黃小蕾 程曉英

（1河南省漯河醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校，漯河462002；2吉林省吉林市食品藥品檢驗(yàn)所，吉林132001）

魚(yú)腥草中黃酮類成分的有效提取

黃小蕾1程曉英2

（1河南省漯河醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校，漯河462002；2吉林省吉林市食品藥品檢驗(yàn)所，吉林132001）

目的 研究魚(yú)腥草中黃酮類成分的有效提取方法。方法 采用改良流體萃取法提取魚(yú)腥草中黃酮類化合物，優(yōu)選最佳提取工藝，并進(jìn)行含量測(cè)定。結(jié)果 乙醇濃度50%，乙醇溶液流量1.8ml／分鐘，溫度70℃。萃取時(shí)間為27分鐘，萃取率為3.15%，總黃酮含量為24.0%，其中蘆丁、金絲桃苷、槲皮苷、槲皮素的萃取率分別為0.35%mg／g，1.52%mg／g，1.70%mg／g，0.50mg／g。結(jié)論魚(yú)腥草中黃酮類成分的改良流體萃取法效果明顯，值得推廣。

魚(yú)腥草；黃酮類成分；紫外分光光度法；改良流體萃取法

側(cè)耳根又稱魚(yú)腥草，它藥食兼優(yōu)，除了食用之外，還有良好的清熱解毒作用，對(duì)此人們一定熟知［1］。歸納我國(guó)的研究成果，主要體現(xiàn)在兩個(gè)方面，一是魚(yú)腥草對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物輻射損傷后免疫功能、細(xì)胞遺傳學(xué)、外周血象效果的研究以及魚(yú)腥草總黃酮抗輻射效果的研究；二是魚(yú)腥草對(duì)腫瘤患者進(jìn)行放射性治療后，發(fā)生的如放射性肺炎和放射性口腔炎（包括口腔黏膜反應(yīng)）等放射性損傷治療的研究［2］。尤其是后者具有很大的臨床意義，因?yàn)檫@些放射性損傷不僅來(lái)源于腫瘤的放射性治療，還可見(jiàn)于骨髓移植預(yù)處理和核輻射事故、核武器損傷等多種情況［3］。魚(yú)腥草中黃酮類化合物是魚(yú)腥草重要組成部分，包括蘆丁、金絲桃苷、槲皮素、槲皮苷等具有藥理作用的活性成分［4-5］。本文具體探討了改良流體萃取法提取魚(yú)腥草中黃酮類化合物的方法與效果，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 材料 試劑：95%乙醇、無(wú)水乙醇、氫氧化鉀、亞硝酸鋁、硝酸鋁等均為分析純。儀器：5L超臨界萃取裝置（島津公司）、電子天平、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器、真空泵（北京精密儀器儀器廠）、清洗器、粉碎機(jī)、恒流泵、干燥箱（西門(mén)子公司）、分光光度計(jì)、色譜泵、紫外檢測(cè)器（島津公司）。本實(shí)驗(yàn)原料為魚(yú)腥草全草，包括莖、葉和根，呈棕色，有特異腥味，產(chǎn)地四川，由本實(shí)驗(yàn)室提供。

1.2 提取方法 稱量約900g粉碎的魚(yú)腥草全草于5L萃取柱中，設(shè)定萃取溫度40℃，壓力20MPa。萃取30分鐘后，將萃取柱中萃余物取出。定量稱取約3g原料，溶劑潤(rùn)濕攪勻后裝入萃取柱。柱兩端墊上脫脂棉。當(dāng)達(dá)到設(shè)定的萃取柱溫后，打開(kāi)CO2進(jìn)口閥，柱溫柱壓均穩(wěn)定后，動(dòng)態(tài)加入溶劑的量為40mL。關(guān)閉溶劑泵，用CO2吹掃至無(wú)液體滴出，關(guān)閉CO2進(jìn)口閥。卸下萃取柱并清洗，用無(wú)水乙醇清洗管道。將萃取液倒入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器的蒸發(fā)瓶中，低壓蒸發(fā)，再放入真空干燥箱干燥后，用70%的乙醇溶解后，紫外分光光度法測(cè)定其中的總黃酮含量。

