黃育敏

（海南省婦幼保健院檢驗中心，海南海口570206）

產(chǎn)ESBLs酶大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌耐藥性分析

黃育敏

（海南省婦幼保健院檢驗中心，海南?？?70206）

目的了解下呼吸道感染產(chǎn)ESBLs酶大腸埃希菌及肺炎克雷伯菌的耐藥特性，為臨床抗菌藥物合理使用提供依據(jù)。方法采用VITEK-32對大腸埃希菌及肺炎克雷伯菌進(jìn)行菌株鑒定，采用K-B法進(jìn)行藥敏試驗及采用確證試驗進(jìn)行ESBLs測定。結(jié)果我院下呼吸道產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌陽性率為27.1%，產(chǎn)ESBLs肺炎克雷伯菌陽性率為40.5%；這兩種菌對亞胺培南和美羅培南顯示100%敏感，對頭孢西丁、哌拉西林/他唑巴坦、阿米卡星也有較高的敏感性。對其余的抗菌藥物耐藥率均較高，相同藥物中產(chǎn)ESBLs菌的耐藥率均比非產(chǎn)ESBLs的高。結(jié)論根據(jù)我院的藥敏結(jié)果分析，建議對大腸埃希菌及肺炎克雷伯菌臨床經(jīng)驗用藥可選用碳青霉烯類抗生素。

大腸埃希菌；肺炎克雷伯菌；耐藥性；ESBLs

產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶（Extended-spectrum β-lacta-mases，ESBLs）的大腸埃希菌及肺炎克雷伯菌是下呼吸道感染的主要病原菌，同時也是醫(yī)院感染中最常見的條件致病菌。隨著頭孢菌素類抗生素廣泛應(yīng)用，導(dǎo)致產(chǎn)ESBLs發(fā)生率逐年升高，給臨床治療帶來極大的困難。為此對海南省婦幼保健院2012年1月至6月兒科下呼吸道感染患兒痰標(biāo)本分離出的非重復(fù)肺炎克雷伯菌111株及大腸埃希菌59株耐藥性進(jìn)行回顧性分析，以期為臨床更有針對性地選擇抗菌藥物提供參考和幫助。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 菌株來源2012年1月至6月，我院兒科送檢的下呼吸道感染患兒標(biāo)本中分離出的非重復(fù)肺炎克雷伯菌111株及大腸埃希菌59株。

1.1.2 儀器與試劑VITEK-32鑒定儀、GNI+鑒定卡購自法國生物梅里埃公司。血瓊脂平板培養(yǎng)基、M-H藥敏平板購自安圖公司。

1.1.3 藥敏紙片氨芐西林、氨芐西林/舒巴坦、哌拉西林、哌拉西林/他唑巴坦、頭孢唑啉、頭孢噻肟(30μg)、頭孢噻肟/克拉維酸(30μg/10μg)、頭孢他啶(30μg)、頭孢他啶/克拉維酸(30μg/10μg)、頭孢呋辛、頭孢哌酮/舒巴坦、頭孢吡肟、頭孢西丁、亞胺培南、美洛培南、慶大霉素、阿米卡星、環(huán)丙沙星、復(fù)方新諾明、左氧氟沙星等抗生素紙片購自英國Oxoid公司。

1.2 方法

1.2.1 菌株鑒定將檢驗合格的痰標(biāo)本接種于血平板及中國蘭平板，35℃培養(yǎng)18～24 h?？梢删溥M(jìn)行分純，純化后的菌落用GNI+鑒定卡在VITEK-32鑒定儀上進(jìn)行菌株鑒定。

1.2.2藥敏試驗采用K-B紙片擴(kuò)散法，按照CLSI 2008 M100-S18相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)判斷。

1.2.3 ESBLs檢測參照CLSI推薦的確證試驗進(jìn)行：頭孢噻肟與頭孢噻肟/克拉維酸組合；頭孢他啶與頭孢他啶/克拉維酸組合，任一組藥物的抑菌圈的直徑差≥5 mm時，判定為ESBLs陽性株。大腸埃希桿菌ATCC25922、肺炎克雷伯菌ATCC700603為陽性質(zhì)控。

2 結(jié)果

2.1 陽性率在大腸埃希菌中產(chǎn)ESBLs陽性率為27.1%(16/59)，肺炎克雷伯菌中產(chǎn)ESBLs陽性率為28.8%(32/111)，總陽性率為28.2%(48/170)。

2.2 耐藥情況大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌對碳青霉烯類藥物亞胺培南、美羅培南的敏感性均為100%，其次對阿米卡星、哌拉西林/他唑巴坦、頭孢西丁的敏感率也較高，除頭胞西丁外，對其他頭孢類藥物耐藥率均較高。對同種藥物，產(chǎn)SEBLs菌對抗生素的耐藥性均高于非產(chǎn)SEBLs菌，見表1。

表1 大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌對常用抗菌藥物的耐藥率（%）

3 討論

超廣譜β-內(nèi)酰胺酶(ESBLs)于1983年在德國發(fā)現(xiàn)后，醫(yī)學(xué)領(lǐng)域?qū)＜覍τ谠撁改退幮苑矫娴难芯砍掷m(xù)增溫。近年來由于臨床對抗菌藥物的不合理使用，尤其是第三代頭孢的大量使用，導(dǎo)致產(chǎn)ESBLs菌的耐藥性逐年增加。

ESBLs是由質(zhì)粒介導(dǎo)的一類水解酶[1]，可通過質(zhì)粒在細(xì)菌中傳播，是腸桿菌科細(xì)菌對β-內(nèi)酰胺類藥物產(chǎn)生耐藥的主要原因之一，具有水解含氧亞氨基β-內(nèi)酰胺類抗生素的能力，它能分解一、二、三代頭孢菌素和青霉素類抗生素，甚至可以分解第四代頭孢類抗菌藥物。

