孔 偉，馬志遠(yuǎn)，王寶全，竇世玲，米占鋒，馬 元，張寶良，曹振卿

（甘肅省家畜繁育中心，甘肅 武威 733000）

近年來，口蹄疫疫病發(fā)病情況比較復(fù)雜，給我國畜牧業(yè)生產(chǎn)帶來了重威脅。種公牛站作為育種和牛冷凍精液生產(chǎn)供應(yīng)單位，對疫情的防控意義要遠(yuǎn)大于一般養(yǎng)殖場，所以利用口蹄疫疫苗對種公牛進(jìn)行多次免疫是各種公牛站年度防疫工作的重點(diǎn)。但在生產(chǎn)實(shí)踐中發(fā)現(xiàn)，注射口蹄疫疫苗對種公牛造成不同程度的應(yīng)激反應(yīng)，導(dǎo)致精液品質(zhì)在短期內(nèi)下降，給凍精生產(chǎn)帶來了一定的不利影響［1］。為了客觀、準(zhǔn)確地掌握種公牛注射口蹄疫疫苗后精液品質(zhì)的影響程度及恢復(fù)狀況，本試驗(yàn)通過連續(xù)3年跟蹤監(jiān)測注射口蹄疫疫苗對種公牛生產(chǎn)的影響，減少因疫苗注射造成的生產(chǎn)損失提供數(shù)據(jù)參考，為今后制定科學(xué)的免疫程序提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物

選擇甘肅省家畜繁育中心種公牛站飼養(yǎng)的20頭健康無病、體重相近、性欲旺盛、采精正常的西門塔爾種公牛作為供試牛，年齡為2～4歲。試驗(yàn)期間按照《種公牛飼養(yǎng)管理技術(shù)規(guī)程》進(jìn)行。

1.2 試驗(yàn)時(shí)間

試驗(yàn)全期分為三個(gè)階段，第一階段前期為2009年4月25至5月25日、后期為2009年9月25至10月25日，第二階段前期為2010年4月25至5月25日、后期為2010年9月25至10月25日，第三階段前期為2011年4月25至5月25日、后期為2011年9月25至10月25日。

1.3 試驗(yàn)疫苗

選擇由中農(nóng)威特生物科技股份有限公司生產(chǎn)的O型、亞洲Ⅰ型口蹄疫二價(jià)滅活疫苗，每年免疫2次，注射時(shí)間為5月10和10月10日。

1.4 儀器設(shè)備

牛用假陰道、鼓風(fēng)干燥消毒柜、精子密度測定儀、電子天平、低溫冷凍儀、磁力攪拌器、恒溫水浴鍋、超聲波洗滌器、相差顯微鏡、細(xì)管精液封裝打印一體機(jī)、平衡冷柜、程序冷凍儀、高壓滅菌器、無菌操作臺(tái)、染色板。

1.5 采精操作

由專職采精員負(fù)責(zé)采精工作，成年牛采精頻率為每周采精2d，間隔2d，一天采精2次，中間間隔不少于30min，青年公牛每周1次，早晨采精，并嚴(yán)格執(zhí)行采精操作規(guī)程。

1.6 精液制作

原精采集后送入檢測室，專人檢測評定精液量、精子活力和原精密度，確定稀釋倍數(shù)。將稀釋好的精液封裝后，放入4℃冰箱中平衡4h，用程控冷凍儀按設(shè)定好的冷凍程序冷凍，最后用附電視顯微攝像系統(tǒng)的生物顯微鏡評定活力，鏡檢合格者包裝入庫［1］。

1.7 數(shù)據(jù)處理

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 13.0進(jìn)行T檢驗(yàn)，各組數(shù)據(jù)均以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 注射口蹄疫疫苗后種公牛臨床癥狀觀察

試驗(yàn)牛注射口蹄疫苗后表現(xiàn)為：虛弱無神、低頭耷耳、不愿活動(dòng)、眼睛潮紅、流口水、采食減少、體溫升高、呼吸急促等應(yīng)激癥狀，注射部位腫脹，肌肉堅(jiān)硬形成包塊，長期不散。

