李春燕，湯德元*，張曉杰，曾智勇，羅險(xiǎn)峰，甘振磊

（1.貴州大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院 貴州 貴陽 550025； 2.貴州省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，貴州 貴陽 550008）

隨著現(xiàn)代分子生物學(xué)的迅速發(fā)展，新的核酸擴(kuò)增技術(shù)不斷出現(xiàn)。70 年代初，核酸內(nèi)切酶的發(fā)現(xiàn)使人們能夠通過分子克隆的方法分離并克隆基因。傳統(tǒng)的分子克隆技術(shù)包括酶切、連接、轉(zhuǎn)化、培 養(yǎng)以及同位素標(biāo)記、探針的篩選等過程，大約要用1～2 周時(shí)間才能完成。80 年代中期，人們建立了聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)(Polymerase Chain Reaction，PCR)，將DNA 擴(kuò)增過程縮短到了2 h～3 h，使得分子克隆技術(shù)得到了突破性的改進(jìn)。然而該技術(shù)的特點(diǎn)是溫度梯度的循環(huán)變化，因此需要特殊的實(shí)驗(yàn)設(shè)備。目前，核酸擴(kuò)增技術(shù)的一大研究熱點(diǎn)是恒溫反應(yīng)，即在恒溫條件下實(shí)現(xiàn)對靶標(biāo)序列的大量擴(kuò)增，從而不需要特殊的實(shí)驗(yàn)設(shè)備。而當(dāng)前恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)主要包括鏈置換擴(kuò)增法(strand displacement amplification，SDA)、核酸序列擴(kuò)增法(nucleic acid sequencebased amplification，NASBA)、轉(zhuǎn)錄介導(dǎo)擴(kuò)增法(Transcription Mediated Amplification，TMA) 和滾環(huán)擴(kuò)增法(Rolling Circle Amplification，RCA)等。其中環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增法(LAMP)是由Notomi 等于2000 年開發(fā)的一種新穎的恒溫核酸擴(kuò)增方法。其特點(diǎn)是針對靶序列的6 個(gè)特異性區(qū)域設(shè)計(jì)2 對引物，利用一種具有鏈置換活性的DNA 聚合酶(Bst DNA polymerase)在等溫條件下(65 ℃左右)放置30～60 min，即可實(shí)現(xiàn)核酸的大量擴(kuò)增，并且伴有肉眼可見的副產(chǎn)物白色焦磷酸酶沉淀產(chǎn)生。LAMP 技術(shù)以其特異性強(qiáng)、靈敏度高、快速準(zhǔn)確和操作簡單等優(yōu)點(diǎn)，在核酸的科學(xué)研究、疾病的診斷和預(yù)防、動(dòng)物胚胎的性別鑒定和轉(zhuǎn)基因食品檢測等領(lǐng)域得到了日益廣泛的應(yīng)用。本文主要綜述了LAMP 技術(shù)在豬傳染病檢測中的作用，為該技術(shù)的深入研究和應(yīng)用提供參考。

1 LAMP技術(shù)的原理

等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)(LAMP)是對靶基因的6 個(gè)特異部位設(shè)定2 對引物，利用具有鏈置換活性的Bst DNA 聚合酶在恒溫條件下催化新鏈合成，從而使靶基因高效擴(kuò)增，其反應(yīng)體系還包括模板DNA、dNTP 和緩沖液。其基本操作過程是將LAMP 反應(yīng)體系(除Bst DNA聚合酶)在95℃加熱5min 后，冷卻，再加入8U Bst DNA 聚合酶，在63℃保溫60 min，然后在高于80 ℃的溫度下加溫2 min 終止反應(yīng)。

等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)4 條引物中2 條為內(nèi)引物，2 條為外引物。內(nèi)引物FIP(forward inner primer) 包含F(xiàn)1c序列和F2(F2c 區(qū)域的互補(bǔ)序列)，即5′-F1c-F2；內(nèi)引物BIP(backward inner primer)包含B1c(B1 區(qū)域的互補(bǔ)序列) 和B2 序列，即5′ -B1c-B2。外引物為F3 和B3 序列。靶序列上的6個(gè)特異區(qū)域：F2c 和B2，F(xiàn)1c 和B1（分別位于F2c 和B2 內(nèi)側(cè)），F(xiàn)3c 和B3（分別位于F2c 和B2 外側(cè)），序列長度約為17nt～24nt 的[1]。

