李學(xué)紅 鞏長芹 周利章

（臨沂市藥品檢驗(yàn)所，山東 臨沂 276001）

RP-HPLC法測定槐角丸中柚皮苷的含量

李學(xué)紅 鞏長芹 周利章

（臨沂市藥品檢驗(yàn)所，山東 臨沂 276001）

目的建立RP-HPLC法同時(shí)測定槐角丸中柚皮苷含量的方法。方法色譜柱： ZORBAX SB-C18柱，流動(dòng)相：甲醇-1%冰醋酸（37.5∶62.5）；檢測波長283nm；柱溫：35℃。結(jié)果柚皮苷進(jìn)樣量在0.1012～0.7591μg（r=0.99999）范圍內(nèi)線性關(guān)系良好；平均回收率為97.0%，RSD為0.62%。結(jié)論該方法簡便、快速、準(zhǔn)確，適用于槐角丸中柚皮苷的含量測定。

高效液相色譜法；柚皮苷；含量測定；槐角丸

槐角丸[1]收載于《中國藥典》2010年版一部，由槐角（炒）、地榆炭、黃芩、枳殼（炒）、當(dāng)歸、防風(fēng)六位藥材組成。具有清腸疏風(fēng)，涼血止血之功效。主要用于血熱所致的腸風(fēng)便血、痔瘡腫痛。藥典規(guī)定含量測定以黃芩苷為指標(biāo)成分，枳殼的含量未作規(guī)定，亦未見有關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道。本文采用RP-HPLC法測定枳殼中柚皮苷的含量，方法簡便、分離度好，結(jié)果準(zhǔn)確，適用于槐角丸的質(zhì)量分析。

1 儀器與試藥

Agilent1260高效液相色譜儀（配在線脫氣機(jī)、G1311C四元泵、G1329B自動(dòng)進(jìn)樣器、G1315DDAD檢測器，美國Agilent公司）；Agilent-C18（4.6mm×250mm，5μm）色譜柱；XS205DU電子分析天平（梅特勒-托利多生產(chǎn)）；KQ3200型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；柚皮苷對(duì)照品（中國藥品生物制品檢定所，供含量測定用，批號(hào)：110722-201111，含量以93.2%計(jì)）；槐角丸（西安正大制藥有限公司，批號(hào)：120403；藥都制藥集團(tuán)股份有限公司，批號(hào)：100701，120601）；甲醇為色譜純，水為純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Agilent ZORBAX SB-C18（4.6mm×250mm，5μm）；以甲醇-1%冰醋酸（37.5∶62.5）為流動(dòng)相，流速為1.0mL/min；柱溫為35℃；進(jìn)樣量為5μL。柚皮苷的分離度為2.4；理論塔板為7606。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液

精密稱取柚皮苷對(duì)照品5.43mg，置100mL量瓶中，加50%甲醇溶解，并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。

2.2.2 供試品溶液

取本品適量，研細(xì)，取約1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇50mL，稱定重量，超聲30min，放冷，再稱定重量，用50%甲醇補(bǔ)足減失的重量。過濾，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3 陰性溶液

按槐角丸中處方比例精密稱取全方中除枳殼以外的其他藥材，按“2.2.2供試品溶液”的條件制備成陰性溶液。

2.3 干擾試驗(yàn)

取對(duì)照品溶液、供試品溶液、缺枳殼的陰性溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件，分別進(jìn)樣分析。結(jié)果在供試品溶液色譜圖中，有與對(duì)照品柚皮苷保留時(shí)間一致的特征峰，保留時(shí)間分別為10.20min，陰性溶液無此特征峰，表明陰性樣品對(duì)所測組分無干擾，見圖1。

圖1 槐角丸的RP-HPLC法

2.4 線性關(guān)系考察

取“2.2.1”項(xiàng)下的對(duì)照品溶液2、4、8、10、12、15μL，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件，分別自動(dòng)進(jìn)樣，記錄色譜圖。以峰面積Y為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量X（μg）為橫坐標(biāo)作圖，得柚皮苷回歸方程：Y柚皮苷=1641.2593X-4.4824 r=0.99999，結(jié)果表明，柚皮苷進(jìn)樣量在0.1012～0.7591μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5 精密度試驗(yàn)

取“2.2.1”項(xiàng)下的對(duì)照品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件，自動(dòng)重復(fù)進(jìn)樣6次，進(jìn)樣量5μL，記錄色譜圖。結(jié)果柚皮苷峰面積平均值為412，RSD為0.14%，表明儀器精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取供試品（批號(hào)：120403）溶液，室溫下放置，分別于配制后0、2、4、6、8、10、12、24h，進(jìn)樣1次，進(jìn)樣量5μL，記錄色譜圖。結(jié)果柚皮苷峰面積平均值為606，RSD為0.84%，表明供試品溶液24h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

分別精密稱取同一批號(hào)樣品（批號(hào)：120403）6份，按“2.2.2供試品溶液”的條件制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件，分別進(jìn)樣，進(jìn)樣量5μL，記錄柚皮苷峰面積。結(jié)果柚皮苷平均含量為3.70mg/g，RSD為0.13%，表明方法重復(fù)性良好。

2.8 加樣回收試驗(yàn)

取已知含量的同一批號(hào)槐角丸（批號(hào)：120403）6份，每份約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，每份分別精密加入柚皮苷對(duì)照品。按“2.2.2供試品溶液”的條件制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件，分別進(jìn)樣，進(jìn)樣量5μL，記錄色譜圖。結(jié)果見表1，柚皮苷平均回收率為97.0%，RSD為0.62%。

2.9 含量測定

取3批樣品，按“2.2.2供試品溶液”的條件制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件，分別進(jìn)樣，進(jìn)樣量5μL，記錄柚皮苷峰面積，按外標(biāo)法計(jì)算含量。結(jié)果批號(hào)為120403、100701、120601的樣品中柚皮苷的含量分別為3.70、3.38、3.39mg/g。

表1 柚皮苷加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n=6）

3 討 論

3.1 波長的選擇

通過對(duì)柚皮苷進(jìn)行紫外吸收光譜掃描得到柚皮苷在283nm處有最大吸收，因此選擇了283nm作為測定波長。

3.2 流動(dòng)相的選擇

參考《中國藥典》2010年版一部中橘紅顆粒含量測定的流動(dòng)相[1]，通過調(diào)整比例，結(jié)果以甲醇-1%冰醋酸水溶液（37.5:67.5）為流動(dòng)相，峰形好，分離度高，陰性無干擾。

3.3 提取方法的選擇

試驗(yàn)中考察了超聲20min、30 min、60min，熱回流20min、30min、60min，結(jié)果發(fā)現(xiàn)超聲30min與60min，無明顯差異；熱回流與超聲的結(jié)果基本一致；因此選擇超聲30min提取樣品，操作簡單方便。

[1] 中國藥典[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：1182-1225.

R927.2

B

1671-8194（2013）16-0115-02