全利國，姜學(xué)東，王 瓊，吳延波，張其剛

胸腺瘤的良惡性等生物學(xué)特性與其他腫瘤相比有一定特殊性，其臨床分期和病理分型方法隨年代發(fā)展不斷變化，不同病理分型依據(jù)不同，對臨床指導(dǎo)意義也不相同。1999 年WHO 提出的胸腺瘤病理分型標(biāo)準(zhǔn)為臨床和病理診斷提供了新的基礎(chǔ)。本研究應(yīng)用免疫組化方法檢測上皮膜抗原(epithelial membrane antigen，EMA)和Ki67 在不同病理分型和臨床分期中的表達(dá)狀況，探討胸腺瘤的生物學(xué)特性及在診斷治療中的應(yīng)用。

1 對象與方法

1.1 對象 收集中國醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院胸外科和武警遼寧總隊醫(yī)院胸外科2000－01 至2012－12 間手術(shù)切除的胸腺瘤患者共109 例，其中，男64例(58.7%)，女45 例(41.3%)，年齡22 ～72 歲，平均(55.62 ±5.47)歲。全部病例均行手術(shù)治療，腫瘤完整切除87 例(79. 8%)，部分切除20 例(18.4%)，單純探查2 例(l.8%)。

1.2 分組 按Masaoka 等［1］提出的標(biāo)準(zhǔn)，臨床分期Ⅰ期32 例(29.4%)，Ⅱa 期26 例(23.9%)，Ⅱb 期23 例(21.1%)，Ⅲ期23 例(21. 1%)，Ⅳa 期5 例(4.5%)，Ⅳb 期0 例(0%)。按WHO 病理分型［2］，A 型22 例(20.2%)，AB 型11 例(10.1%)，B1型20 例(18.3%)，B2型29 例(26.6%)，B3型19 例(17.5%)，C 型8 例(7 .3%)。所有手術(shù)切除標(biāo)本均常規(guī)固定，石蠟包埋，4 μm 連續(xù)切片備染。

1.3 方法 鼠抗人抗EMA 和Ki67 單克隆抗體購自DAKO 公司，SP 試劑盒購自北京中山生物技術(shù)有限公司，按說明書進(jìn)行免疫組化染色，DAB 染色，蘇木精復(fù)染，PBS 做陰性對照，已知陽性組織片做陽性對照。結(jié)果判斷，EMA 表達(dá)于細(xì)胞膜呈黃褐色，隨機(jī)觀察5 個高倍視野，根據(jù)細(xì)胞陽性著色程度，淡黃色顆粒為弱陽性(+)，1 分;棕黃色顆粒為中等陽性(+ +)，2 分;褐黃色為強(qiáng)陽性(+ + +)，3 分。計數(shù)視野內(nèi)100 個細(xì)胞中，陽性細(xì)胞所占比例，分為25%以下，25% ～49%和50%以上。采用積分綜合計量，公式為:(+)% ×1 +(+ +)% ×2 +(+ ++)% ×3，總數(shù)值＜1.0 為(+);1.0 ～1.5 為(++);＞1.5 為(+ + +)。Ki67 表達(dá)于細(xì)胞核呈棕黑色，隨機(jī)觀察5 個高倍視野，計數(shù)1000 個細(xì)胞中陽性細(xì)胞數(shù)值，以百分?jǐn)?shù)表示，Ⅰ級，＜25%;Ⅱ級，25% ～＜50%;Ⅲ級，50% ～＜75%;Ⅳ級，≥75%。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 所得數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS10.0 統(tǒng)計軟件，計數(shù)資料采用χ2分析，計量資料采用成組t 檢驗，P ＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 臨床分期 不同分期胸腺瘤EMA 陽性表達(dá)率基本相同，隨著分期升高，表達(dá)強(qiáng)度增加，Ⅰ期和Ⅱ期間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義，但分別與Ⅲ期和Ⅳ期相比，有統(tǒng)計學(xué)差異(P ＜0.01)。同樣，隨著分期升高，胸腺瘤Ki67 指數(shù)分級逐漸升高，Ⅰ期和Ⅱ期間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義，但分別與Ⅲ期和Ⅳ期相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P ＜0.01)。見表1。

