譚麗珊 張振斌

（韶關(guān)市第一人民醫(yī)院，廣東 韶關(guān) 512000）

β-連環(huán)蛋白，E-鈣蛋白，P53在結(jié)直腸癌中的表達(dá)及意義

譚麗珊 張振斌

（韶關(guān)市第一人民醫(yī)院，廣東 韶關(guān) 512000）

目的研究結(jié)直腸癌中β-連環(huán)蛋白、E-鈣蛋白及P53的表達(dá)，探討其相關(guān)性及臨床意義。方法采用免疫組化對(duì)80例結(jié)直腸癌的β-連環(huán)蛋白、E-鈣蛋白及P53進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果β-連環(huán)蛋白、E-鈣蛋白及P53在正常結(jié)直腸黏膜、結(jié)直腸腺瘤及結(jié)直腸癌細(xì)胞組間表達(dá)差異有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論在結(jié)直腸癌組織和正常組織中β-連環(huán)蛋白、E-鈣蛋白及P53均有不同程度的表達(dá)，陽(yáng)性表達(dá)率差異有顯著性。檢測(cè)其表達(dá)異常對(duì)判斷臨床進(jìn)展、推測(cè)預(yù)后以及制定針對(duì)性的治療方案有一定的參考價(jià)值。

結(jié)直腸癌；β-連環(huán)蛋白；E-鈣蛋白；P53；免疫組化

結(jié)腸直腸癌是人類最常見(jiàn)的消化道惡性腫瘤之一，且近年來(lái)其發(fā)病率有明顯上升趨勢(shì)。結(jié)腸癌的發(fā)生到發(fā)展的過(guò)程是設(shè)計(jì)到癌基因過(guò)度激活的過(guò)程，抑癌基因突變?nèi)笔?，?xì)胞外基分解酶、黏附分子及細(xì)胞因子等多種因素共同作用。復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移嚴(yán)重影響病人生存率和死亡率，是腫瘤患者致死的重要原因。E-鈣蛋白是重要細(xì)胞間黏附分子，其在一定的條件之下可有效的調(diào)節(jié)細(xì)胞與基質(zhì)或者細(xì)胞之間的黏附反應(yīng)，同時(shí)維持完整性性和組織結(jié)構(gòu)形態(tài)，參與分化調(diào)節(jié)。β-連環(huán)蛋白和E-鈣蛋白共同組成的E-cadherin/catenin復(fù)合物，此種復(fù)合物可有效的抑制腫瘤細(xì)胞侵襲，并有效的維持患者上皮細(xì)胞組織結(jié)構(gòu)完整性。本文旨在聯(lián)合應(yīng)用β-連環(huán)蛋白，E-鈣蛋白，P53，探討結(jié)直腸癌的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移的過(guò)程中的意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本次試驗(yàn)收集廣東醫(yī)學(xué)院附屬韶關(guān)醫(yī)院，韶關(guān)市第一人民醫(yī)院病理科2010年10月至2012年10月期間病理科存檔50例結(jié)腸癌石蠟標(biāo)本，30例直腸癌標(biāo)本，所有的標(biāo)本在手術(shù)前均沒(méi)有進(jìn)行免疫治療、化療或者放療。所有標(biāo)本的一般資料保存完好，通過(guò)對(duì)一般資料進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，男性顯示為47例，女性為33例，年齡范圍在30～81歲，平均年齡為（55.4±3.5）歲。80例標(biāo)本中有低分化腺癌、中分化腺癌、高分化腺癌例數(shù)分別為12例、55例、14例。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽(yáng)性組、陰性組分別為27例和50例。取距離癌灶邊緣5cm以上的有14例結(jié)直腸黏膜，19例內(nèi)鏡活檢管狀腺瘤做對(duì)照。

1.2 方法

所有標(biāo)本均使用4%中性甲醛進(jìn)行固定后石蠟包埋，切片厚度為4μm，其可作為HE染色機(jī)免疫組織化學(xué)染色。β-連環(huán)蛋白、E-鈣蛋白、免疫組化試劑盒及P53單克隆抗體的生產(chǎn)廠家為福州邁新生物技術(shù)公司產(chǎn)品。在使用的過(guò)程中嚴(yán)格按照說(shuō)明書的操作執(zhí)行，使用一支陽(yáng)性組織切片進(jìn)行對(duì)照，PBS替代第一抗體作陰性對(duì)照。

1.3 療效判定

β-連環(huán)蛋白、E-鈣蛋白陽(yáng)性表達(dá)在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)部，P53陽(yáng)性定位在細(xì)胞核內(nèi)部。評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)是根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞所占比例及染色體強(qiáng)度：400倍視野下結(jié)束500個(gè)細(xì)胞，染色體深度主要為多數(shù)細(xì)胞的呈色反應(yīng)：0分無(wú)染色，1分表現(xiàn)為淡黃色，2分表現(xiàn)為深黃色或黃色，3分表現(xiàn)為棕褐色或褐色。陽(yáng)性細(xì)胞所占的比例進(jìn)行評(píng)分，0分為陰性，1分為陽(yáng)性小雨等于10%，2分為11%～50%，3分為51%～75%，4分為76%～100%。陽(yáng)性百分比×染色強(qiáng)度＞3分表現(xiàn)為陽(yáng)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