在LAMP 循環(huán)擴(kuò)增階段，這種啞鈴結(jié)構(gòu)的DNA 為循環(huán)反應(yīng)提供了原料，啞鈴結(jié)構(gòu)的DNA 通過自我引導(dǎo)延伸，生成雙鏈莖環(huán)結(jié)構(gòu)，循環(huán)反應(yīng)中引物FIP 結(jié)合到莖環(huán)DNA 的環(huán)狀結(jié)構(gòu)上，引導(dǎo)合成新的DNA 雙鏈，同時(shí)置換出與之相同序列的鏈，形成一個(gè)過渡性莖環(huán)結(jié)構(gòu)DNA，在其莖上含有一個(gè)靶序列反向拷貝，而另一端通過BIP 形成一個(gè)環(huán)狀結(jié)構(gòu)，在隨后自我引導(dǎo)的鏈置換DNA 合成反應(yīng)中生成一條填補(bǔ)好缺口、長度為靶DNA 2 倍的莖環(huán)DNA 和一個(gè)與結(jié)構(gòu)6 互補(bǔ)的DNA 鏈。這樣就在結(jié)構(gòu)6 和結(jié)構(gòu)12 之間建立了循環(huán)反應(yīng)。結(jié)構(gòu)8 和結(jié)構(gòu)14 可為伸長和再循環(huán)階段中由內(nèi)引物引導(dǎo)的鏈置換反應(yīng)提供模板。在伸長和再循環(huán)階段，內(nèi)引物引導(dǎo)鏈置換延伸反應(yīng)，莖環(huán)個(gè)數(shù)逐漸增加，最后的擴(kuò)增產(chǎn)物是一系列反向重復(fù)的靶序列構(gòu)成的莖環(huán)結(jié)構(gòu)和多環(huán)花椰菜樣結(jié)構(gòu)的DNA 片段混合物。

LAMP 擴(kuò)增產(chǎn)物檢測一般包括以下3 種方式：（1）SYBR Green I 檢測，在反應(yīng)液中加入SYBR Green I，可在紫外燈或日光下通過肉眼進(jìn)行擴(kuò)增結(jié)果判定。如果含有擴(kuò)增產(chǎn)物，反應(yīng)混合物變綠；反之，則保持SYBR Green I 的橙色不變；（2）副產(chǎn)物-焦磷酸鎂的濁度檢測，這種檢測方式具有極高的特異性，使用濁度儀甚至肉眼觀察就能夠判斷擴(kuò)增與否；（3）瓊脂糖電泳檢測，因LAMP 產(chǎn)物均為初始結(jié)構(gòu)的整數(shù)倍，擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖電泳后形成特異的梯狀條帶。

2 LAMP技術(shù)方法上的延伸

Nagamine[2]通 過 在F1c-F2c/B1c-B2c 之間創(chuàng)新性地設(shè)計(jì)一對環(huán)引物L(fēng)oop F/Loop B，大大縮短了LAMP反應(yīng)的時(shí)間，整個(gè)擴(kuò)增反應(yīng)在0.5h 即能完成。環(huán)引物通過結(jié)合在莖環(huán)結(jié)構(gòu)的環(huán)狀區(qū)域互補(bǔ)序列上，大大加速了整個(gè)鏈置換反應(yīng)過程，從而提高了反應(yīng)效率。Nagamine[3]建立了一種分離LAMP 反應(yīng)產(chǎn)物單鏈DNA 的方法使LAMP 技術(shù)能夠應(yīng)用于微陣列分析，并證明通過在內(nèi)引物上設(shè)計(jì)TspRI 限制性酶切位點(diǎn)可以使這種方法得到推廣。Maruyama[4]建立了insitu LAMP 檢測方法對攜帶stx2 基因的細(xì)菌進(jìn)行了原位檢測，由于其溫和的穿透條件及較低的溫度要求，相比原位PCR，其對細(xì)胞的傷害要小得多，對細(xì)胞結(jié)構(gòu)的破壞較小。Fukuta 建立了RT-LAMP 方法并成功將其用于番茄斑萎病毒的檢測，使LAMP 技術(shù)的應(yīng)用拓展到RNA 病毒檢測。Hong 等建立了SARS 的一步法單管RT-LAMP 檢測方法，大大簡化了LAMP 技術(shù)用于RNA 病毒檢測的操作步驟。Aoi 建立了胺氧化細(xì)菌的Real-time quantitative LAMP 檢測方法，使LAMP 技術(shù)能夠應(yīng)用于核酸的定量測定。

