湯軼偉，勵建榮*，孟良玉，鐘克利，徐永霞

(渤海大學(xué)化學(xué)化工與食品安全學(xué)院，渤海大學(xué)食品研究院，遼寧省食品安全重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，遼寧 錦州 121013)

氯霉素(chloramphenicol，CAP)又叫左旋霉素，是一種用于治療傷寒、腦膜炎和尿路感染等疾病的酰胺醇類抗生素類藥物，其結(jié)構(gòu)式見圖1，該藥物能有效抑制炭疽桿菌、肺炎球菌、鏈球菌、李斯特菌、葡萄球菌以及衣原體、立克次氏體等病原微生物。由于CAP殺菌廣譜，我國自20世紀(jì)80年代開始用于水產(chǎn)品養(yǎng)殖病害防治過程中。毒理學(xué)研究表明，CAP對人體具有較大的毒副作用，主要表現(xiàn)為：抑制骨髓造血功能，引起再生障礙性貧血、細(xì)胞減少性貧血、血小板減少和粒狀白細(xì)胞減少[1]。另外，該藥物理化性質(zhì)極為穩(wěn)定，可通過食物鏈在人體內(nèi)蓄積，從而對人體健康造成嚴(yán)重?fù)p害。CAP對人類健康的危害已引起國際組織和多個國家或地區(qū)的高度重視，中國、美國、歐盟、韓國、日本等都已對該藥物在水產(chǎn)品中的殘留做出了禁用和不得檢出的規(guī)定。

為了保證人體健康和有效監(jiān)管水產(chǎn)品質(zhì)量安全，綜述和分析當(dāng)前水產(chǎn)品中CAP藥物殘留檢測方法具有重要意義。本文將從樣品前處理方法和水產(chǎn)品中CAP殘留檢測方法兩方面進(jìn)行詳細(xì)闡述，以期對保證水產(chǎn)品安全提供一定的技術(shù)保證。

圖 1 氯霉素結(jié)構(gòu)式Fig.1 Structure of chloramphenicol

1 樣品前處理方法

樣品前處理是指樣品的制備和對樣品中的待測目標(biāo)物進(jìn)行提取、凈化以及濃縮富集的過程，目的是消除基質(zhì)影響，提高檢測方法的靈敏度、準(zhǔn)確度和選擇性[2]。常用的樣品前處理方法有：液液萃取(liquid-liquid extraction，LLE)、索氏提取、柱層析技術(shù)、凝膠色譜、固相萃取(solid-phase extraction，SPE)和超臨界流體萃取(supercritical fluid extraction，SFE)等方法。液液萃取通常對極性較低的物質(zhì)具有較好的選擇性、凈化效果好、操作過程簡單，但對極性較高的化合物分配系數(shù)不能滿足要求。索氏提取是用溶劑長時間浸潤樣品將目標(biāo)物提取出來的方法，此法耗時、溶劑用量大、效率低。柱層析技術(shù)、凝膠色譜和SPE 3種方法類似，需要手工將填料裝入萃取管中，過程繁瑣，主要使用的填料有C18、硅膠、氧化鋁、硅酸鎂和弗羅里硅土等，對于CAP常利用C18凈化。超臨界流體萃取是一種新型高效提取方法，該方法在一定壓力和溫度條件下進(jìn)行，具有有機(jī)溶劑用量少，萃取劑(CO2)穩(wěn)定、無毒、不污染環(huán)境，分離和富集自動化能減少人為誤差等優(yōu)點(diǎn)。

1.1 樣品制備和提取

水產(chǎn)品中CAP檢測主要以魚類和蝦類為主，樣品采集后在0～5℃條件下送樣，―18℃以下冷凍保存，取魚、蝦的肌肉部分作為檢測部位[3]。根據(jù)CAP的理化性質(zhì)，水產(chǎn)品中CAP提取方法多采用乙酸乙酯[4-5]溶劑或乙酸乙酯-氨水混合溶劑[6]萃取。

1.2 凈化和濃縮富集

樣品提取過程中，與待測目標(biāo)物結(jié)構(gòu)或化學(xué)性質(zhì)相近的干擾物質(zhì)常常被一起提取出來，這些物質(zhì)可能對檢測儀器的穩(wěn)定性和檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性產(chǎn)生影響。所以，需要根據(jù)檢測方法的要求對提取液進(jìn)行凈化處理。

