沈東海，高春芳，劉春霞

近年國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)蝎毒的抗腫瘤作用進(jìn)行了廣泛的研究，其對(duì)人類多種腫瘤細(xì)胞株的抑制作用和改善人體免疫狀況作用已被證實(shí)[1-4]，但由于蝎毒是由多種特性不同的毒素組成，直接應(yīng)用不良反應(yīng)較大，而目前對(duì)蝎毒的研究主要集中在7000分子量以上成分的研究，且多經(jīng)注射途徑，仍有較大的不良反應(yīng)。純化蝎毒抗癌多肽（APBMV）經(jīng)腹腔注射可迅速擴(kuò)散至全身（不通過(guò)血腦屏障），其半數(shù)致死量（LD50）為 4~8 mg/kg，但灌胃劑量>100 mg/kg 未見(jiàn)任何中毒癥狀。筆者等也已對(duì)蝎毒的抗腫瘤作用進(jìn)行了10余年的研究，從東亞鉗蝎蝎毒毒素中提取、分離、篩選出了抗腫瘤的有效成分APBMV（分子量<3500）。本研究主要觀察純化的APBMV （分子量<3500）灌胃對(duì)小鼠肝癌動(dòng)物移植瘤的抑制作用，以期對(duì)為進(jìn)一步得到純化的蝎毒抗腫瘤的有效成分和對(duì)口服APMBV可行性提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物及分組 昆明種小鼠40只，雌雄各半，體重（20±2）g，由解放軍150醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。按APBMV （分子量<3500）和對(duì)照藥品共分4組。APBMV系由河南東亞鉗蝎蝎毒中分離，由華美公司協(xié)助分離提供，經(jīng)冷凍干燥后-20℃保存，臨用前生理鹽水配制成所需濃度。環(huán)磷酰胺為常用的化療藥物。另設(shè)陽(yáng)性和空白對(duì)照組。

1．2 方法

1．2．1 帶瘤動(dòng)物的移植和接種[5]取傳代6～7 d的H22帶瘤小鼠，無(wú)菌抽取乳白色的腹水，2 g/L臺(tái)盼藍(lán)染色鏡檢細(xì)胞活力在95%以上，以無(wú)菌生理鹽水稀釋至細(xì)胞濃度1.0×107/ml的懸液，每只小鼠右側(cè)腋部皮下接種0.2 ml。

1．2．2 實(shí)驗(yàn)方法 接種腫瘤24 h后，分別給予相應(yīng)藥物和劑量灌胃，環(huán)磷酰胺0.2 mg/20 g，腹腔注射，1次/d，連續(xù)給藥10 d，所有帶瘤小鼠均于末次給藥后次日頸椎脫臼致死，解剖腫瘤，按下列公式計(jì)算抑瘤率（%）：抑瘤率（%）=（1-治療組瘤重/陽(yáng)性對(duì)照組瘤重）×100%。

1．3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SAS6.12統(tǒng)計(jì)軟件行方差分析檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

APBMV（分子量<3500）對(duì)小鼠H22轉(zhuǎn)移瘤的生長(zhǎng)抑制情況如表1所示。

表 1 APBMV對(duì)H22轉(zhuǎn)移瘤的生長(zhǎng)抑制

從表1可以看出，APBMV（分子量<3500）對(duì)H22轉(zhuǎn)移瘤有明顯的生長(zhǎng)抑制作用，瘤重明顯降低，抑瘤率達(dá)60%以上，且各劑量組之間有顯著性量效關(guān)系，對(duì)H22有良好的實(shí)驗(yàn)療效。APBMV可以明顯延長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的生存期，APBMV組動(dòng)物未有死亡。