3 LAMP技術(shù)在豬傳染病檢測上的應(yīng)用

LAMP 和RT-LAMP 技 術(shù) 以 其 特異性強(qiáng)、靈敏度高、速度快和操作簡單等特點(diǎn)而倍受人們青睞。在豬病方面主要用于細(xì)菌疫病、病毒疫病和某些寄生蟲的DNA 或RNA 的檢測，已在豬傳染病的檢測中起到了一定的作用，現(xiàn)分述如下：

3.1 LAMP 技術(shù)用于細(xì)菌的檢測

3.1.1 用于大腸桿菌的檢測

大 腸 桿 菌（Escherichia coli，E.coli）可以引起仔豬白痢、仔豬黃痢和豬水腫病。傳統(tǒng)細(xì)菌分離費(fèi)時(shí)費(fèi)力并且一些快速檢測方法容易與其他型大腸桿菌混淆產(chǎn)生假陽性。Maruyama等2003 年首次采用LAMP 方法快速檢 測E.Coli Ol57:H7O27( 有 一 個(gè)stxl 基因和兩個(gè)stx2 基因)的stx2 基因，并用FITC 標(biāo)記抗E.Coli O157:H7 抗體，在紫外下照射。試驗(yàn)結(jié)果顯示，較原位PCR 而言，溫和的滲透性及低等溫條件使得原位LAMP 引起較少的細(xì)胞損傷，并且在DNA 擴(kuò)增中允許使用熒光抗體標(biāo)記。Yano 等用LAMP 技術(shù)對腸毒素大腸桿菌的LTI 及STI 基因進(jìn)行研究，實(shí)驗(yàn)結(jié)果再次證明了LAMP 的特異性(非LTI 及STI 基因型的Ecoli及其他細(xì)菌均不擴(kuò)增)及高靈敏性和高效性，加入環(huán)引物后擴(kuò)增時(shí)間可以從60min 縮至35min。

3.1.2 用于沙門氏菌的檢測

《規(guī)劃》對河道背水側(cè)管理范圍內(nèi)的護(hù)堤地用材林進(jìn)行空白段新造林和疏林地、成熟林、過熟林地的更新改造，選擇速生、材質(zhì)好、耐粗放管理和耐病蟲害的鄉(xiāng)土樹種。新造林采用生長較快的楊樹、泡桐等樹種；更新改造采用櫸樹、楸樹造林；采取株行距4 m×5 m的塊狀混交方式。在河道背水側(cè)護(hù)堤地栽植用材林，不僅可以有效增加林木原料儲(chǔ)備，為防汛提供搶險(xiǎn)木材，而且可以形成以堤防為軸線的防風(fēng)林帶，與臨水側(cè)的防浪林互配互襯，成為林水結(jié)合的綠色長廊。

沙門氏菌病是由沙門氏菌（Salmonella）引起的一種人、畜共患的傳染病。豬霍亂沙門氏菌是引起仔豬副傷寒的主要病原菌，給養(yǎng)豬業(yè)造成重大危害。Hara-Kudoa 等對沙門氏菌的39 個(gè)血清型220 個(gè)菌株進(jìn)行了LAMP檢測，靈敏度達(dá)到2.2 CFU/管，明顯高于常規(guī)PCR。朱勝梅[5]等以沙門氏菌為研究對象，根據(jù)其特異性的invA基因，設(shè)計(jì)了一套特異性引物對該基因進(jìn)行了LAMP，同時(shí)優(yōu)化了其反應(yīng)條件，在此條件下，LAMP 檢測沙門菌DNA的敏感度達(dá)10 fg/反應(yīng)，且與其他常見的細(xì)菌無交叉反應(yīng)。