1.3 含量測(cè)定 精密吸取標(biāo)準(zhǔn)液0.2，1.0，2.0，4.0ml分別置于25ml量瓶中，各加水至6ml，加5%NaNO2試液1.0ml，放置6min。加10%AI（NO3）3試液1.0ml。放置6分鐘后，加5%KOH試液10ml，加水至刻度，搖勻，放置15分鐘，以相應(yīng)試劑做空白。得回歸方程A＝12.80667C-0.00108該回歸方程r＝0.99988，表明蘆丁含量在0.00214mg／ml～0.06426mg／ml范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。

2 結(jié)果

2.1 提取條件的優(yōu)化 本文在正交試驗(yàn)中，得到優(yōu)化的萃取條件為：乙醇濃度50%，乙醇溶液流量1.8ml／分鐘，溫度70℃即可。

2.2 含量結(jié)果 本文結(jié)果顯示，改良流體萃取法提取魚(yú)

腥草中黃酮類化合物的萃取時(shí)間為27分鐘，萃取率為3.15%，總黃酮含量為24.0%，其中蘆丁、金絲桃苷、槲皮苷、槲皮素的萃取率分別為0.35%mg／g，1.52% mg／g，1.70%mg／g，0.50mg／g。

3 討論

魚(yú)腥草為三白草科多年生草本植物蕺菜的干燥水上部分。能清熱解毒，利尿消腫。治肺炎，肺膿瘍，熱痢，瘧疾，水腫，淋病，白帶，癰腫，痔瘡，脫肛，濕疹，禿瘡，疥癬。魚(yú)腥草可以增強(qiáng)白細(xì)胞的吞噬能力，提高血清備解素，在治療慢性氣管炎時(shí)，合成魚(yú)腥草素可使患者白細(xì)胞對(duì)白色葡萄球菌的吞噬能力明顯提高，血清備解素明顯升高。家兔每日肌肉注射魚(yú)腥草素8mg［6］。連續(xù)給藥3天后，血清中備解素也明顯升高，魚(yú)腥草提高機(jī)體兔疫力，對(duì)感染性病的治療有著重要的意義。用魚(yú)腥草提取物灌流蟾蜍腎或蛙蹼，能使毛細(xì)血管擴(kuò)張，增加血流量及尿液分泌，從而具有利尿的作用。其作用可能由有機(jī)物所致，鉀僅起增加利尿的附加作用，直接作用時(shí)，能使鉤端螺旋體活動(dòng)減弱-死亡-裂解，亦能推遲人工感染鉤端螺旋體的豚鼠的發(fā)病期。魚(yú)腥草鮮汁對(duì)金黃色葡萄球菌有抑制作用，加熱后作用減弱．體外試驗(yàn)證明，魚(yú)腥草煎劑對(duì)多種革蘭陽(yáng)性細(xì)菌和陰性細(xì)菌如金黃色葡萄球菌、白色葡萄球菌、溶血性鏈球菌、肺炎雙球菌、卡他球菌、白喉?xiàng)U菌、變形桿菌、志賀、施氏、福氏及宋內(nèi)痢疾桿菌、腸炎桿菌等均有不同程度的抑制作用。

