宋世平，王淼，董磊，安映紅，全首禎，馬紅雨

(1.北京軍事醫(yī)學科學院附屬醫(yī)院檢驗科，北京100071；2.空軍總醫(yī)院臨床檢驗中心，北京100142)

·論著·

尿紅細胞THP免疫熒光染色在血尿紅細胞來源鑒定中的應用價值

宋世平1，王淼1，董磊2，安映紅2，全首禎2，馬紅雨2

(1.北京軍事醫(yī)學科學院附屬醫(yī)院檢驗科，北京100071；2.空軍總醫(yī)院臨床檢驗中心，北京100142)

目的探討尿紅細胞T-H蛋白(Tamm-Horsfall protein，THP)免疫熒光檢測在鑒定尿紅細胞來源中的臨床應用價值，并對2004-2007年臨床診斷單純血尿情況進行總結，了解腎性血尿與非腎性血尿的病因和分布特點。方法利用尿紅細胞THP免疫熒光染色技術對明確診斷的30例腎小球性血尿和25例非腎小球性血尿標本進行尿紅細胞的THP免疫熒光染色，并與病理結果進行比較分析。結果在病理診斷確定的30例腎小球性血尿中，THP檢測診斷腎性血尿28例，符合率為93.3%；在臨床明確診斷的非腎性血尿25例中，THP檢測確定非腎性血尿22例，符合率為88%。病理分析顯示腎性血尿中，IgA腎病16例(53.3%)，腎小球微小病變10例(33.3%)，非IgA腎病的系膜細胞增殖性腎小球腎炎3例(10.0%)，局灶階段性硬化性腎炎1例(3.3%)。結論THP免疫熒光染色鑒別尿紅細胞來源的方法特異性強，是鑒別腎性與非腎性血尿的一種有價值的診斷方法，能夠為血尿患者的早期診斷與治療提供臨床依據(jù)。

血尿；Tamm-Horsfall蛋白；免疫熒光染色

血尿為泌尿系統(tǒng)常見病之一，不易診斷，按其來源可分為腎性及非腎性血尿。傳統(tǒng)無創(chuàng)性的鑒別血尿紅細胞來源的方法主要是利用相差顯微鏡觀察紅細胞形態(tài)進而判斷血尿來源，但該法易受尿PH、滲透壓等多種因素影響，操作者主觀因素的影響較大，各實驗室的標準尚未統(tǒng)一，因此該方法的準確度僅為70%～80%[1-2]。研究表明[3]，腎小球來源的紅細胞經(jīng)過腎小管時表面可被THP包裹，而非腎小球性血尿中的紅細胞，由于不經(jīng)過髓袢及遠端小管，表面不會覆蓋THP顆粒，因此應用免疫熒光技術檢測尿紅細胞表面THP可以鑒別腎小球性和非腎小球性血尿。本文建立了尿紅細胞THP的免疫熒光檢測方法，在識別尿紅細胞來源方面具有客觀、準確等優(yōu)點，并結合臨床、病理結果對55例血尿病例進行了總結，現(xiàn)報道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料選擇2004-2007年在我院住院或門診隨診診斷明確的單純性血尿共計55例：男19例，女36例，年齡平均38歲，患者均具有完整的腎臟病理資料、臨床資料。

1.2 試劑與設備熒光標記的兔抗人THP抗體(一抗)、TRITC標記的山羊抗兔抗體(二抗)均購自尚柏生物公司，熒光顯微鏡為奧林巴斯IX81。

1.3 方法

1.3.1 尿紅細胞THP免疫熒光檢測留患者尿5 ml，2 000 r/min離心10 min，沉淀以PBS重懸，離心后取1滴混懸液鋪于載玻片上，自然風干后，以冷丙酮固定10 min，放入-20℃冰箱備用。染色時用10%山羊血清封閉20 min；加入抗人THP一抗，室溫下孵育1 h，PBS洗滌3 min，共3次；避光滴加1:100稀釋的TRITC標記的二抗，37℃孵育1.5 h；PBS洗滌3 min，共3次；用抗淬滅封片劑封片；在普通光源下計數(shù)總紅細胞數(shù)后，切換至熒光下計數(shù)熒光陽性紅細胞。每例標本至少計數(shù)100個紅細胞，以熒光陽性細胞＞70%為腎性血尿，＜30%為非腎性血尿。THP陽性紅細胞著清晰黃綠色熒光,容易和染色陰性的紅細胞相鑒別。

1.3.2 臨床診斷方法詳細詢問病史-尿常規(guī)檢測-考慮泌尿系統(tǒng)結石-腫瘤選擇-尿路平片-腎盂造影?？紤]腎小球腎炎時做腎活檢。

1.4 統(tǒng)計學方法SPSS12.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)的統(tǒng)計學處理，THP蛋白免疫熒光染色檢測尿紅細胞來源與腎病理結果符合性的確定使用Kappa檢驗。

2 結果

2.1 尿紅細胞THP免疫熒光染色鑒定血尿來源的可靠性在30例腎性血尿中，有28例THP免疫熒光染色陽性，與病理診斷一致，符合率為93.3%。在25例非腎小球性血尿中，有3例與臨床不符，符合率為88%，見表1和表2。尿紅細胞THP免疫熒光染色陽性紅細胞見圖1。

表1 55例單純性血尿患者的病因情況

表2 30例腎性血尿的病理類型

圖1 尿液紅細胞THP免疫熒光染色(×40)