3.1.3 用于副豬嗜血桿菌的檢測

副豬嗜血桿菌(Haemophilus parasuis，H P)為革蘭氏陰性短小桿菌，形態(tài)多變，該菌生長需要煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD 或V 因子)，一般條件下難以分離和培養(yǎng)。朱杰儀[6]等根據(jù)GenBank 上發(fā)表的不同血清型Hps 的16S rRNA 序列，找出其高度保守區(qū)域，再針對該區(qū)域設(shè)計(jì)了4 條特異性引物，建立了Hps 環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增法。試驗(yàn)結(jié)果表明，LAMP 方法在恒溫(63℃)條件下特異性強(qiáng)，比PCR 方法敏感100 倍。鑒于目前副豬嗜血桿菌分離培養(yǎng)和鑒定的復(fù)雜性，LAMP 方法操作簡單、成本低，整個(gè)擴(kuò)增反應(yīng)在1h 內(nèi)即可完成，為檢測Hps 提供了一個(gè)快速簡便的分子生物學(xué)方法。

3.1.4 用于豬胸膜肺炎放線桿菌的檢測

豬傳染性胸膜肺炎又稱為豬胸膜肺炎放線桿菌病，是由胸膜肺炎放線桿菌(Actinobacillus P1europneumoniae，APP)所引起的一種危害豬呼吸道的疾病，以胸膜炎和肺炎癥狀及病變?yōu)樘卣?。李佳禾等[7]以I 型豬胸膜肺炎放線桿菌ApxIV 基因片段為靶序列設(shè)計(jì)了一組引物，建立了敏感、特異的豬胸膜肺炎放線桿菌環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增檢測方法。在63 ℃等溫條件下反應(yīng)45 min，最低可檢測到102個(gè)拷貝的目的基因，敏感性是PCR 方法的10 倍。通過對8 頭豬胸膜肺炎放線桿菌實(shí)驗(yàn)感染豬和127 份臨床發(fā)病豬的鼻拭子進(jìn)行檢測，發(fā)現(xiàn)該方法對鼻拭子中豬胸膜肺炎放線桿菌的檢出率為100%，明顯優(yōu)于PCR 方法。

3.2 LAMP 技術(shù)用于豬病毒的檢測

3.2.1 用于日本腦炎病毒的檢測

流行性乙型腦炎簡稱乙腦，是由黃病毒科(Flaviridae)黃病毒屬乙型腦炎病毒(Japanese encephalitis virus，JEV)引起的一種嚴(yán)重威脅人畜健康的急性中樞神經(jīng)系統(tǒng)傳染病，是重要的人畜共患病及蟲媒病毒病。Toriniwa 等[8]利用LAMP 原理建立了一個(gè)快速且能定 量 的Real-time RT-LAMP 方 法，通過擴(kuò)增JEV 的包膜(E)蛋白基因來定量檢測JEV，將檢測時(shí)間縮短至1h，檢測下限為1PFU，其敏感性與常規(guī)RT-PCR 相似；同時(shí)作者利用所建立的RT-LAMP 法對與JEV 同家族的森林腦炎病毒和相關(guān)病毒(登革熱病毒和西尼羅河病毒)進(jìn)行了擴(kuò)增，均未檢測出，結(jié)果顯示了所建立的RT-LAMP法對JEV 檢測的高度特異性；另外，作者把通過RT-LAMP 檢測出的病毒數(shù)量與用常規(guī)病毒定量方法檢測出的數(shù)量比較顯示兩個(gè)結(jié)果高度相符，作者認(rèn)為RT-LAMP 是一種快速的定量檢測JEV 的方法。由于其不需特殊的儀器設(shè)備，有利于其在經(jīng)濟(jì)不發(fā)達(dá)地區(qū)的運(yùn)用。