水產(chǎn)品肌肉組織中的脂類會隨CAP提取過程一起提取出來，故要對提取液進(jìn)行脫脂凈化。目前，主要凈化和濃縮富集的方法步驟為：將原始提取液蒸干，然后用甲醇[7]或水-乙腈[8]溶解提取物，再用正己烷脫脂，最后經(jīng)C18柱凈化富集后經(jīng)檢測方法進(jìn)行定性或定量檢測。Liu Wenlin等[9]優(yōu)化了SFE方法對蝦中CAP的提取，該方法以乙酸乙酯為夾帶劑，CO2為萃取劑，15min完成提取過程，為其他水產(chǎn)品中CAP殘留的快速提取奠定了基礎(chǔ)。液-液萃取和傳統(tǒng)的固相萃取是利用待測物的物理化學(xué)性質(zhì)達(dá)到分離、凈化、富集的目的，方法操作簡單但沒有特異性。所以對一些較為復(fù)雜的樣品，傳統(tǒng)的分離方法很難將干擾物質(zhì)有效分離。以分子印跡聚合物為填料的固相萃取柱能特異吸附目標(biāo)物，可最大程度凈化待測物，提高檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。梁冰[10]、唐仕榮[11]等分別采用沉淀聚合和本體聚合方法制備了CAP分子印跡聚合物，為發(fā)展新型水產(chǎn)品CAP殘留檢測方法的樣品前處理奠定了基礎(chǔ)。

2 檢測方法

食品中CAP檢測方法主要包括：微生物法、免疫分析法、色譜分析法、電化學(xué)分析法、生物芯片檢測技術(shù)[12]等。近年來，隨著水產(chǎn)品在食品中所占比例的日趨增加和人們對水產(chǎn)品質(zhì)量安全的高度重視，水產(chǎn)品中CAP殘留檢測分析方法的研究取得了較快發(fā)展。

2.1 發(fā)光細(xì)菌法

發(fā)光細(xì)菌與外來毒物接觸后會對發(fā)光細(xì)菌細(xì)胞代謝產(chǎn)生影響，進(jìn)而影響細(xì)菌的發(fā)光強(qiáng)度。發(fā)光細(xì)菌法就是利用發(fā)光細(xì)菌的發(fā)光強(qiáng)度或抑菌圈的大小與毒物濃度之間的關(guān)系來定量或定性分析樣品中毒物濃度的新型檢測方法，該方法操作方便、靈敏度高、檢測快速。

Shakila等[4]利用Photobacterium leiognathi L-2發(fā)光細(xì)菌建立了平板法檢測蝦肌肉組織中CAP殘留的新方法。結(jié)果顯示在最優(yōu)條件下，CAP含量為100μg/kg時，抑菌圈直徑為23.0mm，含量為1μg/kg時，抑菌圈直徑為9.3mm；蝦肌肉組織中的CAP添加含量為1～100μg/kg時，回收率可達(dá)95.63%。該方法通過觀察抑菌圈的大小來判斷蝦肌肉組織中的CAP殘留狀況，測定結(jié)果直觀，適合基層檢測和初步篩選。但是該方法不能對CAP殘留進(jìn)行精確定量，檢測結(jié)果也易受其他抗生素類藥物的影響。為了實(shí)現(xiàn)利用發(fā)光細(xì)菌精確定量水產(chǎn)品中CAP殘留的目的，文獻(xiàn)[13-14]從青島近海分離出對CAP敏感的鰒發(fā)光桿菌Photobacterium leiognathi YL，通過控制菌體起始發(fā)光強(qiáng)度、菌液與氯霉素作用時間，建立了發(fā)光細(xì)菌檢測水產(chǎn)品中CAP體系。結(jié)果顯示，檢測的最佳條件為菌體起始發(fā)光強(qiáng)度在(2.0～4.0)×105cd、菌液與氯霉素的最佳作用時間為30min，該條件下所建立方法的線性范圍為0.1～1.0ng/mL，在魚肉的CAP加標(biāo)回收(0.1～1.0ng/g)實(shí)驗(yàn)中，回收率在40.34%～114.26%。該方法能定量分析魚肉中CAP殘留，且檢出限將至0.1ng/mL，大大促進(jìn)了微生物檢測CAP殘留方法的發(fā)展。

