余曉峰

（河南省許昌市中醫(yī)院，河南 許昌 461000）

復(fù)方丹參滴丸中丹參素的含量測定

余曉峰

（河南省許昌市中醫(yī)院，河南 許昌 461000）

目的建立高效液相法（HPLC）測定復(fù)方丹參滴丸中丹參素含量的方法。方法色譜柱為Nucleosil C18色譜柱（250×4.6mm，10μm），以甲醇-水-冰醋酸(21∶78∶1.0)為流動相；柱溫為室溫；流速為0.9 mL/min；檢測波長為280 nm。結(jié)果丹參素對照品在0.01～0.10mg/mL范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系（r=0.997，n=5），回歸方程為A=17371C+3500，平均回收率為100.15%，RSD為4.19%，所測復(fù)方丹參滴丸中丹參素的平均含量為8.034mg/g，符合2010版藥典對其含量的要求。結(jié)論HPLC測定復(fù)方丹參滴丸中丹參素含量的方法操作流程簡單、快速，準(zhǔn)確度高，建議在復(fù)方丹參滴丸的質(zhì)量監(jiān)控中大力推廣使用。

復(fù)方丹參滴丸；HPLC；丹參素；含量測定

復(fù)方丹參滴丸是一種棕色圓珠形滴丸，氣香，味稍苦，臨床上其主要作用是活血化瘀、理氣止痛，用于治療胸中憋悶和心絞痛等[1]。經(jīng)毒理研究證明，復(fù)方丹參滴丸是一種無毒性的中藥劑型，在臨床上治療中幾乎不會產(chǎn)生不良反應(yīng)[2]。復(fù)方丹參滴丸是唯一被美國食品藥品安全監(jiān)督管理局審核通過的中藥產(chǎn)品，其生產(chǎn)核心技術(shù)應(yīng)用與研發(fā)成為業(yè)內(nèi)企業(yè)關(guān)注的重點。復(fù)方丹參滴丸的主要成分為丹參素、原兒茶醛和丹酚酸B，據(jù)研究丹參素是復(fù)方丹參滴丸發(fā)揮藥理作用的主要有效成分[3]，本文采用了HPLC法測定復(fù)方丹參滴丸中丹參素的含量，操作流程簡便易懂，結(jié)果準(zhǔn)確性高，現(xiàn)將操作步驟總結(jié)如下，以期為臨床上丹參滴丸的質(zhì)量控制提供參考依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

P200Ⅱ型高效液相色譜儀（大連依利特科學(xué)儀器有限公司）、20μL定量進樣環(huán)、UV-3900（日本日立），UV-200Ⅱ型紫外-可變波長檢測器、EC2000色譜數(shù)據(jù)處理工作站、KQ-400DB型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）、電子天平。

1.2 試藥

復(fù)方丹參滴丸（天津天士力制藥股份有限公司）、丹參素對照品（中國藥品生物制品檢定所提供，批號：100018-200908）、甲醇為色譜純、冰醋酸為色譜純、水為蒸餾水、其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱為Nucleosil C18色譜柱（250×4.6mm，10μm），以甲醇-水-冰醋酸(21∶78∶1.0)為流動相（通過文獻(xiàn)和預(yù)試驗進行色譜條件的優(yōu)化）。流速為0.9mL/min，20μL定量管進樣，柱溫為室溫[4]。理論板數(shù)按照丹參素峰計算應(yīng)不低于1200。

檢測波長的確定：取2.2.1的對照品溶液進行紫外全波長掃描確定丹參素的最大吸收波長為280nm。

2.2 供試液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備

精密稱取丹參素對照品10.0mg，置于10mL容量瓶中，加流動相溶解并且定容。搖勻，過濾。取續(xù)濾液用0.45μm微孔濾膜過濾，作為丹參素對照品貯備液。

2.2.2 供試品溶液的制備

取復(fù)方丹參滴丸10粒，研成細(xì)粉后精確稱量，置100mL容量瓶中，加流動相適量(大約80mL)，超聲處理15min使其完全均勻溶解于流動相中，放冷并稀釋至刻度100mL。搖勻、濾過，取續(xù)濾液用0.45μm微孔濾膜過濾，即得復(fù)方丹參滴丸的供溶液試品溶液。

2.3 線性關(guān)系的考察

分別精密量取上述配制的對照品溶液0.5mL、1mL、2mL、3mL、5mL至10mL容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻后用0.45μm微孔濾膜過濾，各進樣20μL，按上述色譜條件分別測定其峰面積，結(jié)果見表1。結(jié)果丹參素對照品在0.01～0.10mg/mL范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系，回歸方程為A=17371C+3500，r=0.997(n=5)。