3.2.2 用于口蹄疫病毒的檢測

口蹄疫(Foot and Mouth Disease，F(xiàn)MD)是偶蹄動(dòng)物的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病。口蹄疫病毒屬于小RNA 病毒科，口蹄疫病毒屬，該病毒有7 個(gè)血清型，各型之間無交叉保護(hù)反應(yīng)。吳紹強(qiáng)等[9]以滅活的亞洲Ⅰ型口蹄疫細(xì)胞培養(yǎng)病毒為材料，通過在病毒基因組的3D 區(qū)域設(shè)計(jì)3 對引物，建立口蹄疫病毒的RT-LAMP 檢測方法，對反應(yīng)體系中的成分以及反應(yīng)條件（反應(yīng)溫度）分別進(jìn)行優(yōu)化，并進(jìn)行敏感性和特異性確定。建立了亞洲Ⅰ型口蹄疫病毒的RT-LAMP 檢測方法，為口蹄疫的現(xiàn)場快速檢測提供了一種更加簡便快速的方法，可以滿足現(xiàn)場檢疫的需要。

3.2.3 用于豬繁殖與呼吸綜合征病毒的檢測

豬繁殖與呼吸綜合征病毒(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus，PRRSV) 屬 于 單 股正鏈RNA 病毒，該病毒可引起的一種豬急性高致死性傳染病。趙彥宗等[10]根據(jù)GenBank 中登錄的PRRSV M 基因保守序列6 個(gè)特異性部位設(shè)計(jì)了2 對引物，建立了PRRSV 的環(huán)介導(dǎo)逆轉(zhuǎn)錄等溫檢測方法。結(jié)果表明，該方法靈敏度比RT-PCR 高100 倍；全部反應(yīng)可在1h 內(nèi)完成并可得到其特有的階梯狀條帶，而且豬圓環(huán)病毒、豬瘟病毒、豬偽狂犬病毒的擴(kuò)增結(jié)果均為陰性；在反應(yīng)體系中添加SYBR GREEN Ⅰ染料后，可通過肉眼觀察有無熒光而直接判定結(jié)果。該方法靈敏度高、特異性好，可作為豬繁殖與呼吸綜合征病毒的快速診斷方法。

3.2.4 用于豬瘟病毒的檢測

豬瘟是由豬瘟病毒(Classical Swine Fever Virus，CSFV)引起豬的高度傳染性致死性病毒性疫病。劉中勇等[11]設(shè)計(jì)了4 條針對豬瘟病毒6 個(gè)位點(diǎn)的特異性引物，建立了一種靈敏、特異、快速的豬瘟病毒體外等溫?cái)U(kuò)增(RT-LAMP)檢測方法，所建立的方法能夠特異地檢測出豬瘟病毒的存在，檢測PRV、PRRSV、PCV2 等病毒均為陰性；靈敏度高，所建立的CSFVRT-LAMP 方 法 靈 敏 度 為10-5， 總RNA 的檢測閾值約為1pg；反應(yīng)快速，整個(gè)擴(kuò)增反應(yīng)可在1h 內(nèi)完成；操作簡單，不需要PCR 儀等復(fù)雜的儀器，結(jié)果可經(jīng)肉眼觀察及電泳檢測。本試驗(yàn)為豬瘟的現(xiàn)場快速檢測提供更加簡便、快速的方法，可以滿足基層檢疫的需要。

3.2.5 用于非洲豬瘟病毒的檢測

非洲豬瘟(ASF)是由非洲豬瘟病毒(ASFV)引起的豬的急性、接觸性傳染病，主要特征是高熱、皮膚發(fā)紺以及淋巴結(jié)和內(nèi)臟器官的嚴(yán)重出血，死亡率可高達(dá)100%。江彥增等[12]利用環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)(LAMP)建立了一種快速高效檢測非洲豬瘟病毒的方法。整個(gè)反應(yīng)在水浴鍋中恒溫進(jìn)行，不需要其他昂貴儀器，30 min 即可得到陽性結(jié)果，靈敏度是OIE 標(biāo)準(zhǔn)PCR 方法的100 倍，并且與其他常見豬DNA 病毒無交叉反應(yīng)。該方法非常適合在野外現(xiàn)場或缺乏試驗(yàn)條件的邊遠(yuǎn)地區(qū)檢測非洲豬瘟病毒。