本研究對2012年1月至6月我院兒科送檢的下呼吸道感染患兒痰標(biāo)本中分離出的大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌進(jìn)行耐藥性分析，產(chǎn)ESBLs菌株總陽性率為28.2%(48/170)，低于劉成偉等[2]報道的35.8%，與孟祥紅等[3]報道的28.14%接近，高于郭緒平等[4]報道的18.0%。產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌陽性率為27.1% (16/59)，低于朱德妹等[5]報道的56.2%、蔣冬香等[6]報道的50.1%。產(chǎn)ESBLs肺炎克雷伯菌陽性率為28.8% (32/111)，低于朱德妹等[5]報道的43.6%、蔣冬香等[6]報道的37.2%。差異可能與各地收集的標(biāo)本類型不同，也可能與各地習(xí)慣性用藥不同有關(guān)。

由表1可見，產(chǎn)ESBLs菌株對頭孢菌素、單環(huán)β-內(nèi)酰胺類抗生素均呈高度耐藥，但對碳青霉烯類藥物均敏感，對阿米卡星、哌拉西林/他唑巴坦、頭孢西丁亦有較高的敏感性。在同種藥物中產(chǎn)SEBLs菌株對抗菌藥物的耐藥性均高于非產(chǎn)SEBLs菌株，其中產(chǎn)ESBLs菌對氨芐西林的耐藥率高達(dá)100%，除對頭孢西丁的耐藥率較低外(12.5%～18.7%)，對二、三代頭孢菌素的耐藥率達(dá)71.8%～100%，但對含酶抑制劑的抗生素（如：哌拉西林/他唑巴坦）其耐藥率也僅為12.5%～21.9%。本研究還顯示產(chǎn)ESBLs菌株對左氧氟沙星、環(huán)丙沙星、復(fù)方新諾明、慶大霉素亦存在較高的耐藥率，這可能與產(chǎn)ESBLs菌不僅攜帶ESBLs質(zhì)粒，同時還攜帶有對氨基糖甙類和喹諾酮類抗菌藥物的耐藥基因有關(guān)。

鑒于近年大腸埃希菌及肺炎克雷伯菌的耐藥性逐年增加，臨床對產(chǎn)ESBLs菌感染經(jīng)驗性用藥時應(yīng)避免使用頭孢類抗生素以及氨基糖甙類和喹諾酮類，應(yīng)使用敏感率高的碳青霉烯類抗生素。產(chǎn)ESBLs的大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌是醫(yī)院感染的主要病原菌，除了應(yīng)加強(qiáng)監(jiān)測與合理使用抗菌藥物外，還應(yīng)加強(qiáng)醫(yī)院內(nèi)的隔離和消毒措施，減少醫(yī)院內(nèi)交叉感染的發(fā)生。

[1]Bish Jacoby GA,Medeinos AA.A functional classification scheme for β-lacatamases and its correlateion with molecular structure[J]. An-timicrobAgents Chemother,1995,39:1211.

[2]劉成偉,李文桂,鄭行萍,等.產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶大腸桿菌和肺炎克雷伯菌的分布及耐藥性分析[J].中國病原生物雜志,2006, 12:404-406.

[3]孟祥紅,肖漓.產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶大腸桿菌和肺炎克雷伯菌的耐藥性研究[J].中國實驗診斷學(xué),2006,1:55-57.

[4]郭緒平,李陽.產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶腸桿菌的分布及耐藥性分析[J].重慶醫(yī)學(xué),2007,27(7):566-567.

[5]朱德妹,汪復(fù),胡付品,等.2010年中國CHINET細(xì)菌耐藥性監(jiān)測[J].中國化療與感染雜志,2011,9(20):321-329.

[6]蔣冬香,陳剛,王玉春,等.產(chǎn)ESBLs,大腸埃希菌與肺炎克雷伯菌的臨床分布與耐藥性[J].中華醫(yī)院感染學(xué)雜志,2011,21(2): 371-373.

Drug resistance analysis of Escherichia coli and Klebsiella pneumoniae producing extended spectru beta-lactamases

HUANG Yu-min.Hainan Provincial Maternity and Infant Health Hospital,Haikou 570206,Hainan, CHINA

ObjectiveTo investigate the drug resistance of Escherichia coli and Klebsiella pneumoniae producing extended-spectrum β-lactamases(ESBLs),and then provide bases for clinical control and treatment of ESBLs bacteria infection.MethodsThe bacterial identification of E.coli and K.pneumoniae were performed on VITEK-32, antimicrobial susceptibility was tested by disc diffusion test(K-B method),and ESBLs was detected by confirmatory test.ResultsThe positive rate of E.coli producing ESBLs was 27.1%,and the positive rate of K.pneumoniae producing ESBLs was 40.5%,E.coli and K.pneumoniae had 100%susceptible rate to imipenem and meropenem,and they were susceptible to cefoxitin,piperacillin/tazobactam,amikacin,but to other antimicrobials,the resistance rate of them were high.To the same antimicrobial,ESBLs positive strains had higher resistance rate than ESBLs negative ESBLs strains.ConclusionAccord to the result of drug sensitive test,carbapenem antibiotics could be the best choice to control the infection due to E.coli and K.pneumoniae.

Escherichia coli;Klebsiella pneumoniae;Drug resistance;Extended-spectrum β-lactamases(ESBLs)

R378.2

A

1003—6350（2013）06—0858—02

10.3969/j.issn.1003-6350.2013.06.0366

2012-10-09)

黃育敏。E-mail：hnhym20000@126.com