2.2 色譜和色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)

隨著接口技術(shù)的成熟，色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)逐漸應(yīng)用于水產(chǎn)品CAP藥物殘留分析中。該技術(shù)既保留了色譜的高分離能力、高分析速度、高靈敏度，又結(jié)合了質(zhì)譜對化合物的強(qiáng)結(jié)構(gòu)鑒定能力，提高了檢測的選擇性和靈敏度。然而因色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀價格昂貴而限制了該方法在一般實(shí)驗(yàn)室的普及應(yīng)用。

我國國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 22338—2008《動物源性食品中氯霉素類藥物殘留量測定》[15]規(guī)定了水產(chǎn)品中氯霉素類(CAP、氟甲砜霉素和甲砜霉素)殘留的氣相色譜-質(zhì)譜(GC-MS)和液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜(HPLC-MS/MS)的測定方法。GC-MS法的樣品用乙酸乙酯提取，4%氯化鈉溶液和正己烷液-液分配凈化，經(jīng)Florisil柱凈化后，以甲苯為反應(yīng)介質(zhì)，用N,O雙(三甲基硅基)三氟乙酰胺-三甲基氯硅烷于70℃烷基化，用氣相色譜/負(fù)化學(xué)電離源質(zhì)譜測定，內(nèi)標(biāo)工作曲線法定量，對CAP的檢出限為0.1μg/kg；HPLCMS/MS法的樣品用飽和乙腈正己烷提取，提取液用LC-Si固相萃取柱進(jìn)行凈化，CAP采用內(nèi)標(biāo)法定量分析，對CAP的檢出限為0.1μg/kg。另外，我國國家標(biāo)準(zhǔn)BG/T 20756—2006《可食動物肌肉、肝臟和水產(chǎn)品中氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考?xì)埩袅康臏y定》、GB/T 22959—2008《河豚魚、鰻魚和烤鰻中氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考?xì)埩袅康臏y定》、農(nóng)業(yè)部781號公告-2—2006《動物源食品中氯霉素殘留量的測定》，出入境檢驗(yàn)檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)SN/T 1864—2007《進(jìn)出口動物源食品中氯霉素殘留量的檢測方法》也對水產(chǎn)品中CAP殘留的HPLC-MS檢測方法做了相關(guān)規(guī)定。

為了節(jié)省檢測時間，將樣品凈化處理同檢測儀器聯(lián)用是目前研究的熱點(diǎn)。Lu Yanbin等[16]建立了海龜中氯霉素藥物殘留的基質(zhì)固相分散-高效液相色譜-質(zhì)譜(MSPDHPLC-MS/MS)聯(lián)用快速檢測方法。該方法中的樣品凈化裝置(核殼型C18硅膠柱)與檢測儀器聯(lián)用，在多反應(yīng)檢測(MRM)定量模式條件下對CAP進(jìn)行檢測。最優(yōu)條件下該方法的線性范圍0.01～100ng/mL，日內(nèi)和日間的變異系數(shù)(RSD)分別為2.05%～8.33%和3.05%～10.17%，4個水平(1、5、7.5、10ng/g)樣品的添加回收率在92.05%～98.07%之間(RSD≤4.20%)。該檢測方法在線富集和凈化CAP，回收率高、重現(xiàn)性好，并提高了檢測效率，為縮短儀器檢測方法中樣品處理時間奠定了基礎(chǔ)。

與GC-MS聯(lián)用方法相比，HPLC-MS方法無需對CAP進(jìn)行衍生化，可以縮短總檢測時間。李資玲等[8]建立了快速測定魚肉中CAP殘留的HPLC-MS測定方法。樣品中的CAP殘留用乙酸乙酯提取濃縮，正己烷脫脂凈化后，用反相液相色譜分離，采用外標(biāo)法使用HPLC-MS方法定量分析。最優(yōu)條件下方法的線性范圍為0.04～1.0μg/kg (R2=0.9999)，3個添加水平范圍(0.10、0.20、0.40μg/kg)內(nèi)的回收率為91.0%～100.1%(RSD：2.6%～4.1%)，檢測限為0.01μg/kg，定量限為0.02μg/kg。