魚(yú)腥草中的黃酮類化合物包括蘆丁、金絲桃苷、槲皮素、槲皮苷等具有藥理作用的活性成分，傳統(tǒng)提取方法為有機(jī)溶劑提取法，多使用乙醇、甲醇、乙酸乙酯、乙醚、丙酮等作為溶劑。這類方法的特點(diǎn)是設(shè)備簡(jiǎn)單，產(chǎn)品得率高，但雜質(zhì)含量也較高。高濃度的醇適用于提取黃酮苷元，中等濃度的醇適用于提取黃酮苷，提取次數(shù)一般是2～4次。其次是采用用極性由小到大的溶劑依次提取，該法的優(yōu)點(diǎn)在于提取和分離可以同時(shí)實(shí)現(xiàn)，但是由于使用的溶劑種類多，工藝繁瑣，工業(yè)上應(yīng)用困難。同時(shí)由于黃酮類化合物種類多，其結(jié)構(gòu)和存在狀態(tài)不同，溶解度有很大差異，所以在提取該類成分時(shí)要恰當(dāng)?shù)倪x擇溶劑。游離的苷元，一般不易溶于水，而溶于甲醇、乙醇、乙酸乙酯等溶劑或稀堿溶液。

改良流體萃取技術(shù)是利用處于臨界壓力和臨界溫度以上的流體具有特異增加的溶解能力而發(fā)展出來(lái)的化工分離新技術(shù)。有研究使用超臨界CO2從大豆粉中萃取異黃酮類化合物，考察了溫度、壓力和夾帶劑含量等因素，并與索氏提取和超聲波輔助提取比較。還有研究測(cè)量了槲皮素在超臨界CO2和夾帶劑乙醇混合溶劑中的溶解度，發(fā)現(xiàn)其操作較為簡(jiǎn)便，易于分離，沒(méi)有殘留。有研究在萃取黃芩根中的黃酮類物質(zhì)時(shí)使用的超臨界CO2-70%的甲醇，并與傳統(tǒng)方法進(jìn)行對(duì)比，得出超臨界萃取優(yōu)化的工藝條件。而紫外分光光度法是根據(jù)物質(zhì)溶液本身顏色的深淺或被測(cè)物質(zhì)與顯色劑反應(yīng)生成物質(zhì)顏色的深淺來(lái)測(cè)定物質(zhì)濃度的一種方法，簡(jiǎn)便且快速。本文結(jié)果顯示，在改良流體萃取法提取中，總黃酮萃取率為3.15%，總黃酮含量為24.00%，其中蘆丁、金絲桃苷、槲皮苷、槲皮素的萃取率分別為0.35%mg／g，1.52% mg／g，1.70%mg／g，0.50mg／g。

總之，本文采用改良流體萃取法從魚(yú)腥草中提取黃酮類化合物，最終確定50%乙醇為合適的乙醇濃度，1.8mL／分鐘為合適的流量，70℃為合適的萃取溫度，總黃酮萃取率為3.15%，總黃酮的含量為24.00%，顯示了很好的效果。

［1］彭海燕，章永紅．中醫(yī)藥治療原發(fā)性肝癌的現(xiàn)狀與展望［J］．中西醫(yī)結(jié)合肝病雜志，2006，16（3）：184-187．

［2］任美萍，鐘琳，肖順漢．中藥抗腫瘤機(jī)制研究近況［J］．四川生理科學(xué)雜志，2006，28（4）：168-170．

［3］陳紹淑，趙寶玉，莫重輝，等．苦馬豆素對(duì)人食道癌Eca-109細(xì)胞體外生長(zhǎng)的抑制實(shí)驗(yàn)［J］．動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2003，24（3）：90-92．

［4］邱江勻，楊亞玲，楊國(guó)榮，等．魚(yú)腥草中總黃酮提取及其抗過(guò)敏活性的研究［J］．云南大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2005，27（3）：239-244．

［5］劉成梅，游海．天然產(chǎn)物有效成分的分離與應(yīng)用［M］．北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2009：170-188．

［6］胡杰，鄧宇．蘆丁提取工藝的綜述［J］．中國(guó)食物與營(yíng)養(yǎng)，2010，8（14）：45-47．

10.3969／j.issn.1672-2779.2013.15.108

1672-2779（2013）-15-0161-02

楊 佳

2013-05-23）