許煜靜，張慶偉，彭秋燕，李翔宇，郝 旖，楊金榮

（天津醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，天津市臨床藥物關(guān)鍵技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗室，天津300070）

格列齊特為第二代磺酰脲類口服降糖藥，主要作用于胰島β細(xì)胞，能顯著地降低血糖水平,恢復(fù)胰島素生理性的分泌模式，并通過提高胰島素對靶組織的敏感性，改善胰島素抵抗[1-3]。緩釋微丸膠囊是一種新劑型，屬劑量分散型劑型,與單劑量劑型相比，能夠迅速分布于整個胃腸道，使生物利用度提高并減小局部刺激，提高患者服藥的依從性[4]。中國藥典2010年版二部收錄了格列齊特片（規(guī)格為80 mg/片）的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，未收錄格列齊特緩釋制劑。本文參考中國藥典2010年版二部格列齊特片的含量測定和有關(guān)物質(zhì)測定方法[5]，色譜條件優(yōu)化后應(yīng)用于格列齊特緩釋膠囊含量和有關(guān)物質(zhì)的測定，結(jié)果表明該方法專屬性強(qiáng)，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可有效控制藥品質(zhì)量。

1 材料與方法

1.1 儀器與試藥

1.1.1 儀器 美國Waters公司2487雙波長紫外檢測器高效液相色譜儀，色譜柱Eclipse XDB-C8（4.6×150 mm，5 μm，Agilent公司）。

1.1.2 試藥 格列齊特原料藥（寧波利民康藥業(yè)有限公司，批號201101），格列齊特對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號201004），1-（3-氮雜雙環(huán)[3.3.0]辛基）-3-鄰甲苯磺酰脲（格列齊特雜質(zhì)Ⅰ，中國食品藥品檢定研究院，批號201101），格列齊特緩釋膠囊（3批，自制，批號 20120401，21020404，20120406），乙腈、三氟乙酸（色譜純，J&K Scientific LTD），三乙胺（分析純，J&K Scientific LTD）。

1.2 方法

1.2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性實(shí)驗 色譜柱E－clipse XDB-C8（4.6×150 mm，5 μm），柱溫 35 ℃，流動相乙腈-水-三乙胺-三氟乙酸（39∶61∶0.1∶0.1），流速 1.0 mL·min-1，進(jìn)樣量 20 μL，檢測波長 235 nm。分別精密量取格列齊特供試品和格列齊特雜質(zhì)Ⅰ對照品適量，用40%乙腈溶液配制成含格列齊特0.2 μg·mL-1和格列齊特雜質(zhì)Ⅰ0.3 μg·mL-1的溶液，作為系統(tǒng)適應(yīng)性試驗溶液。取該溶液20 μL進(jìn)樣，在該色譜條件下，理論塔板數(shù)按格列齊特主峰計算不低于3000，格列齊特色譜峰與格列齊特雜質(zhì)Ⅰ色譜峰的分離度應(yīng)符合要求。

1.2.2 溶液的制備

1.2.2.1 供試品溶液Ⅰ：取本品內(nèi)容物研細(xì)，精密稱取粉末適量（約相當(dāng)于格列齊特100 mg），置100 mL量瓶中，加乙腈40 mL，超聲溶解15 min，加水稀釋至刻度，搖勻，濾過，續(xù)濾液作為供試品溶液Ⅰ。

1.2.2.2 自身對照溶液：精密量取供試品溶液Ⅰ2mL，置100mL量瓶中，用40%乙腈溶液稀釋至刻度，搖勻，精密量取5 mL，置50 mL量瓶中，在40%乙腈溶液稀釋至刻度，搖勻，作為自身對照溶液。

1.2.2.3 供試品溶液Ⅱ：精密量取供試品溶液Ⅰ5mL，置25mL量瓶中，用40%乙腈溶液稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液Ⅱ。