超高效液相色譜具有更快的分析速度、更高的分辨率和靈敏度。張小軍等[5]建立了水產(chǎn)品中CAP殘留的超高效液相色譜-串聯(lián)四極桿質(zhì)譜(UHPLC-MS)法測定方法。樣品中CAP用乙酸乙酯提取，正己烷脫脂或固相萃取柱凈化后，采用同位素內(nèi)標(biāo)法UHPLC-MS定量分析。方法在0.05～1.0μg/kg的添加范圍內(nèi)平均回收率為84.9%～103.3%(RSD為3.2%～5.2%)，定量檢測限為0.02μg/kg。該方法適用于各種水產(chǎn)品基質(zhì)的氯霉素殘留檢測。為了滿足超痕量CAP殘留檢測的需要，藯慧等[17]研究了蝦中CAP殘留的UHPLC-MS/MS檢測方法。提取樣品中CAP藥物的乙酸乙酯蒸干后用蒸餾水溶解殘渣，Oasis HLB柱凈化，洗脫液氮?dú)獯蹈珊笥昧鲃酉喽ㄈ莺?，采用UHPLC-MS/MS測定。結(jié)果顯示該方法對蝦肉中CAP殘留的最低檢測限為0.1ng/L，是目前水產(chǎn)品中CAP殘留檢測限最低的檢測方法。

我國水產(chǎn)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)SC/T 3018—2004《水產(chǎn)品中氯霉素殘留量的測定》[18]規(guī)定了水產(chǎn)品中CAP殘留的GC測定方法。標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定樣品經(jīng)乙酸乙酯提取并濃縮，提取物溶于水，用正己烷脫脂，C18固相萃取柱凈化，硅烷化試劑衍生化后，用配有電子捕獲檢測器的氣相色譜儀測定，外標(biāo)法定量，方法的檢測限為0.3μg/kg。我國農(nóng)業(yè)部958號公告-13—2007《水產(chǎn)品中氯霉素、甲砜霉素、氟甲砜霉素殘留量的測定 氣相色譜法》也規(guī)定了水產(chǎn)品中CAP殘留的GC檢測方法。氣相色譜法-電子捕獲檢測器(GCECD)檢測方法是CAP測定的經(jīng)典方法。王鋒等[7]在建立蝦中CAP殘留的GC-ECD檢測方法中，通過改進(jìn)蝦樣品的前處理方法(增加提取時間和超聲波輔助手段)來提高方法的檢測結(jié)果，表明方法的檢測限可達(dá)0.1μg/kg，定量限達(dá)到0.5μg/kg，在一定程度上改善了檢測結(jié)果。我國農(nóng)業(yè)部958號公告-14—2007《水產(chǎn)品中氯霉素、甲砜霉素、氟甲砜霉素殘留量》[19]規(guī)定了水產(chǎn)品中CAP等3種氯霉素類藥物殘留的GC-MS檢測方法。標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定試樣中殘留的CAP以乙酸乙酯超聲波提取，正己烷液-液萃取去脂，固相萃取柱凈化，硅烷化衍生后用GC-MS測定，方法的檢出限為0.3μg/kg。為了改善GC-MS檢測方法、縮短檢測時間，Liu Wenlin等[9]建立了蝦中CAP、氟苯尼考和甲砜霉素3種氯霉素類藥物殘留的SFE原位衍生(NCI)GC-MS檢測方法。該方法以SFE為樣品提取方法，結(jié)果顯示SFE提取方法的線性范圍為20～5000pg/g，檢測限為8.7～17.4pg/g(RSD≤15.3%)。SFE提取方法縮短了蝦中CAP提取和衍生時間，是一種快速、自動化程度高的檢測方法。

2.3 免疫分析法

酶聯(lián)免疫吸附分析方法具有簡單、快速、靈敏和花費(fèi)低等特點(diǎn)，包括板式檢測、試紙條檢測和儀器免疫法等，常被用于水產(chǎn)品中CAP藥物的快速檢測方法的建立。

