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        不同釆收時(shí)期柚果中柚皮苷的含量研究*

        2013-07-20 03:17:52王志梅鄔偉魁廣東省梅州市食品藥品監(jiān)督檢驗(yàn)所梅州514071
        陜西中醫(yī) 2013年9期
        關(guān)鍵詞:皮苷柚皮苷項(xiàng)下

        謝 強(qiáng) 王志梅 鄔偉魁 楊 寶 廣東省梅州市食品藥品監(jiān)督檢驗(yàn)所(梅州514071)

        柚果為蕓香科植物柚Citrus grandis(L.)Osbeck的未成熟的干燥果實(shí),具有祛痰止咳、消腫止痛的功效,主治咳嗽咯痰、咽喉腫痛等[1],現(xiàn)行版中國藥典釆用柚的未成熟或近成熟的干燥外層果皮作為化橘紅藥材入藥[2]。本研究是在梅州市科技計(jì)劃項(xiàng)目基礎(chǔ)上,為充分利用資源、提高柚的附加值,對不同釆收時(shí)期柚果中主要有效成分柚皮苷的含量進(jìn)行了研究,該研究對柚果藥材質(zhì)量評價(jià)及柚果的有效開發(fā)利用具有重要的參考價(jià)值。

        1 儀器與試藥

        1.1 儀 器 AB204-N 型電子分析天平(十萬分之一,梅特勒-托利多公司);Agilent 1100高效液相色譜儀;Agilent ZORBAXBSB-C18色譜柱(250mm×4.6mm,5μm);KQ-250DE型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。

        1.2 試 藥 柚皮苷對照品(中國藥品生物制品檢定所,批號:110722-200610);甲醇為色譜純(美國TEDIA 天地試劑公司);冰醋酸為分析純(廣州化學(xué)試劑廠);水為雙蒸水。

        1.3 藥 材 實(shí)驗(yàn)所用柚果和柚皮樣品均釆自廣東省梅州市梅縣石扇,經(jīng)梅州市食品藥品監(jiān)督檢驗(yàn)所中藥室鑒定為蕓香科植物柚Citrus grandis(L.)Osbeck的未成熟的干燥果實(shí)或果皮。

        2 試驗(yàn)方法與結(jié)果

        2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 采用Agilent ZORBAXB SB-C18色譜柱;以甲醇-醋酸-水(35∶4∶61)流動相;柱溫為30℃;體積流量為1mL/min;檢測波長為283nm;進(jìn)樣量10μL。理論板數(shù)按柚皮苷峰計(jì)不低于1000,對照品與樣品的色譜圖見圖1。

        圖1 對照品(A)與樣品(B)的HPLC色譜圖(1:柚皮苷)

        2.2 對照品溶液的制備 精密稱取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥24h的柚皮苷對照品10.53mg,置50mL容量瓶中,加甲醇溶解并定容至刻度,搖勻,即得濃度為0.2106mg/mL的柚皮苷對照品溶液。

        2.3 供試品溶液的制備 取本品粉末(過三號篩)約0.1g,精密稱定,置150mL 的錐形瓶中,精密加入50%甲醇25mL,稱定重量,超聲處理30min,取出,放冷,稱定重量,用甲醇補(bǔ)足減失重量,搖勻,濾過,取濾液1mL,置10mL量瓶中,加50%甲醇稀釋至刻度,搖勻,濾過,即得。

        2.4 線性關(guān)系 分別精密吸取上述柚皮苷對照溶液1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0mL 置10mL 量瓶中,加50%甲醇稀釋至刻度,搖勻,得濃度為0.02106、0.04212、0.08424、0.12636、0.16848、0.2106mg/mL的柚皮苷對照品溶液。分別精密吸取上述對照品各10μL注入高效液相色譜儀中,測定。以柚皮苷濃度為橫坐標(biāo)、以峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得柚皮苷線性回歸方程y=16.934176x-2.469598,r=0.99996。結(jié)果表明,柚皮苷在21.06μg/mL~210.60μg/mL 范圍內(nèi)濃度與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

        2.5 精密度試驗(yàn) 精密吸取濃度為0.2106mg/mL的柚皮苷對照品溶液10μL,連續(xù)重復(fù)進(jìn)樣6 次,柚皮苷峰面積的RSD 為0.1%,表明儀器精密度良好。

        2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一份供試品溶液(批號:20090425),室溫放置,分別于0h、1h、2h、4h、8h、12h、24h按照2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測定,結(jié)果柚皮苷峰面積的RSD 為0.25%,表明供試品溶液在24h 內(nèi)穩(wěn)定。

        2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批號的柚果(批號:20090425)6份,按2.3項(xiàng)下方法制備供試品溶液,按照2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測定,結(jié)果柚皮苷峰面積的RSD 為0.25%,表明本方法重現(xiàn)性良好。

        2.8 回收率試驗(yàn) 精密稱取0.1g已知柚皮苷含量為22.74%的樣品6份,精密加入一定量的柚皮苷對照品,按2.3項(xiàng)下方法制備供試品溶液,按照2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測定,結(jié)果平均回收率為100.01%,RSD 為0.8%,表明本法回收率較好,方法可行。