表1 丹參素的對照品標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.4 加樣回收試驗

精密量取供試品溶液6份，分為3組，分別加入濃度為0.0810、0.2430、0.4050mg/mL的對照品溶液0.5mL于EP管中，搖勻，取續(xù)濾液用0.45μm微孔濾膜過濾，進樣20μL，每組進樣兩次。按上述色譜條件測定峰面積，結(jié)果丹參素平均回收率為100.15%，RSD為4.19%。試驗結(jié)果表明，加樣回收率良好。

2.5 精密度試驗

取濃度為0.1620mg/mL的對照品溶液20μL，按擬定的色譜條件重復(fù)進樣3次，記錄峰面積，RSD為4.05%(n=3)。試驗結(jié)果表明精密度良好。

2.6 樣品測定

取3份“2.2.2”供試液20μL，按擬定的色譜條件進樣，記錄峰面積，按外標(biāo)法計算樣品中丹參素的含量分別為8.013mg/g、7.925mg/g、8.164mg/g，平均含量為8.034mg/g，符合2010版藥典的含量要求。

3 討 論

復(fù)方丹參滴丸是在現(xiàn)代高科技條件下提取出丹和三七的有效成分后，再加入適量冰片而制成的一種新型純中藥滴丸劑，是在中醫(yī)的傳統(tǒng)理論指導(dǎo)下與現(xiàn)代藥劑學(xué)新技術(shù)相結(jié)合制備而成的，具有劑量小、服用方便、溶出速度快、起效迅速、可直接經(jīng)粘膜吸收入血、生物利用度高、療效高以及無胃腸刺激、無明顯毒副作用等多種優(yōu)點[5]。臨床上長期以來用于治療冠心病和心絞痛等心血管疾病，現(xiàn)在已經(jīng)成為國內(nèi)心血管市場上的最主要藥物和品牌。

本實驗中的對照品溶液在UV-3900下進行紫外光譜掃描（波長為200～600nm之間），結(jié)果表明在280nm處丹參素有最大吸收，并且在此波長處其它物質(zhì)均無吸收，故選擇測定波長定為248nm。

高效液相法測定藥物制劑中丹參素含量的報導(dǎo)比較多，有報道使用甲醇-水為（20∶80）等流動相。本文對其進行修飾，并進行多次預(yù)試驗的篩選，考慮到色譜柱的適應(yīng)能力等諸多因素選擇甲醇-水-冰醋酸(21∶78∶1.0)為流動相時，出峰時間以及峰型較佳，保留時間適宜。在測定復(fù)方丹參滴丸中丹參素的含量時，其他藥物成分均無干擾。本文采用HPLC法對復(fù)方丹參滴丸中的丹參素進行含量測定方法的研究，具有操作方法簡單以及靈敏度高等優(yōu)點，由于儀器和人為操作原因RSD有少許誤差。總而言之，與其他方法相比較，HPLC法提高了測定時的專屬性以及準(zhǔn)確性，可用于復(fù)方丹參滴丸中丹參素的含量測定，建議臨床上丹參滴丸的質(zhì)量控制時可進行參考。

[1] Chu Y,Zhang L,Wang XY,et al.The effect of Compound Danshen Dripping Pills,a Chinese herb medicine,on the pharmacokinetics and pharmacodynamics of warfarin in rats[J].J Ethnopharmacology, 2011,137(3):1457-1461.

[2] Ng CS,Wang SP.Systematic review and meta -analysis of randomized controlled trials comparing Chinese patent medicines Compound Danshen Dripping Pills and Di'ao Xinxuekang in treating angina pectoris[J].Zhong Xi Yi Jie He Xue Bao,2012,10 (1):25-34.

[3] 袁琦,趙輝.HPLC法測定復(fù)方丹參滴丸中丹參素的含量[J].河南大學(xué)學(xué)報:醫(yī)學(xué)版,2008,27(2):31-32.

[4] 靳榮.復(fù)方丹參滴丸臨床新用近況[J].實用中醫(yī)藥雜志,2012,28 (7):610-611.

[5] 丁蘭,易愛純,石崢嶸.高效液相色譜法同時測定復(fù)方丹參滴丸中丹參素和原兒茶醛[J].中國實用醫(yī)藥,2008,3(18):70-71.

R927.2

B

1671-8194（2013）17-0085-02