我國農(nóng)業(yè)部1025號公告-26—2008《動物源食品中氯霉素殘留檢測酶聯(lián)免疫吸附法》[20]規(guī)定了使用酶聯(lián)免疫吸附測定魚和蝦中CAP殘留的篩選檢驗(yàn)方法。標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定魚、蝦中的CAP使用乙酸乙酯提取，再用正己烷除雜，然后進(jìn)行測定，方法的檢出限為50.0ng/kg。該標(biāo)準(zhǔn)從樣品提取到檢測結(jié)束最多需要3h，是一種靈敏度高并且快速的篩選方法。

譚慧等[21]建立了水產(chǎn)品中CAP殘留的間接酶聯(lián)免疫檢測(ELISA)方法。結(jié)果顯示該方法的檢測限為0.01μg/kg，樣品在2個添加水平(0.5、2.0μg/kg)的回收率分別為72%～116%和86%～108%，該方法適用于水產(chǎn)品中CAP殘留的快速檢測。馬玲等[22]為了縮短檢測時間，在常規(guī)兩步式化學(xué)發(fā)光酶免疫法(CLEIA)基礎(chǔ)上，同時加入一抗和二抗，優(yōu)化了包被條件、競爭反應(yīng)時間的實(shí)驗(yàn)參數(shù)，建立了一步式CAP檢測方法；最優(yōu)條件下，該方法的最低檢測限為0.01μg/L，與常規(guī)兩步法相比，可縮短檢測時間1.5h，更符合快速檢測的要求。王瑋[23]利用膠體金標(biāo)記快速檢測技術(shù)對氯霉素藥物殘留快速檢測方法進(jìn)行了系統(tǒng)研究，建立了滲透式和層析式兩種金標(biāo)記免疫競爭快速篩選方法。該方法以CAP與固相膜上的包被原(CAP-OVA)競爭結(jié)合金標(biāo)記抗CAP多克隆抗體，通過膠體金顯色達(dá)到快速檢測樣品中CAP殘留的目的。結(jié)果顯示，滲透式試紙條檢出限為0.8μg/L、層析式試紙條的檢出限為1μg/L。在對魚和蝦樣品的實(shí)際測定中亦表現(xiàn)出良好特性，該方法能在10min內(nèi)顯示測定結(jié)構(gòu)，并可通過顏色的變化進(jìn)行半定量測定，是目前食品安全快速檢測常用的方法之一。張燦等[24]建立了CAP殘留的毛細(xì)管電泳免疫分析法。該方法對CAP檢測的線性范圍為0.008～5μg/L，最低檢測限為0.0016μg/L，實(shí)際樣品魚肉的檢測限為0.035μg/L。毛細(xì)管電泳免疫分析方法結(jié)合了免疫分析的特異性和毛細(xì)管電泳快速高效分離分析的優(yōu)勢，具有檢測結(jié)果直觀的優(yōu)點(diǎn)。

2.4 磁減量檢測法

磁減量檢測法(immunomagnetic reducation，IMR)是利用帶有生物探針的納米磁珠與待測物分子結(jié)合后，使磁珠聚集變大變重，再通過測定納米磁珠磁性大小的改變情況，進(jìn)而得出待測物分子濃度的新型檢測方法。與傳統(tǒng)的免疫分析法相比，該方法免洗、操作簡單、特異性好且只需要一種抗體[25-26]。

Yang等[6]首次建立了蝦中CAP殘留的免疫磁珠磁減量檢測方法。該方法以表面帶有CAP抗體的磁性納米粒子為探針(圖2)，樣品中的CAP與探針上的CAP抗體結(jié)合后改變納米磁珠的大小、質(zhì)量，從而影響納米磁珠的磁交流信號。結(jié)果表明該方法操作簡單，不易受基質(zhì)影響，檢測限可達(dá)0.1μg/L，其中的納米磁珠既能在樣品提取液中特異吸附目標(biāo)物，又是檢測信號的目標(biāo)物，是一種簡單、準(zhǔn)確、有效的新型檢測方法。

圖 2 CAP磁性納米粒子探針示意圖Fig.2 Schematic of magnetic nanoparticle with antibody against CAP