1.2.2.4 對照品溶液：精密稱取格列齊特對照品約20 mg，置100 mL量瓶中，加乙腈40 mL，超聲溶解后，加水稀釋至刻度，搖勻。

1.2.3 專屬性考察

1.2.3.1 空白輔料干擾試驗：稱取格列齊特緩釋膠囊全輔料適量，照1.2.2.1項下方法配制，在上述色譜條件下進(jìn)樣20 μL，記錄色譜圖。另分別精密量取供試品溶液Ⅱ和對照品溶液進(jìn)樣，記錄色譜圖。

1.2.3.2 破壞性試驗：（1）酸破壞：稱取相當(dāng)于格列齊特100 mg的供試品粉末，置于100 mL量瓶中，加入0.01 mol·L-1的鹽酸10 mL，在80℃水浴中加熱30 min后，冷卻，酸破壞溶液用0.1 mol·L-1的氫氧化鈉溶液調(diào)至中性。（2）堿破壞：稱取相當(dāng)于格列齊特100 mg的供試品粉末，置于100 mL量瓶中，加入0.1 mol·L-1的氫氧化鈉溶液10 mL，在100℃水浴中60 min后，冷卻，用0.1 mol·L-1的鹽酸調(diào)節(jié)至中性。（3）氧化破壞：稱取相當(dāng)于格列齊特100 mg的供試品粉末，置于100 mL量瓶中，加入0.3%的雙氧水10 mL后，在80℃水浴中30 min后，冷卻。

上述酸、堿、氧化破壞溶液，照1.2.2.1項下“加乙腈40 mL……”起，制備供試溶液，取20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖。

1.2.4 線性關(guān)系和范圍 精密稱取格列齊特對照品100.0 mg，同1.2.2.4項下配制方法，配制成1.00 mg·mL-1儲備液。精密量取對照品溶液儲備液2.0、3.5、5.0、6.5和8.0 mL用40%乙腈溶液稀釋至25 mL，搖勻，在上述色譜條件下進(jìn)樣20 μL，測定峰面積，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.2.5 精密度 取濃度約為200 μg·mL-1的供試品溶液連續(xù)進(jìn)樣6次，每次20 μL，測定精密度。

1.2.6 回收率測定 分別精密稱取格列齊特80、100和120 mg，置100 mL量瓶中，用40 mL乙腈超聲溶解，再分別加入相當(dāng)于100 mg處方量的輔料粉末，加水稀釋至刻度，搖勻。分別移取5 mL，置25 mL量瓶中，用40%乙腈溶液稀釋至刻度，搖勻。過濾后分別進(jìn)樣20 μL，記錄峰面積，計算回收率。

1.2.7 穩(wěn)定性考察

1.2.7.1 含量測定穩(wěn)定性考察：取供試品溶液Ⅱ，室溫放置，分別于 0、2、4、6、8、24h 時進(jìn)樣，記錄色譜圖。

1.2.7.2 有關(guān)物質(zhì)穩(wěn)定性考察：取供試品溶液Ⅰ，室溫放置，分別于 0、2、4、6、8、24h 時進(jìn)樣，記錄色譜圖。

1.2.8 檢測限 取自身對照溶液作為儲備液，逐步稀釋，在上述色譜條件進(jìn)樣20 μL，測定檢測限。

1.2.9 含量測定 取樣品3批，照1.2.2.3項下方法制備，并取對照品溶液，在上述色譜條件下分別進(jìn)樣20 μL，測定峰面積。用外標(biāo)法計算含量。本品含格列齊特應(yīng)為標(biāo)示量的93%~107%[5]。

1.2.10 有關(guān)物質(zhì)測定 取樣品3批，照1.2.2項下供試品溶液Ⅰ和自身對照溶液配制方法制備，分別進(jìn)樣20 μL，以外標(biāo)峰面積不加校正因子主成分自身對照法計算有關(guān)物質(zhì)相對含量。單個雜質(zhì)峰面積不得大于自身對照溶液主峰面積，各雜質(zhì)峰面積的和不得大于自身對照溶液主峰面積的2倍[5]。

2 結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 系統(tǒng)適用性試驗結(jié)果表明，在1.2.1項色譜條件下，格列齊特色譜峰與格列齊特雜質(zhì)Ⅰ色譜峰的分離度為1.98。見圖1。

