李 挺，宋 斌，林 敏，沈亞恒

(廣東省微生物研究所，廣東省菌種保藏與應(yīng)用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東省微生物應(yīng)用新技術(shù)公共實(shí)驗(yàn)室，廣東省華南應(yīng)用微生物重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室－省部共建國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地，廣東 廣州 510070)

真姬菇（Hypsizygus marmoreus）又名蟹味菇、海鮮菇、斑玉蕈、假松茸等，其肉厚質(zhì)嫩、味純鮮香，且具有較高的食用保健價(jià)值，獲得了越來(lái)越多消費(fèi)者的青睞，市場(chǎng)前景廣闊，工廠化生產(chǎn)規(guī)模不斷擴(kuò)大[1，2]。至2008年止，中國(guó)的真姬菇年產(chǎn)量已達(dá)到10585 t，在食用菌工廠化生產(chǎn)品種中，其產(chǎn)量?jī)H次于金針菇和杏鮑菇[3]，按生物學(xué)效率為60%計(jì)算，中國(guó)的真姬菇產(chǎn)業(yè)每年至少產(chǎn)生約6351 t的真姬菇菌糠。真姬菇培養(yǎng)基料主要是由木屑、棉籽殼、玉米芯等物質(zhì)組成，經(jīng)過(guò)真姬菇工廠化栽培后，它們當(dāng)中仍含有較多的纖維素、半纖維素、木質(zhì)素、菌絲殘?bào)w蛋白、脂肪、氨基酸、礦物質(zhì)以及一些次生代謝產(chǎn)物[3，4]，具有作為食用菌栽培新原料再利用的潛力[4－6]。但由于食用菌菌糠中可能存在著化感物質(zhì)（主要是一些次生代謝產(chǎn)物），導(dǎo)致食用菌之間存在的化感作用（Allelopathy），從而促進(jìn)或抑制食用菌菌絲體或子實(shí)體的生長(zhǎng)發(fā)育[7]。因此，本文研究了真姬菇菌糠的水提液和醇提液對(duì)金針菇（Flammulina velutipes）、靈芝 （Ganoderma lucidum）、真姬菇 （H.marmoreus）、花臉香蘑 （Lepista sordida）和糙皮側(cè)耳 （Pleurotus ostreatus）等5種食用菌菌絲體生長(zhǎng)的化感作用，為循環(huán)再利用真姬菇菌糠栽培食用菌研究提供科學(xué)參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 菌株

供試食用菌品種有金針菇（F.velutipes），菌株編號(hào)GDGM29087；靈芝（G.lucidum），菌株編號(hào)GDGM29083；真姬菇（H.marmoreus），菌株編號(hào)ACCC51583；花臉香蘑(L.sordida)，菌株編號(hào)GDGM5.315；糙皮側(cè)耳（P.ostreatus），菌株編號(hào)GDGM29079。均由廣東省微生物研究所提供。

1.1.2 菌糠

真姬菇菌糠均由廣東菇木真生物科技股份有限公司提供。真姬菇培養(yǎng)基料為雜木屑30%、棉籽殼20%、玉米芯20%、小麥8%、豆秸5%、米糠12%、石灰0.5%、石膏0.5%、大豆皮4%。

1.1.3 儀器設(shè)備

AIR TECH超凈工作臺(tái)、LRHO2500G生化培養(yǎng)箱、粉碎機(jī)、研缽、分析篩、分析天平、電熱恒溫水浴鍋、恒溫烘箱、凱氏蒸餾裝置、高溫爐、消煮器、過(guò)濾裝置等。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 菌糠水提液的制備

[8]中的方法選取干燥、無(wú)霉變的真姬菇菌糠試樣，粉碎至40目，用四分法將試樣縮減至200 g，加水1000 mL，煮沸20 min，用6層紗布過(guò)濾，補(bǔ)充水至1000 mL。

1.2.2 菌糠醇提液的制備

按參考文獻(xiàn) [8]中的方法選取干燥、無(wú)霉變的真姬菇菌糠試樣，粉碎至40目，用四分法將試樣縮減至200 g，加無(wú)水乙醇1000 mL，浸泡過(guò)夜，將上清液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，回收乙醇再浸泡菌糠過(guò)夜，重復(fù)2次，得到真姬菇菌糠醇提膏狀物，加水1000 mL，制成渾濁液。