2.5 傳感器檢測法

傳感器檢測方法是檢測方法研究的熱點(diǎn)。按照檢測原理的不同，可以分為：熒光傳感器[27]、光化學(xué)傳感器[28]、化學(xué)傳感器[29]、電化學(xué)傳感器[30]、表面等離子共振傳感器[31]等。但是，傳感器檢測方法的低重現(xiàn)性問題依然有待解決。

張麗君等[32]結(jié)合分子印跡技術(shù)和傳感器技術(shù)建立了檢測CAP的分子印跡電化學(xué)傳感器方法。該方法以鄰苯基酚為功能單體，CAP為模板分子，通過電化學(xué)聚合方法在Pt電極上制備CAP分子印跡聚合物(MIP)膜，并以此為修飾電極優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件。結(jié)果表明在最優(yōu)條件下，該方法對CAP檢測的線性范圍為4.33×10－8～3.09×10－6mol/L，檢出限為2.5×10－8mol/L。該研究為水產(chǎn)品中CAP殘留的電化學(xué)檢測方法的建立奠定了基礎(chǔ)。分子印跡電化學(xué)傳感器具有操作簡便、靈敏度高和特異性好等優(yōu)點(diǎn)，然而制備性能一致的分子印跡Pt電極難道較大，這是限制該方法推廣應(yīng)用的瓶頸所在。武會娟等[33]利用pH敏感型熒光指示劑F1300可以量化ATP合成酶的特點(diǎn)，建立了快速檢測CAP殘留的納米生物傳感器。結(jié)果顯示，該方法的檢測限為1×10-11mg/mL，檢測時間僅需35min，具有較好的應(yīng)用前景。Chullasat等[34]建立了蝦中CAP殘留電阻型免疫傳感器檢測方法。與其他修飾方法的傳感器相比，免疫傳感器具有更寬的線性范圍為(0.50～10)×10－16mol/L和更低的測定限。重復(fù)性實(shí)驗(yàn)表明該傳感器能重復(fù)使用45次(RSD＜4%)；實(shí)際樣品(蝦)中CAP殘留檢測結(jié)果與HPLC方法相符。Sun等[35]建立了實(shí)時檢測樣品中CAP的石英晶體微量天平(QCM)傳感器檢測方法。該研究以電紡技術(shù)(electrospinning)將纖維狀的聚苯乙烯膜嫁接到QCM電極表面，然后用金覆蓋電極，再用抗CAP抗體修飾電極表面。結(jié)果顯示，該檢測方法的線性范圍為5～100μg/L，能在2～3s內(nèi)得出檢測結(jié)果。

3 結(jié) 語

我國已成為世界淡水養(yǎng)殖規(guī)模最大、水產(chǎn)消費(fèi)市場容量最大的國家。水產(chǎn)品中CAP殘留可能對我國的水產(chǎn)品貿(mào)易及消費(fèi)者的身體健康帶來嚴(yán)重的影響。所以，研究CAP殘留檢測方法具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。儀器法和免疫檢測法是水產(chǎn)品中CAP殘留檢測和篩查的常用方法。儀器檢測法具有高效、靈敏、準(zhǔn)確的特點(diǎn)，但是需要昂貴的實(shí)驗(yàn)儀器和復(fù)雜的樣品前處理，不適合現(xiàn)場快速檢測的需要；免疫分析法操作方便、檢測時間短，能滿足現(xiàn)場快速檢測的需要，但是免疫分析法易受環(huán)境條件影響產(chǎn)生假陽性結(jié)果。所以，針對上述問題，今后水產(chǎn)品中CAP殘留檢測方法的研究可以從以下幾方面深入探索：1)建立簡單、有效、自動化程度高的提取方法，減少樣品提取和凈化步驟，降低由于樣品處理步驟繁瑣和人為因素造成的檢測誤差，提高檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性、一致性，降低檢測方法的檢出限；2)研制小型、便攜式檢測儀器，促進(jìn)儀器檢測方法的應(yīng)用簡便性和降低儀器檢測方法的成本；3)分子印跡聚合物具有類似生物抗體的識別特性，被稱為“塑料抗體”，研究代替CAP生物抗體的分子印跡聚合物仿生抗體建立仿生免疫分析方法，可能是降低免疫分析中出現(xiàn)假陽性結(jié)果機(jī)率的方法之一。

[1] 韓偉濤, 曹建亭, 張志, 等. 酶聯(lián)免疫法檢測水產(chǎn)品中氯霉素含量[J]. 中國水產(chǎn), 2006(2)： 57-58.