2.2 注射口蹄疫疫苗前后種公牛精液品質(zhì)的比較

2.2.1 精液量的變化 從表1可知：接種口蹄疫疫苗前后種公牛的射精數(shù)量發(fā)生了明顯變化，連續(xù)三年，接種后15d的精液量均顯著低于接種前15d的精液量（P＜0.05），2009年接種后較之接種前減少了2.4mL、2010年減少了2.3mL、2011年減少了2.5mL，連續(xù)三年接種后射精量與接種前精液量相比較，降幅較大，分別下降了36.36%、33.82%和32.90%。

表1 接種口蹄疫疫苗前后種公牛精液量的比較

2.2.2 精子密度的變化 接種口蹄疫疫苗前15d和接種后15d種公牛精子密度如表2所示，2009年接種前后精子密度差異顯著（P＜0.05），接種后精子密度減少了4.98億／mL，下降幅度為28.97%；2010年接種前精子密度顯著高于接種后（P＜0.05），接種后精子密度減少了464億／mL，下降幅度為26.75%；2011年接種后精子密度顯著低于接種前精子密度（P＜0.05），接種后精子密度減少了4.94億／mL，下降幅度為27.61%。

2.2.2 精子活力的變化 種公牛接種O型、亞洲Ⅰ型口蹄疫二價(jià)滅活疫苗前后精子活力的變化如表3所示，接種后原精活力達(dá)0.6上所占比例、接種后原精活力和接種后凍后活力與接種前相比較，均有所下降，2009年上述三項(xiàng)活力指標(biāo)分別下降了15.4%、1.9%、8.4%，2010年依次降低了10.9%、4.4%、9.25，2011則下降了10.5%、2.6%、10.6%。經(jīng)顯著性檢驗(yàn)，連續(xù)三年，接種口蹄疫疫苗前后，三種精子活力表示指標(biāo)均無顯著差異（P＞0.05）。

表2 接種口蹄疫疫苗前后種公牛精子密度的比較

表3 接種口蹄疫疫苗前后種公牛精子活力的比較

2.2.4 精子畸形率和頂體完整率的變化 種公牛精子畸形率和頂體完整率在接種疫苗前后發(fā)生的變化如表4所示，2009年接種前精子畸形率顯著低于接種后（P＜0.05）、接種前頂體完整率顯著高于接種后（P＜0.05），接種后精子畸形率上升了5.7%，頭部膨脹、大卷尾、有頭無尾精子，以及帶有原生質(zhì)滴精子增多，接種后精子頂體完整率下降9.2%，頂體中頭部膨脹、頂體半脫落、頂體全部脫落的精子，以及著色不均的精子明顯增多；2010年和2011年接種前后種公牛精子畸形率和頂體完整率變化特點(diǎn)基本與2009年相符，接種后2010年和2011年精子畸形率分別上升了6.2%、7.6%，接種后2010年和2011年精子頂體完整率各自下降了9.9%和8.9%。

表4 接種口蹄疫疫苗前后種公牛精子畸形率和頂體完整率的比較

2.2.5 精子存活率的變化 由表5可知：在37℃、4h內(nèi)精子存活率接種疫苗后明顯減弱。相同條件下，連續(xù)三年，接種后精子存活率均極顯著低于接種前（P＜0.01），接種后2009年、2010年和2011年精子存活率分別下降了17.15%、15.8%及15.2%，降幅依次為62.82%、58.83%及53.33%。