        2.9 樣品含量測定 分別取采集到的樣品,按2.3項(xiàng)下方法制備供試品溶液,按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測定柚皮苷的含量,結(jié)果見表1。將柚皮苷的含量動態(tài)變化制成折線圖,見圖2。

        表1 柚果中柚皮苷含量測定結(jié)果

        從表1、圖2可以看出柚果中柚皮苷的含量隨著采收時(shí)間的增加呈顯著的下降趨勢,其中11月底采收的柚皮中柚皮苷的含量僅為4月份采收柚果的七十分之一。

        圖2 不同采收時(shí)間柚果中柚皮苷含量動態(tài)變化圖

        3 討 論

        本研究在文獻(xiàn)[3~5]的基礎(chǔ)上,對提取溶劑(甲醇、乙醇、50%甲醇、50%乙醇)、提取時(shí)間(15min、20min、30min、40min、60min)以及提取方式(超聲提取、索氏提?。┻M(jìn)行了比較,結(jié)果表明以50%甲醇作為提取溶劑、超聲提取30min效果最佳。

        本研究對不同時(shí)間釆收的柚中柚皮苷的含量趨勢進(jìn)行了擬合,得到回歸方程y=1289x-2.74,r=0.9524,模型顯著,如圖2所示。柚皮苷總量=柚皮苷含量×柚果重量,從上述方程可以看出柚皮苷含量與采收時(shí)間呈負(fù)相關(guān),而柚果重量與采收時(shí)間呈正相關(guān)。柚果在我國廣東、四川、浙江等省份均有大面積種植,在每年5月份果農(nóng)選果時(shí),大量被采摘下來后遺棄,造成資源的浪費(fèi),而此時(shí)柚果中柚皮苷含量較高,柚果重量也較佳。筆者認(rèn)為對柚這一資源進(jìn)行研究、合理利用廢棄柚果,對于提高柚的附加值具有重要意義。

        有報(bào)道[6]建議將柚果作為化橘紅的一個(gè)來源,筆者認(rèn)為現(xiàn)行版中國藥典中化橘紅的入藥部位為柚皮,且規(guī)定柚皮苷不少于3.5%,而柚果是以全果入藥,柚皮苷的含量為柚皮的數(shù)倍,采收時(shí)間不同柚皮苷的含量差異較大,能否用廢棄的柚果代替化橘紅入藥、入藥后的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)如何制定以及用藥劑量是否要減小等問題,還有待于進(jìn)一步的研究。

        本文的研究顯示5月份遺棄的柚果中柚皮苷的含量在10%左右,將其有效成分柚皮苷進(jìn)行提取、分離[7],或?qū)⒉皇樘岣哔Y源利用率的一個(gè)好辦法。

        柚果中柚皮苷的含量隨著采收時(shí)間的增加而下降趨勢,而柚的味道從原來的青澀變得甘甜[8],可能的原因是,柚果中同時(shí)存在著柚皮苷和柚皮苷酶,柚皮苷為苦味劑,味道苦澀,而隨著時(shí)間的推移柚皮苷酶將柚皮苷酶解為具有苦味的柚皮素即苷元和具有甜味的糖[9-10]。這也是藥典中化橘紅炮制“置沸水中略燙后……干燥”的原因——?dú)⒚副\铡?/p>

        [1] 江蘇新醫(yī)學(xué)院.中藥大辭典(下冊)[M].上海:上??萍汲霭嫔?,1977:1504-1505.

        [2] 國家藥典委員會.中國藥典[S].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2010:69.

        [3] 劉群娣,徐新軍,謝春燕,等.2010年版《中國藥典》化橘紅含量測定方法的商榷[J].中國藥品標(biāo)準(zhǔn),2011,12(6):442.

        [4] 陳永剛,林 勵(lì),魏燕華,等.超聲波提取法與索氏提取法提取化橘紅柚皮苷的比較研究[J].中藥新藥與臨床藥理,2008,19(4):309.

        [5] 陳永剛,劉曉涵,林 勵(lì),等.超聲波提取法提取化橘紅中黃酮類物質(zhì)的工藝優(yōu)選[J].中藥材,2009,32(1):138.

        [6] 張 婷,毛新亮,郭曉蕾,等.高效液相色譜法測定不同大小柚果中柚皮苷的含量[J].中南藥學(xué),2010,8(11):841.

        [7] 龐 瑞,楊中林.不同產(chǎn)地不同品種柚皮中總黃酮和柚皮苷的含量比較[J].藥學(xué)與臨床研究,2007,15(3):207.

        [8] 楊 爽,邊清泉,王 勁,等.柚果中柚皮苷含量與果實(shí)苦味相關(guān)性研究[J].四川大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版),2007,44(5):1138.

        [9] 王鴻飛,李和生,董明敏,等.柚皮苷酶對柑橘類果汁脫苦效果的研究[J].農(nóng)業(yè)工程報(bào),2004,20(6):174-177.

        [10] 鄭美瑜,陸勝民,陳劍兵,等.糖苷酶對橙皮苷和柚皮苷的酶解作用研究[J].中國食品學(xué)報(bào),2010,10(4):141-145.

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