2.2 專屬性考察

2.2.1 空白輔料干擾試驗 結(jié)果表明，空白輔料不干擾格列齊特的測定。見圖2。

2.2.2 破壞性試驗 樣品溶液的酸、堿、氧化破壞色譜圖與未破壞圖比較，結(jié)果顯示，各條件下的降解產(chǎn)物和本品主峰均能達(dá)到完全分離。

圖1 系統(tǒng)適用性實(shí)驗（1格列齊特，2格列齊特雜質(zhì)Ⅰ）

圖2 空白輔料干擾試驗結(jié)果（1格列齊特）

圖3 破壞性試驗結(jié)果（1格列齊特）

2.3 線性關(guān)系和范圍 以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為y=44846x+134539，相關(guān)系數(shù)r=0.9998，結(jié)果表明格列齊特在80.08~320.32 μg·mL-1濃度范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好。

2.4 精密度 精密度考察結(jié)果的RSD值為0.10%（n=6），表明精密度良好。

2.5 回收率 格列齊特的回收率為100.37%，RSD為0.54%，符合方法學(xué)要求。見表1。

2.6 穩(wěn)定性

2.6.1 含量測定穩(wěn)定性 格列齊特峰面積RSD值為1.01%，表明格列齊特在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.6.2 有關(guān)物質(zhì)穩(wěn)定性 結(jié)果顯示總雜質(zhì)峰面積在0~6 h內(nèi)RSD<2%，6 h后RSD>2%，因此在有關(guān)物質(zhì)檢查時樣品溶液應(yīng)臨用現(xiàn)配，不能超過6 h。

表1 含量測定的回收率考察結(jié)果

2.7 檢測限 經(jīng)過多次稀釋，格列齊特的檢出限為8.76 ng。

2.7 樣品含量測定和有關(guān)物質(zhì)測定 樣品含量和有關(guān)物質(zhì)測定結(jié)果見表2。

表2 格列齊特含量和有關(guān)物質(zhì)測定結(jié)果

3 討論

3.1 有關(guān)物質(zhì)測定的方法學(xué)研究中，總雜質(zhì)在6 h內(nèi)基本穩(wěn)定，雜質(zhì)峰以格列齊特雜質(zhì)Ⅰ變化最為明顯，但6 h內(nèi)均未超過0.2%的限量，可以認(rèn)為基本穩(wěn)定。因此采用本方法測定格列齊特緩釋膠囊的有關(guān)物質(zhì)時，樣品溶液需臨用現(xiàn)配。

3.2 在酸、堿、氧化破壞實(shí)驗過程中發(fā)現(xiàn)格列齊特經(jīng)過同樣濃度酸、堿破壞后，在堿性溶液中較穩(wěn)定，在酸性溶液中不穩(wěn)定，主成分峰減小太多；氧化條件劇烈時，主峰甚至消失，失去破壞性試驗意義，提示本品易氧化分解。本文調(diào)整鹽酸的濃度至0.01 mol·L-1和雙氧水濃度至0.3%時，使其適度降解（10%～20%），主峰與降解物或降解物間分離度良好；通過試驗發(fā)現(xiàn)加熱破壞的程度遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于酸、堿、氧化破壞的程度。

［1］吳德云，陳明衛(wèi).格列齊特緩釋片對胰島素抵抗和胰島β細(xì)胞功能的影響[J].實(shí)用糖尿病雜志，2009，1（2）:37

［2］丁平，查偉.格列齊特緩釋片治療2型糖尿病的臨床研究近況[J].實(shí)用中西醫(yī)結(jié)合臨床，2007,7（5）:92

［3］蘇紅麗.格列齊特緩釋片治療老年2型糖尿病的療效與安全性觀察[J].中國現(xiàn)代藥物應(yīng)用，2012,6（2）:48

［4］張蓉，方瑜，曹德英.格列齊特緩釋微丸膠囊的制備及體外釋放度考察[J].制劑技術(shù)，2006,15（10）:27

［5］國家藥典委員會.中國藥典[S].二部.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010:810-811