表5 接種口蹄疫疫苗前后種公牛精子存活率的比較

3 討論

3.1 口蹄疫疫苗對種公牛精液品質(zhì)的影響原因分析

利用口蹄疫疫苗對偶蹄目動(dòng)物進(jìn)行免疫已成為許多國家防控口蹄疫疫情的主要措施和手段，并收到了顯著效果。但在免疫過程中發(fā)現(xiàn)，疫苗注射后對動(dòng)物生產(chǎn)均會(huì)產(chǎn)生一定程度的負(fù)面影響。孫江濤等研究認(rèn)為，口蹄疫疫苗注射可影響奶牛的產(chǎn)奶量、體溫和乳品質(zhì)，且持續(xù)5～6d［2］。汪澤華研究結(jié)果表明：種公豬在預(yù)防注射后的第1～5d內(nèi)，采取精液是完全可以使用的，在第6d到第14以至25d內(nèi)，因精子活力沒有完全恢復(fù)，故不宜采精配種，否則影響配孕率［3］。馬保華等研究認(rèn)為：在注射傳染性胸膜肺炎疫苗后次日起7d內(nèi)精子活力處于0.2～0.5之間，達(dá)不到輸精要求，7d后精子活力逐漸升高，密度也開始逐漸增加［4］。以上研究結(jié)果同時(shí)表明：畜禽免疫接種各種不同的疫苗后，其生產(chǎn)性能、繁殖性能等出現(xiàn)不同程度的下降趨勢。

本試驗(yàn)研究結(jié)果表明：種公牛免疫接種O型、亞洲Ⅰ型口蹄疫二價(jià)滅活疫苗后15d，種公牛的精液量明顯減少，因種公牛精液量的多少受到年齡、采精員的技術(shù)手法、采精季節(jié)（如溫度、濕度）、采精頻率、種公牛營養(yǎng)水平、性欲及精神狀態(tài)等影響［5］，在本試驗(yàn)中，上述因素均保持一致，從而說明注射口蹄疫疫苗會(huì)顯著降低種公牛的精液量。接種疫苗后，種公牛的精子密度顯著減小、精子畸形率顯著增加、精子頂體完整率顯著下降、精子存活率顯著減弱，究其原因，其一、可能與疫苗的注射應(yīng)激及疫苗中氫氧化鋁或雙相礦物油等佐劑對動(dòng)物細(xì)胞具有毒性作用有關(guān)［6］，其二、可能與種公牛精液生成有關(guān)，因一個(gè)精子發(fā)生周期所需時(shí)間為45～60d［5］，注射口蹄疫疫苗恰好與精子發(fā)生周期相一致，造成精液品質(zhì)下降現(xiàn)象。

根據(jù)GB4143－2008《牛冷凍精液》國家標(biāo)準(zhǔn)的要求，種公牛鮮精活力須≥65%，凍后活力≥35%，不符合該標(biāo)準(zhǔn)的精液均要廢棄，鮮精活力率可以說明口蹄疫疫苗對種公牛精液生產(chǎn)的影響。由本試驗(yàn)結(jié)果可以看出，除2009年和2010年接種后原精活力略低于65%，其余活力指標(biāo)均滿足生產(chǎn)要求。雖然注射口蹄疫疫苗前后種公牛的精子活力之間差異不顯著，但有下降的趨，導(dǎo)致發(fā)生的原因可能來自種公牛體質(zhì)逐漸恢復(fù)、種公牛精液質(zhì)量逐漸提高和疫苗引起的應(yīng)激反應(yīng)逐漸減?。?］。