[2] 唐英章. 現(xiàn)代食品安全檢測技術(shù)[M]. 北京： 科學(xué)出版社, 2004： 6.

[3] 劉麗麗. 酶聯(lián)免疫法(ELISA)檢測水產(chǎn)品中氯霉素殘留量的影響因素及控制方法[J]. 齊魯漁業(yè), 2010, 27(2)： 7-9.

[4] SHAKILA J R, SARAVANAKUMAR R, VYLA S, et al. An improved microbial assay for detection of chloramphenicol residues in shrimp tissues[J]. Innovative Food Science and Emerging Technologies, 2007, 8： 515-518.

[5] 張小軍, 鄭斌, 李鐵軍, 等. 超高效液相色譜-串聯(lián)四極桿質(zhì)譜法測定水產(chǎn)品中氯霉素殘留量[J]. 分析實(shí)驗(yàn)室, 2010, 29(6)： 115-118.

[6] YANG S Y, HO C S, LEE C L, et al. Immunomagentic reduction assay on chloramphenicol extracted from shrimp[J]. Food Chemistry, 2012, 131： 1021-1025.

[7] 王鋒, 謝芳, 周紅杰, 等. GC檢測蝦中氯霉素殘留的研究[J]. 食品研究與開發(fā), 2010, 31(2)： 129-131.

[8] 李資玲, 黃優(yōu)生, 熊向源, 等. HPLC-ESI-MS/MS快速測定魚肉中的氯霉素殘留[J]. 廣東農(nóng)業(yè)科學(xué), 2010(7)： 217-219.

[9] LIU Wenlin, LEE R J, LEE M R. Supercritical fluid extraction in situ derivatization for simultaneous determination of chloramphenicol, florfenicol and thiamphenicol in shrimp[J]. Food Chemistry, 2010, 121： 797-802.

[10] 梁冰, 李慧馨, 李璐, 等. 含水溶劑中沉淀聚合法制備氯霉素分子印跡聚合物及其吸附性能研究[J]. 四川大學(xué)學(xué)報： 工程科學(xué)版, 2010, 42(6)： 172-175.

[11] 唐仕榮, 劉全德, 劉輝, 等. 氯霉素分子印跡聚合物中模板分子的洗脫方法[J]. 徐州工程學(xué)院學(xué)報： 自然科學(xué)版, 2011, 26(3)： 68-71.

[12] 李卓, 董文賓, 李娜, 等. 食品中氯霉素殘留檢測技術(shù)研究新進(jìn)展[J]. 食品工業(yè)科技, 2010(4)： 408-411.

[13] 朱蘭蘭, 林洪, 王靜雪, 等. 利用發(fā)光細(xì)菌進(jìn)行褐牙鲆中氯霉素殘留快速檢測的研究[J]. 食品與發(fā)酵工業(yè), 2007, 33(10)： 155-159.

[14] 王亞群, 王靜雪, 林洪, 等. 發(fā)光細(xì)菌法檢測水產(chǎn)品中氯霉素體系的建立[J]. 中國海洋大學(xué)學(xué)報, 2009, 39(1)： 66-70.

[15] 中國人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 22338—2008動物源性食品中氯霉素類藥物殘留量測定[EB/OL]. (2008-09-01) [2012-06-10]. http：//down.foodmate.net/d/search.php?n=1&mod=do&keyword=GB/T 22338-2008.

[16] LU Yanbin, ZHENG Tinglu, HE Xin, et al. Rapid determination of chloramphenicol in soft-shelled turtle tissues using on-line MSPDHPLC-MS/MS[J]. Food Chemistry, 2012, 134： 533-539.

[17] 藯慧, 楊林華. 蝦肉中氯霉素的UPLC/MS-MS檢測方法研究[J]. 食品研究與開發(fā), 2010, 31(9)： 136-139.

[18] 冷凱良, 李兆新, 李曉川, 等. SCT/T 3018—2004 水產(chǎn)品中氯霉素殘留量的測定氣相色譜法[S]. 北京： 中國農(nóng)業(yè)出版社, 2004.

