前及術(shù)后1－4月松質(zhì)骨骨密度密沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，說(shuō)明本手術(shù)方法可靠，達(dá)到去勢(shì)建立骨質(zhì)疏松模型的效果。

5 結(jié)論

去勢(shì)法建立兔骨質(zhì)疏松癥模型切實(shí)可行，用通過(guò)腹部正中切口是一個(gè)操作簡(jiǎn)便、安全可靠的方法。

［1］ 張娟，黃少慧，吳湘慧，等.骨靈片對(duì)去勢(shì)大鼠骨小梁三維結(jié)構(gòu)／骨強(qiáng)度的干預(yù)研究［J］.熱帶醫(yī)學(xué)雜志，2008；8（5）：429－432

［2］ 宮琳，周延民，李春艷，等.快速建立兔骨質(zhì)疏松癥動(dòng)物模型的方法［J］.吉林大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版），2008；34（5）：903－906

［3］ 陳旭.骨質(zhì)疏松動(dòng)物模型的研究進(jìn)展（綜述）［J］.中國(guó)城鄉(xiāng)企業(yè)衛(wèi)生2009，132（4）：51－54

［4］ 胡建華，姚明，崔淑芳.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)教程［M］.上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社；2009：446－447

［5］ Merle E.Olson and Jim Bruce；Ovariectomy，Ovariohysterectomy and Orchidectomy in Rodents and Rabbits［J］.Can Vet J Volume 27，No.12December 1986525－527

［6］ 盧慶琢，鮑勝森，劉正吉.母兔的卵巢摘除術(shù)［J］；中國(guó)獸醫(yī)雜志，1994，11（20）：34

［7］ 劉忠厚，楊定焯，等.中國(guó)人骨質(zhì)疏松癥建議診斷標(biāo)準(zhǔn)（第二稿）［J］.中國(guó)骨質(zhì)疏松雜志，2002；6（1）：1