3.2 降低口蹄疫疫苗對種公牛精液品質(zhì)的影響措施

口蹄疫疫苗注射對種公牛產(chǎn)生較大應(yīng)激，對種公牛精液品質(zhì)有一定的負(fù)面影響。從本試驗(yàn)研究結(jié)果可以看出，口蹄疫疫苗的接種對種公牛精液品質(zhì)影響較大。在這段時(shí)間里，飼養(yǎng)管理人員及飼喂人員應(yīng)精心照料好接種公牛，從衛(wèi)生、飲水、飲食等多方面入手，給予接種疫苗牛群最佳的關(guān)心照料，以使牛體在最短時(shí)間內(nèi)恢復(fù)精液品質(zhì)。為了降低接種疫苗對精液品質(zhì)的影響，建議采取如下措施：①預(yù)防注射時(shí)，應(yīng)考慮生產(chǎn)需要，合理安排種公牛的免疫時(shí)間，緩解因疫苗應(yīng)激引起的精液質(zhì)量下降，比如采取在每年的停采期進(jìn)行疫苗注射或減少疫苗注射次數(shù)等措施，都可以減少種公牛站的生產(chǎn)損失；②種公牛在接種口蹄疫疫苗后停采一段時(shí)間，待牛體及精液品質(zhì)回升后再恢復(fù)生產(chǎn)［7］；③加強(qiáng)門衛(wèi)消毒制度，生產(chǎn)區(qū)內(nèi)的工作人員應(yīng)注意嚴(yán)格消毒，非生產(chǎn)人員嚴(yán)禁進(jìn)人，把好種公牛的飼料來源地的選擇，加強(qiáng)牛舍的衛(wèi)生制度，搞好牛體的衛(wèi)生［8］；④加強(qiáng)種公牛運(yùn)動(dòng)鍛煉增強(qiáng)體質(zhì)，及時(shí)清理牛舍內(nèi)糞便污物。

綜上所述，注射O型、亞洲Ⅰ型口蹄疫二價(jià)滅活疫苗對種公牛精液量、精子密度、精子活力、精子畸形率、精子頂體完整率及精子存活率均產(chǎn)生一定程度的負(fù)面影響，給精液生產(chǎn)帶來了一定的損失。因此，合理安排種公牛的免疫時(shí)間，盡量避開種公牛精液生產(chǎn)高峰期，可以減少因疫苗注射引起的凍精生產(chǎn)損失，在達(dá)到預(yù)期免疫效果的同時(shí)，最大限度提高種公牛的精液品質(zhì)，保證種公牛生產(chǎn)正常進(jìn)行。

3.3 本試驗(yàn)改進(jìn)之處

本試驗(yàn)選擇研究對象單一，僅為西門塔爾種公牛，且試驗(yàn)對象數(shù)量有限，建議增加其他種公牛品種，比較品種間差異，同時(shí)增加每一品種的試驗(yàn)數(shù)量和試驗(yàn)覆蓋范圍，提高試驗(yàn)結(jié)果的廣泛性和可信性；因本次研究僅檢查接種口蹄疫疫苗后15d時(shí)種公牛的精液品質(zhì)，建議增設(shè)時(shí)間段，比如以周為單位，詳細(xì)監(jiān)測每一周種公牛精液品質(zhì)的變化規(guī)律，為合理開展種公牛精液生產(chǎn)和制定切實(shí)可行的免疫程序提供理論指導(dǎo)。

［1］ 張淑二，朱茹萌，翟向瑋等.注射口蹄疫疫苗對三個(gè)品種公牛精液品質(zhì)的影響［J］.家畜生態(tài)學(xué)報(bào)，2011，32（4）：75－78.

［2］ 孫江濤，程大慶，郭成林，等.注射口蹄疫疫苗對泌乳牛生產(chǎn)性能的影響［J］.中國奶牛，2009，（5）：40－41.

［3］ 汪澤華.常規(guī)免疫注射對公豬精子活力的影響［J］.貴州畜牧獸醫(yī)，2002，26（2）：31－32.

［4］ 馬保華，趙曉娥.傳染性胸膜肺炎及其疫苗對山羊繁殖性能的影響［J］.動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2000，21（4）：134－135.

［5］ 張海濤，劉 玉，張曉霞，等.影響公牛精液產(chǎn)量的因素及應(yīng)對措施［J］.中國奶牛，2006，（10）：21－23.

［6］ 蔣文俊，李華春，李 樂，等.口蹄疫疫苗研究進(jìn)展［J］.畜牧與獸醫(yī)，2004，36（5）：42－43.

［7］ 王元興，郎介金，丁家桐，等.動(dòng)物繁殖學(xué)［M］.南京：江蘇科技出版社，1993：56－57.

［8］ 劉武軍，劉 涌.關(guān)于種公牛注射口蹄疫疫苗引起生產(chǎn)性能降低的分析［J］.黃牛雜志，1995，21（4）65－67.