3 討 論

由于移植性動(dòng)物腫瘤模型能夠在實(shí)驗(yàn)室條件下在同一時(shí)間內(nèi)制造出比較接近的、一定數(shù)量的帶瘤動(dòng)物用于進(jìn)行藥物篩選，因此動(dòng)物移植性腫瘤模型是篩選和研究抗腫瘤藥物的常用及重要的實(shí)驗(yàn)手段。蝎毒具有對(duì)人類多種腫瘤細(xì)胞的抑制作用，并可改善人體的免疫機(jī)能，但由于蝎毒為一種具有多種生物活性的混合物，直接應(yīng)用不良反應(yīng)較大，且目前所有實(shí)驗(yàn)均為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物腹腔注射，不良反應(yīng)也較大，全東琴等[7]將蝎毒提取液直接制成脂質(zhì)體前體，對(duì)口服給藥的藥效、制劑穩(wěn)定性及制劑藥物含量、包裝率進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明蝎毒脂質(zhì)體前體制劑口服有效?？诜┝? mg/kg與腹腔注射2 mg/kg相當(dāng)，脂質(zhì)對(duì)藥物包裹率可達(dá)54.0%，制劑比較穩(wěn)定。本實(shí)驗(yàn)采用篩選藥物常用的H22動(dòng)物模型，其接種動(dòng)物為昆明小鼠，經(jīng)實(shí)驗(yàn)性藥物（APBMV，分子量<3500）治療10 d后，結(jié)果發(fā)現(xiàn)APBMV（分子量<3500）對(duì)H22有明顯的抑制作用，且有顯著性量效關(guān)系，其中大劑量組抑瘤率>50%。環(huán)磷酰胺是臨床上治療腫瘤的常用藥物，也是本實(shí)驗(yàn)選用的陽(yáng)性對(duì)照藥物，實(shí)驗(yàn)表明環(huán)磷酰胺對(duì)H22具有顯著的抑制作用，作用略強(qiáng)于APBMV（分子量<3500）高劑量組，但無(wú)顯著性差異，與以前蝎毒腹腔注射治療實(shí)驗(yàn)結(jié)果相似。其他學(xué)者也證明APMBV除了對(duì)腫瘤細(xì)胞有直接抑殺作用外，對(duì)機(jī)體功能具有調(diào)節(jié)作用，可以提高機(jī)體的免疫功能，保護(hù)和增強(qiáng)造血機(jī)能，改善機(jī)體一般狀況的作用。筆者等以前的研究表明APMBV對(duì)大腸癌的抑制作用大于氟脲嘧啶 （5-FU），APBMV（分子量<3500）是筆者等首次從蝎毒中提取、篩選出的純度較高的具有較高的抗癌活性的一種多肽物質(zhì)，本實(shí)驗(yàn)再次證明其具有明顯的抗癌活性，且證明口服蝎毒同樣可以抑制腫瘤生長(zhǎng)，說(shuō)明蝎毒抗癌有效成分主要集中在分子量<3500的成分中，也說(shuō)明蝎毒抗癌的這種成分中是從APMBV中分離得到的純化度更高、抑制腫瘤作用更強(qiáng)的有效成分，也說(shuō)明口服蝎毒是可行的，為今后分離到純度更高、抑制腫瘤作用更強(qiáng)的有效成分和蝎毒藥物劑型的研制奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

[1]董偉華，藏夢(mèng)維，孔天翰，等.蝎毒組分對(duì)人喉癌細(xì)胞毒性的研究[J]. 中國(guó)醫(yī)藥學(xué)報(bào)，1994，9（4）：9.

[2]董偉華，藏夢(mèng)維，孔天翰，等. 河南馬氏鉗蝎毒素對(duì)Eca109細(xì)胞殺傷及生長(zhǎng)抑制作用[J].中國(guó)病理生理雜志，1995，11（3）：125.

[3]董偉華，孔天翰，韓雪飛，等.蝎毒抗癌多肽對(duì)4種人腫瘤細(xì)胞系的作用[J]. 河南醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，1999，34（1）：52.

[4]楊志華，肖桂元，楊卓平，等.蝎毒復(fù)合膠囊并放療治療中晚期腫瘤患者的臨床研究[J].河南醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，20000，34（4）：294.

[5]韓 銳.抗癌藥物研究與實(shí)驗(yàn)技術(shù)[M].北京：北京醫(yī)科大學(xué)-中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)聯(lián)合出版社，1997.295.

[6]魏 東，王元和，高春芳，等.東亞鉗蝎灌腸治療大腸癌前后腫瘤組織中 DNA 參數(shù)的變化[J]. 腫瘤，1997，17（6）：458.

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