[19] 中國人們共和國國家標(biāo)準(zhǔn)農(nóng)業(yè)部958號公告-14—2007水產(chǎn)品中氯霉素、甲砜霉素、氟甲砜霉素殘留量[EB/OL]. (2007-12-18) [2012-06-16]. http：//down.foodmate.net/standard/sort/9/18046.html.

[20] 中國人們共和國國家標(biāo)準(zhǔn)農(nóng)業(yè)部1025號公告-26-2008動物源食品中氯霉素殘留檢測 酶聯(lián)免疫吸附法[EB/OL]. (2008-04-29) [2012-06-10]. http：//wenku.baidu.com/view/0fa881130b4e767f5acfceee.html.

[21] 譚慧, 麥琦. 酶聯(lián)免疫分析法測定水產(chǎn)品中氯霉素殘留量[J]. 中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志, 2010, 20(7)： 1649-1650.

[22] 馬玲, 關(guān)忠誼, 吳健敏, 等. 氯霉素殘留一步式化學(xué)發(fā)光酶免疫法的建立[J]. 南方農(nóng)業(yè)學(xué)報, 2011, 42(2)： 205-208.

[23] 王瑋. 氯霉素殘留快速檢測膠體金試紙條的研究[D]. 天津： 天津科技大學(xué), 2008.

[24] 張燦, 馬海樂, 王輝, 等. 氯霉素毛細(xì)管電泳免疫分析方法研究[J]. 食品科學(xué), 2010, 31(8)： 146-149.

[25] HONG C Y, WU C C, CHIU Y C, et al. Magnetic susceptibility reduction method for magnetically labeled immunoassay[J]. Applied Physics Letters, 2006, 88： 2125121-2125123.

[26] HONG C Y, CHEN W H, JIAN Z F, et al. Wash-free immunomagnetic detection for serum through magnetic susceptibility reduction[J]. Applied Physics Letters, 2007, 90： 741051-741053.

[27] MA Q J, LI H P, YANG F, et al. A fluorescent sensor for low pH values based on a covalently immobilized rhodamine-napthalimide conjugate[J]. Sensors and Actuators B： Chemical, 2012, 166： 68-74.

[28] AKSUNER N, HENDEN E, YILMAZ I, et al. A novel optical chemical sensor for the determination of nickel (Ⅱ) based on fluorescence quenching of newly synthesized thiazolo-triazol derivative and application to real samples[J]. Sensors and Actuators B： Chemical, 2012, 166： 269-274.

[29] MEHTA S K, KHUSHBOO, UMAR A. Highly sensitive hydrazine chemical sensor based on mono-dispersed rapidly synthesized PEGcoated ZnS nanoparticles[J]. Talanta, 2011, 85： 2411-2416.

[30] WANG T Y, SHANNON C. Electrochemical sensors based on molecularly imprinted polymers grafted onto gold electrodes using click chemistry[J]. Analytica Chimica Acta, 2011, 708： 37-43.

[31] LIU G Q, TANG F L, LI L, et al. Concentration detection of quantum dots in the visible and near-infrared range based on surface plasmon resonance sensor[J]. Materials Letters, 2011, 65： 1998-2000.

[32] 張麗君, 陸天虹, 李時銀, 等. 氯霉素分子印跡聚合膜電極的制備及氯霉素檢測[J]. 應(yīng)用化學(xué), 2011, 28(3)： 338-342.

[33] 武會娟, 魏玲, 劉清珺, 等. 納米生物傳感器在氯霉素檢測中的應(yīng)用[J]. 食品科學(xué), 2010, 31(8)： 167-170.

[34] CHULLASAT K, KANATHARANA P, LIMBUT W, et al. Ultra trace analysis of small molecule by label-free impedimetric immunosensor using multilayer modified electrode[J]. Biosensors and Bioelectronics, 2011, 26： 4571-4578.

[35] SUN M, DING B, LIN J Y, et al. Three-dimensional sensing membrane functionalized quartz crystal microbalance biosensor for chloramphenicol detection in real time[J]. Sensors and Actuators B： Chemical, 2011, 160： 428-434.