付君鳴 張 莉 袁秋貞 陜西省中醫(yī)醫(yī)院藥劑科（西安710003）

百里香（Thymus quinpuecostatus）是唇形科的一種落葉亞灌木［1］。我國民間常用百里香治療腹痛、腹瀉、風(fēng)寒咳嗽、咽腫、牙痛、肌膚瘙癢、急性腸胃炎、慢性胃痛等疾病［2］。百里香酚具有抗菌、驅(qū)蟲作用以及能夠治療上呼吸道、消化道疾患和細(xì)菌、真菌引起的疾患［3］。為了合理開發(fā)利用這一珍貴的植物資源，本文采用單因素實(shí)驗(yàn)和正交實(shí)驗(yàn)方法，以超聲波作為輔助提取手段，對百里香中多酚類物質(zhì)的提取條件進(jìn)行了篩選，并對百里香中多酚類物質(zhì)的超聲波輔助提取工藝進(jìn)行了優(yōu)化，以期為百里香的可持續(xù)利用提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器與設(shè)備 SHB－3型循環(huán)水式多用真空泵，鄭州長城科工貿(mào)有限公司；FA1004N 型電子天平，上海精密科學(xué)儀器有限公司；FW－80型微型高速萬能試樣粉碎機(jī)，天津市泰斯特儀器有限公司；JY96－Ⅱ超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)，寧波新芝生物科技股份有限公司；UV－2550 型紫外－可見分光光度計(jì)，Shimadzu（Suzhou）Instruments Manufacturing，Co.，Ltd.

1.2 原料與試劑 百里香，購于咸陽市百姓樂大藥房；沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)品（批號：110831－200302，中國藥品生物制品鑒定所）；兒茶素標(biāo)準(zhǔn)品（批號：110878－201003，中國藥品生物制品鑒定所）；香蘭素、無水乙醇、Fecl3、K3Fe（CN）6、濃鹽酸等均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 檢測方法的確立 2.1.1 總多酚含量的測定：2.1.1.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：精確稱取沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)品10.0mg，用水溶解并定容至100mL，得0.1mg／mL的對照品標(biāo)準(zhǔn)溶液。用移液槍準(zhǔn)確吸取對照品溶液0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mL于25mL容量瓶中，依次加入0.5mL 0.1mol／L 氯化鐵溶液，0.5mL 0.008mol／L鐵氰化鉀溶液和0.5mL 0.1mol／L 鹽酸溶液，定容，搖勻后在699nm 處測吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，求線性回歸方程。

2.1.1.2 提取液中總多酚含量的測定：用移液槍準(zhǔn)確移取待測提取液0.5mL于25mL容量瓶中，依次加入 0.5mL 0.1mol／L 氯化鐵溶液，0.5mL 0.008mol／L鐵氰化鉀溶液和0.5mL 0.1mol／L 鹽酸溶液，定容，搖勻后在699nm 處測吸光度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線求得其濃度，并計(jì)算出總多酚含量，確定得率。

2.1.2 兒茶素含量的測定：2.1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：精確稱取兒茶素標(biāo)準(zhǔn)品5.0mg，用水溶解并定容至50mL，得0.1mg／mL 的對照品標(biāo)準(zhǔn)溶液。用移液槍準(zhǔn)確吸取對照樣品溶液0、0.4、0.8、1.2、1.6、2.0mL于10mL容量瓶中，用1%香草醛濃鹽酸溶液定容，搖勻靜置40min后在505nm 處測吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，求線性回歸方程。

2.1.2.2 提取液中兒茶素含量的測定：用移液槍準(zhǔn)確移取待測提取液0.5mL 于10mL 容量瓶中，用1%香草醛濃鹽酸溶液定容，搖勻靜置40min 后在505nm 處測吸光度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線求得其濃度，并計(jì)算出兒茶素含量，確定得率。

2.2 超聲提取工藝的優(yōu)化 2.2.1 超聲功率的影響：稱取5份2.000g百里香粉末放入燒杯中，加入體積分?jǐn)?shù)70%乙醇，料液比1∶20，分別在超聲功率為50W、100W、150W、200W、250W 進(jìn)行超聲輔助提取30min，將提取液抽濾，濾液定容，測定其中的總多酚及兒茶素含量，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖1所示，總多酚和兒茶素得率都在超聲功率為150W 時(shí)最大。此后繼續(xù)增大超聲功率，兩者的得率均減小，因此超聲功率選擇150W。

圖1 超聲功率對多酚得率的影響

2.2.2 乙醇體積分?jǐn)?shù)的影響：稱取5份2.000g百里香粉末放入燒杯中，按超聲功率150W，料液比1∶20，分別加入體積分?jǐn)?shù)60%、70%、80%、90%、100%乙醇，進(jìn)行超聲輔助提取30min，將提取液抽濾，濾液定容，測定其中的總多酚及兒茶素含量，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖2所示，總多酚和兒茶素得率分別在乙醇體積分?jǐn)?shù)70%和90%最大，根據(jù)百里香中多酚類物質(zhì)的理化性質(zhì)可知，總多酚中含有極性較大的酚酸類物質(zhì)，其極性平均來說要大于兒茶素，故乙醇體積分?jǐn)?shù)為90%時(shí)對兒茶素的提取最佳，而總多酚的量卻有所減少。另外較高體積分?jǐn)?shù)的乙醇能在得到較高提取率的同時(shí)減少提取物中蛋白質(zhì)、多糖等物質(zhì)的含量，對進(jìn)一步研究有利。因此總多酚和兒茶素都選擇90%的乙醇。

2.2.3 超聲時(shí)間的影響：稱取5份2.000g百里香粉末放入燒杯中，按乙醇體積分?jǐn)?shù)90%、超聲功率150W，料液比1∶20，分別進(jìn)行超聲輔助15min、20min、25min、30min、35min，將提取液抽濾，濾液定容，測定其中的總多酚及兒茶素含量，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖3所示，超聲時(shí)間對總多酚和兒茶素的影響都不大，且都在30min時(shí)得率最大，因此選擇超聲時(shí)間為30min。

圖2 乙醇體積分?jǐn)?shù)對多酚得率的影響

圖3 超聲時(shí)間對多酚得率的影響

2.2.4 料液比的影響：稱取5份2.000g百里香粉末放入燒杯中，按乙醇體積分?jǐn)?shù)90%、超聲功率150W，料液比分別為1∶15、1∶20、1∶25、1∶30、1∶35，進(jìn)行超聲輔助提取30min，將提取液抽濾，濾液定容，測定其中的總多酚及兒茶素含量，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖4所示，總多酚和兒茶素均在料液比1∶20時(shí)得率最好，此后繼續(xù)增加料液比，得率增加的趨勢不大，因此料液比選擇1∶20。

圖4 料液比對多酚得率的影響

3 結(jié) 論

本實(shí)驗(yàn)以百里香中總多酚和兒茶素的提取率為指標(biāo)，對超聲波輔助提取的工藝進(jìn)行了優(yōu)化。通過單因素實(shí)驗(yàn)確定百里香中總多酚提取工藝參數(shù)為：乙醇體積分?jǐn)?shù)90%，超聲功率150W，超聲時(shí)間30min，料液比1∶20。

［1］ 賀士元.河北植物志［M］.石家莊：河北科學(xué)技術(shù)出版社，1997：1471－1472.

［2］ 中科院植物所四室萜類組.五肋百里香精油研究［J］.植物學(xué)報(bào)，1978，20（1）：31－35.

［3］ 江蘇新醫(yī)學(xué)院.中藥大辭典（下冊）［M］.上海：上海人民出版社，1977.