1.2.3 平板培養(yǎng)基的制備

取馬鈴薯200 g洗凈去皮，切成小塊，分別按體積比0（對(duì)照）、20%、40%、60%、80%、100%的比例加入真姬菇菌糠水提液、醇提液，煮沸30 min，用紗布過(guò)濾，濾液加入瓊脂20 g，煮沸溶解后加葡萄糖20 g，或用水補(bǔ)至1000 mL，得到12種不同的平板培養(yǎng)基，分裝于500 mL三角瓶里，115℃滅菌20 min，冷卻至常溫備用。

1.2.4 培養(yǎng)

在超凈工作臺(tái)上將滅菌后的培養(yǎng)基倒入口徑為9.0 cm的無(wú)菌培養(yǎng)皿中，每皿約8 mL～9 mL，搖勻并冷卻制成平板。取在PDA試管培養(yǎng)基上培養(yǎng)好的5種食用菌菌絲體，分別轉(zhuǎn)接到平板培養(yǎng)基上，倒置于培養(yǎng)箱中，25℃暗照培養(yǎng)36 h，待菌絲萌發(fā)后，每隔24 h觀測(cè)菌絲生長(zhǎng)狀態(tài)，并用十字交叉法測(cè)定菌落直徑，取平均值。每個(gè)處理設(shè)3次重復(fù)。

1.3 數(shù)據(jù)處理

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行處理，各組間數(shù)據(jù)比較采用單因素方差分析，顯著性水平為0.05。化感效應(yīng)指數(shù)（RI）公式為：

RI=T/C－1

式中：C為對(duì)照值（CK）；T為處理值。

當(dāng)RI＞0為促進(jìn)作用，RI＜0為抑制作用，絕對(duì)值大小表示化感作用強(qiáng)度[9，10]。

2 結(jié)果與分析

真姬菇菌糠水提液和醇提液對(duì)5種食用菌菌絲生長(zhǎng)的影響見(jiàn)表1。

表1 真姬菇菌糠水提液和醇提液對(duì)5種食用菌菌絲生長(zhǎng)的影響

2.1 真姬菇菌糠水提液和醇提液對(duì)金針菇菌絲生長(zhǎng)的影響

真姬菇菌糠提取液對(duì)金針菇菌絲生長(zhǎng)的影響，結(jié)果見(jiàn)表1、圖1。

實(shí)驗(yàn)表明，真姬菇菌糠水提液對(duì)金針菇菌絲的生長(zhǎng)始終表現(xiàn)出抑制作用，以100%濃度時(shí)表現(xiàn)最強(qiáng)；而濃度20%～60%的菌糠醇提液對(duì)金針菇菌絲的生長(zhǎng)具有一定的促進(jìn)作用，當(dāng)菌糠醇提液濃度大于60%時(shí)則表現(xiàn)為抑制菌絲的生長(zhǎng)，且在100%時(shí)也達(dá)到最強(qiáng)。

2.2 真姬菇菌糠水提液和醇提液對(duì)靈芝菌絲生長(zhǎng)的影響

真姬菇菌糠提取液對(duì)靈芝菌絲生長(zhǎng)的影響，結(jié)果見(jiàn)表1、圖 2。

在低濃度時(shí)，真姬菇菌糠水提液和醇提液對(duì)靈芝菌絲生長(zhǎng)均有促進(jìn)作用，但當(dāng)濃度大于35%時(shí)，水提液和醇提液則表現(xiàn)出差異，隨著濃度不斷增大，水提液表現(xiàn)出對(duì)靈芝菌絲生長(zhǎng)的抑制作用，生長(zhǎng)速度低于對(duì)照組；而醇提液則表現(xiàn)出很強(qiáng)的促進(jìn)作用，在濃度超過(guò)60%時(shí)化感效應(yīng)指數(shù)達(dá)到最高為49%，在濃度超過(guò)95%時(shí)則低于對(duì)照組?？傮w看來(lái)，醇提液對(duì)靈芝菌絲的生長(zhǎng)促進(jìn)作用優(yōu)于水提液。