2.2 血尿患者的病因分析在跟蹤檢查的55例血尿患者中，腎性血尿為30例，非腎性血尿25例，臨床病因診斷見表1，腎性血尿的病理分型見表2。

3 討論

血尿是指尿中紅細胞排泄異常增多，是泌尿系統(tǒng)可能有病患的訊號，輕者僅鏡下發(fā)現(xiàn)紅細胞增多，稱為鏡下血尿；重者外觀呈洗肉水樣或含有血凝塊，稱為肉眼血尿。一般單純性血尿無臨床癥狀，在行尿常規(guī)時發(fā)現(xiàn)，引起血尿的原因很多，如腎炎、泌尿系統(tǒng)結石、外傷、腫瘤以及多種理化因素等，因此診斷較為困難[4]。目前鑒別腎小球性或非腎小球性血尿的最常用的方法是利用相差顯微鏡檢查尿沉渣，當尿紅細胞數(shù)＞8×106/L，且其中異形紅細胞(環(huán)形、靶形、芽孢形等)＞80%，則視為腎小球性血尿；尿紅細胞表面光滑，大小和形態(tài)均一，且畸形紅細胞在20%以下提示非腎小球性血尿[5]。但由于該方法易受標本放置時間、尿液理化性質(zhì)及人為主觀因素的影響，并且各實驗室的方法學及認定標準不統(tǒng)一，導致血尿的臨床診斷不夠準確，因此迫切需要診斷血尿來源的快速、準確以及可靠的檢測方法。

THP為尿中黏蛋白的一種，經(jīng)免疫熒光與免疫酶電鏡證實它是由腎小管髓袢升支粗段與遠曲小管的上皮細胞內(nèi)高爾基復合體產(chǎn)生，是尿中構成管型的一種腎特異性大分子糖蛋白，分子量為94 kD[6]。健康成人每天由尿液排泄的THP 20～70 mg，在腎損傷情況下，尿中排出減少，而且其排出量與損傷程度一致，故TH蛋白在尿中的排泄量可以認為是檢測腎功能的一項指標[7]。腎小球來源的紅細胞在經(jīng)過腎小管時可被THP覆蓋，而非腎小球性血尿中紅細胞則不會出現(xiàn)此種現(xiàn)象，因此通過紅細胞表面THP的檢測可以判斷血尿中紅細胞的來源。本研究采用免疫熒光染色法來檢測尿紅細胞THP，染色陽性紅細胞＞70%則判定為腎性血尿，此方法操作簡便，重復性好，結果穩(wěn)定可靠。

本研究選擇了160例血尿患者進行跟蹤觀察，其中32例未遵醫(yī)囑定期來院復查，73例拒絕做腎活檢進行病理檢查，最終只有55例得到明確診斷。腎活檢為一種創(chuàng)傷性檢查方式，一般不被患者所接受。本研究結果表明，在應用THP免疫熒光染色法對30例腎性血尿及25例非腎性血尿的診斷中，THP免疫熒光染色法與腎活檢的符合率很高(93.3%和88%)，但此方法能否代替尿位相和部分代替腎活檢仍有待于今后大量臨床試驗證實。

正常人尿液中無紅細胞或偶見個別紅細胞，在明確診斷的25例非腎性血尿中，一過性血尿比例較高(25.4%)，此類患者尿中紅細胞常在一段時間后自動消失，無需臨床治療，可叮囑患者定期復查尿常規(guī)觀察病情進展。泌尿系統(tǒng)結石、腫瘤性血尿診斷相對簡單，而對于腎性血尿患者應引起足夠重視，以免延誤治療的最佳時機。

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Value of immunofluorescence staining of urine erythrocytes for Tamm-Horsfall protein in determining the origin of hematuria.

SONG Shi-ping1,WANG Miao1,DONG Lei2,AN Ying-hong2,QUAN Shou-zhen2,MA Hong-yu2.1.Department of Clinical Laboratory,the Affiliated Hospital of Academy of Military Medical Sciences,Beijing 100071, CHINA;2.Clinical Laboratory Center,PLA Air Force General Hospital,Beijing 100142,CHINA

ObjectiveTo investigate the clinical significance of immunofluorescence staining of urine erythrocytes for Tamm-Horsfall protein(THP)in determining the origin of hematuria,and to sum up the hematuria situation from 2004 to 2007 for understanding pathological distribution between renal hematuria and non-renal hematuria.MethodsUrine erythrocytes from 30 patients of glomerular hematuria and 25 patients of non-glomerular specimens were immunocytochemically stained with antibody against human Tamm-Horsfall protein.The results were compared with the pathological findings.ResultsAmong the 30 patients of glomerular hematuria according to pathological diagnosis,28 were confirmed by the immunofluorescence assay,with a coincidence rate of 93.3%.Among the 25 patients of non-renal hematuria according to pathological diagnosis,22 were confirmed by the immunofluorescence as-say,with a coincidence rate of 88%.Pathologic analysis showed IgA nephropathy in 16 of the patients with renal hematuria(16/30,53.3%),small glomerular lesions in 10 patients(10/30,33.3%),non-IgA nephropathy mesangial cell proliferative glomerulonephritis in 3 patients(3/30,10.0%)and focal sclerosing lomerulonephritis stage in 1 patients (1/30,3.3%).ConclusionImmunofluorescence staining of urine erythrocytes for THP are stable,accurate,objective and reliable for identifying the origin of hematuria,which provides the foundation of the early diagnosis and treatment of patients with hematuria.

Hematuria;Tamm-Horsfall protein;Immunofluorescence staining

R446.12

A

1003—6350(2013)01—0053—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2013.01.0022

2012-07-18)

首都醫(yī)學發(fā)展基金(編號：2009-2056)

馬紅雨。E-mail：mhy06052@163.com