表1 EMA 及Ki67 在不同Masaoka臨床分期胸腺瘤中的表達(dá)狀況

2.2 病理分型 WHO 病理分型不同的胸腺瘤，EMA 陽性表達(dá)率無統(tǒng)計學(xué)差異，但從A 到C 型，表達(dá)強(qiáng)度逐漸增強(qiáng)，A、AB 和B1間無差異，但分別與B2、B3和C 型相比，后三型表達(dá)更強(qiáng)，差異有極顯著意義(P ＜0.01)。Ki67 指數(shù)，從A 到C 型逐漸升高，B2、B3和C 型升高更明顯，與A、AB 和B1型相比，差異有極顯著意義(P ＜0.01)。見表2。

表2 EMA 及Ki67 在不同WHO 病理分型胸腺瘤中的表達(dá)狀況

3 討論

胸腺瘤是起源于胸腺上皮的腫瘤，由于其含有不同分化程度的淋巴細(xì)胞，胸腺組織的解剖特點，其良惡性判定需結(jié)合術(shù)者肉眼所見和病理結(jié)果。近年來，Masaoka 臨床分期和WHO 病理分型相結(jié)合已廣泛應(yīng)用于判定胸腺瘤良惡性和預(yù)后的臨床實踐中。本研究應(yīng)用了EMA 和Ki67 兩種單克隆抗體，對不同臨床分期和病理分型的胸腺瘤標(biāo)本進(jìn)行免疫組化染色，探討EMA 蛋白和Ki67 抗原的表達(dá)程度與胸腺瘤生物學(xué)特性和預(yù)后的相關(guān)性，為術(shù)后輔助治療手段提供依據(jù)。

EMA 為上皮膜抗原，是指從人乳脂小球膜上分離的糖蛋白總稱，主要定位在細(xì)胞膜上，分布于各類型正常上皮組織細(xì)胞，當(dāng)上皮細(xì)胞發(fā)生腫瘤時其含量及表達(dá)增加，并與腫瘤分化程度相關(guān)，目前已作為上皮性腫瘤分化的可靠標(biāo)記物［3，4］。Ki67 抗原是腫瘤細(xì)胞中增殖基因表達(dá)的一種核蛋白，存在于增殖期的細(xì)胞中，從G1中晚期開始表達(dá)，M 期達(dá)到高峰，有絲分裂后迅速降解，而在G0期不表達(dá)，由于其半衰期較短，已成為目前最為可靠反應(yīng)腫瘤細(xì)胞增殖活性的重要指標(biāo)之一。Ki67 抗原的染色指數(shù)與某些惡性腫瘤分級、分化和預(yù)后相關(guān)，染色指數(shù)越高，腫瘤的惡性程度越高，分化和預(yù)后越差。有研究報道Ki67 抗原過量表達(dá)與膽管癌、胃癌、大腸癌、涎腺癌等惡性腫瘤的惡性生物學(xué)行為和預(yù)后密切相關(guān)［5，6］。

本研究結(jié)果顯示，在Masaoka 臨床分期方面，Ⅰ期和Ⅱ期之間EMA 和Ki67 兩種抗體的表達(dá)無統(tǒng)計學(xué)差異，但分別與Ⅲ期和Ⅳ期相比，兩種抗體的表達(dá)均有明顯差異，后者兩抗體表達(dá)均明顯增強(qiáng)。在WHO 病理分型方面，A、AB 和B1 三型之間，EMA和Ki67 兩種抗體表達(dá)程度無統(tǒng)計學(xué)差異，但分別與B2、B3和C 三型相比，均有明顯差異，后三者中兩種抗體表達(dá)均明顯增強(qiáng)。B2和B3兩型之間表達(dá)無差異，但分別與C 型相比，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義，C 型兩抗體表達(dá)更強(qiáng)。本實驗結(jié)果提示，Masaoka 臨床分期從Ⅱb，或Ⅲ期開始的胸腺瘤可能更早具有侵襲性或惡性傾向。WHO 病理分型B2型胸腺瘤開始可能更具有侵襲性或惡性傾向，與文獻(xiàn)［7，8］研究結(jié)果相一致。筆者認(rèn)為，對于Ⅰ期和Ⅱ期，A、AB 和B1型胸腺瘤，術(shù)中完整切除，術(shù)后是否做放療或化療值得商榷，但對于Ⅱb 期以上和B1型以上的胸腺瘤，術(shù)中應(yīng)盡量做到適當(dāng)擴(kuò)大切除，而且考慮到具有惡性增殖的可能，無論術(shù)中胸腺瘤病灶是否完整切除，術(shù)后都應(yīng)補(bǔ)充進(jìn)行放療或化療。

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