圖1 真姬菇菌糠提取液對(duì)金針菇菌絲生長(zhǎng)的影響

圖2 真姬菇菌糠提取液對(duì)靈芝菌絲生長(zhǎng)的影響

2.3 真姬菇菌糠水提液和醇提液對(duì)真姬菇菌絲生長(zhǎng)影響

菌糠提取液對(duì)真姬菇菌絲生長(zhǎng)影響結(jié)果見(jiàn)表1、圖3。

圖3 真姬菇菌糠提取液對(duì)真姬菇菌絲生長(zhǎng)的影響

實(shí)驗(yàn)表明，添加真姬菇菌糠水提液對(duì)真姬菇具有明顯的抑制作用，當(dāng)濃度40%時(shí)，化感效應(yīng)指數(shù)為－27%；當(dāng)濃度大于40%時(shí)，菌絲不生長(zhǎng)。真姬菇菌糠醇提液對(duì)真姬菇菌絲具有更強(qiáng)的抑制作用，當(dāng)濃度40%時(shí)，化感效應(yīng)指數(shù)為－46%；濃度大于40%時(shí)，菌絲同樣不生長(zhǎng)。

2.4 真姬菇菌糠水提液和醇提液對(duì)花臉香蘑菌絲生長(zhǎng)的影響

真姬菇菌糠提取液對(duì)花臉香蘑菌絲生長(zhǎng)的影響，結(jié)果見(jiàn)表1、圖4。

圖4 真姬菇菌糠提取液對(duì)花臉香蘑菌絲生長(zhǎng)的影響

添加真姬菇菌糠水提液和醇提液均對(duì)花臉香蘑具有明顯的抑制作用。當(dāng)水提液濃度為40%時(shí)，化感效應(yīng)指數(shù)為－32%；濃度大于40%時(shí)，菌絲不生長(zhǎng)。而醇提液濃度為40%時(shí)，化感效應(yīng)指數(shù)為達(dá)到－63%；濃度大于40%時(shí)，菌絲同樣不生長(zhǎng)。

2.5 真姬菇菌糠水提液和醇提液對(duì)糙皮側(cè)耳菌絲生長(zhǎng)的影響

不同濃度真姬菇菌糠提取液對(duì)糙皮側(cè)耳菌絲生長(zhǎng)的影響，結(jié)果見(jiàn)表1、圖5。

圖5 不同濃度真姬菇菌糠提取液對(duì)糙皮側(cè)耳菌絲生長(zhǎng)的影響

實(shí)驗(yàn)表明，濃度20%～80%的水提液對(duì)糙皮側(cè)耳菌絲生長(zhǎng)有明顯的促進(jìn)作用，以濃度為40%達(dá)到最高為30.5%；但濃度大于80%時(shí)菌絲生長(zhǎng)速度則下降，明顯低于對(duì)照組。濃度20%～60%的菌糠醇提液，對(duì)糙皮側(cè)耳菌絲的生長(zhǎng)有促進(jìn)作用，當(dāng)濃度大于60%時(shí)菌絲生長(zhǎng)速度則下降，明顯低于對(duì)照組。

3 結(jié)論

本研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)PDA培養(yǎng)基中加入濃度為20%和40%的水提液，有利于靈芝和糙皮側(cè)耳菌絲的生長(zhǎng)，而40%的醇提液對(duì)金針菇菌絲和糙皮側(cè)耳菌絲有明顯的促進(jìn)作用，60%的醇提液對(duì)靈芝菌絲也有明顯的促進(jìn)作用；但水提液和醇提液對(duì)真姬菇和花臉香蘑的菌絲生長(zhǎng)都產(chǎn)生強(qiáng)烈的抑制作用，說(shuō)明一定濃度的真姬菇菌糠水提或醇提液適合金針菇、靈芝和側(cè)耳的菌絲生長(zhǎng)，但不適合真姬菇和花臉香蘑菌絲的生長(zhǎng)。本研究為真姬菇菌糠的科學(xué)與合理利用提供了科學(xué)依據(jù)。

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