3.2.6 用于豬細(xì)小病毒的檢測

豬細(xì)小病毒(Porcine Parvovirus，PPV)屬細(xì)小病毒科細(xì)小病毒屬，為無囊膜的單股線狀DNA 病毒，是引起母豬繁殖障礙的主要病原體之一。劉業(yè)兵等[13]根據(jù)GenBank 公布的PPV序列，在其保守序列區(qū)域設(shè)計(jì)了多套LAMP 引物，利用LAMP Real Time Turbidimeter LA-320 儀監(jiān)測反應(yīng)進(jìn)程并篩選最佳引物、反應(yīng)條件，建立了對PPV 病毒DNA 進(jìn)行特異擴(kuò)增的LAMP 檢測方法，并可通過加入SYBR Green I 肉眼判斷結(jié)果。該方法在63℃恒溫下作用45min，PPV 病毒DNA 獲得了高效率的特異性擴(kuò)增；其檢出限量為0.23 TCID50，敏感性高；在反應(yīng)結(jié)束后加入SYBR Green I 肉眼判斷結(jié)果，與Real Time Turbidimeter LA-320 儀監(jiān)測結(jié)果一致。通過對20份臨床樣品的LAMP 檢測與免疫熒光鑒定、PCR 方法比對，符合率均為20/20。從而建立了一種快速、敏感、特異的檢測豬細(xì)小病毒（PPV）環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增（LAMP）方法，為診斷豬細(xì)小病毒提供準(zhǔn)確可靠工具。

3.2.7 用于豬圓環(huán)病毒2 型的檢測

豬圓環(huán)病毒(Porcine circovirus，PCV)為圓環(huán)病毒科圓環(huán)病毒屬成員，是已知最小的動(dòng)物病毒之一。根據(jù)抗原性及基因組組成，PCV分成兩個(gè)血清型，即PCV1 和PCV2，而PCV1 無 致 病性。楊得勝[14]以豬圓環(huán)病毒2 型為材料，設(shè)計(jì)了3 對引物，構(gòu)建了豬圓環(huán)病毒2型環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增（LAMP）檢測方法，并進(jìn)行敏感性和特異性確定。建立的豬圓環(huán)病毒2 型的LAMP 檢測方法，可以采用瓊脂糖凝膠電泳、顏色變化、生成的沉淀等現(xiàn)象判定反應(yīng)結(jié)果，為豬圓環(huán)病毒2 型的現(xiàn)場快速檢測提供了一種更加簡便快速的方法，可以滿足現(xiàn)場檢疫的需要。

3.3 LAMP 技術(shù)用于豬寄生蟲的檢測

LAMP 技術(shù)用于豬寄生蟲方面，目前主要用于豬附紅細(xì)胞體的檢測。豬附紅細(xì)胞體病是由豬附紅細(xì)胞體寄生于豬紅細(xì)胞表面或游離在血漿中引起的一種以貧血、黃疸、發(fā)熱等為主要臨床特征的人畜共患?。ㄘi附紅細(xì)胞體屬寄生蟲，也有人認(rèn)為是立克次氏體目，目前尚未形成共識）。李月梅等[15]利用LAMP技術(shù)成功檢測到豬附紅細(xì)胞體基因區(qū)，并用10 倍系列稀釋的DNA 樣品對該檢測方法的靈敏度進(jìn)行了測試，此方法的靈敏度可達(dá)到5×105倍稀釋的DNA 分子水平，并且特異性強(qiáng)，對新孢子蟲、弓形蟲、瑟氏泰勒蟲病原體檢測均為陰性。

當(dāng)前，LAMP 技術(shù)已經(jīng)得到了廣泛的應(yīng)用，并且已開發(fā)出用于LAMP引物設(shè)計(jì)的相關(guān)軟件， 如Primer Explorer version 3 軟件，使引物設(shè)計(jì)更加簡便。但LAMP 技術(shù)本身仍存在一些未闡明的問題，例如Nagamine[16]曾報(bào)道DNA 模板在不預(yù)變性的條件下也能發(fā)生LAMP 擴(kuò)增，但其機(jī)制尚不清楚，如果這種現(xiàn)象的原因得以闡明，將進(jìn)一步簡化LAMP 技術(shù)的操作程序。綜上所述，LAMP 技術(shù)是一種便捷、特異而又靈敏的快速基因檢測技術(shù)，與PCR 和Real-time PCR 相比不需要特殊的儀器設(shè)備，如果對其進(jìn)一步優(yōu)化、完善，該技術(shù)必將在食品安全、疾病診斷及基因芯片等領(lǐng)域發(fā)揮重要的作用。

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