應(yīng)用SPSS 13.0軟件系統(tǒng)，組間比較采用χ2檢驗(yàn)與連續(xù)性校正檢驗(yàn)，相關(guān)分析采用Spearman等級(jí)相關(guān)分析法。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，以P＜0.001為差異有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

β-連環(huán)蛋白、E-鈣蛋白，P53在不同病變結(jié)腸直腸組織中的表達(dá)：β-連環(huán)蛋白、E-鈣蛋白、P53在正常結(jié)直腸黏膜、結(jié)直腸腺瘤及結(jié)直腸癌細(xì)胞中有陽(yáng)性表達(dá)檢驗(yàn)顯示在正常結(jié)直腸黏膜、結(jié)直腸腺瘤及結(jié)直腸癌細(xì)胞組間陽(yáng)性表達(dá)率的差異有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.001），見(jiàn)圖1～6，表1。

圖1 β-連環(huán)蛋白在腸癌中弱陽(yáng)性表達(dá)(EnVision×100)

圖2 E-鈣蛋白在腸癌中弱陽(yáng)性表達(dá) (EnVision×100)

圖3 P53在腸癌中強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)(EnVision×40)

圖4 β-連環(huán)蛋白在正常腸黏膜中強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)(EnVision×100)

圖5 E-鈣蛋白在正常腸黏膜中強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)(EnVision×40)

圖6 P53在正常腸黏膜中陰性表達(dá) (EnVision×40)

表1 β-連環(huán)蛋白、E-鈣蛋白及P53在結(jié)直腸癌、管狀腺瘤及正常結(jié)直腸黏膜的表達(dá)

結(jié)直腸癌中β-連環(huán)蛋白、E-鈣蛋白，P53的表達(dá)與臨床病理參數(shù)的關(guān)系經(jīng)χ2檢驗(yàn)，β-連環(huán)蛋白、E-鈣蛋白的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床分期之間有一定關(guān)聯(lián)（P＜0.05），經(jīng)過(guò)分析統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)患者的性別、年齡、浸潤(rùn)程度及腫瘤大小之間無(wú)明顯關(guān)系（P＞0.05），PS5表達(dá)和浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移之間有一定的關(guān)系（P＜0.05）,和患者的性別年齡、臨床分期及腫瘤大小無(wú)明顯關(guān)系（P＞0.05）。詳情見(jiàn)表2。

表2 β-連環(huán)蛋白、E-鈣蛋白和P53表達(dá)與結(jié)直腸癌臨床病理特征的關(guān)系

3 討 論

鈣黏蛋白（cadherin）是一類介導(dǎo)細(xì)胞間同質(zhì)黏附的鈣依賴性跨膜糖蛋白，由胞外區(qū)、跨膜區(qū)和細(xì)胞內(nèi)區(qū)三部分構(gòu)成。E-鈣蛋白的胞內(nèi)肽段與一組稱為連環(huán)蛋白（catenin）的細(xì)胞骨架蛋白結(jié)合，參與細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、組織形態(tài)發(fā)生和胚胎發(fā)育等過(guò)程。E-鈣蛋白被看作是上皮細(xì)胞連接性黏著劑，其表達(dá)下調(diào)或不表達(dá)是上皮細(xì)胞離散的分子基礎(chǔ)，提示E-鈣蛋白具有腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移抑制功能，E-鈣蛋白基因是一個(gè)重要的腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因[1，2]。β-連環(huán)蛋白作為一種多功能蛋白，能與E-鈣蛋白相互作用而參與細(xì)胞黏附，是Wnt信號(hào)通路中的關(guān)鍵參與成員調(diào)節(jié)該通路。Wnt信號(hào)是組織發(fā)育、分化的必須的關(guān)鍵信號(hào)，Wnt信號(hào)傳導(dǎo)異常將參與腫瘤的發(fā)生[7]。β-連環(huán)蛋白蛋白在該信號(hào)傳導(dǎo)途徑中起著將信號(hào)由胞內(nèi)傳遞至核內(nèi)的作用，是該途徑關(guān)鍵調(diào)節(jié)點(diǎn)。國(guó)外學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)β-連環(huán)蛋白在人類腫瘤細(xì)胞中表達(dá)減弱或異常表達(dá)[3，4]。P53是腫瘤抑制基因，分為野生型和突變型兩種。突變型P53癌的發(fā)生發(fā)展中起著重要的作用，并直接影響其生物學(xué)行為[5]。P53突變是癌組織中公認(rèn)的分子水平的改變，改變的結(jié)果導(dǎo)致了轉(zhuǎn)移率的升高，與患者術(shù)后生存期縮短密切相關(guān)，該基因突變可作為一種獨(dú)立可靠的生物學(xué)指標(biāo)來(lái)判斷患者的預(yù)后[6]。本研究通過(guò)對(duì)80例結(jié)直腸癌組織中E-鈣蛋白、β-連環(huán)蛋白，P53進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)結(jié)直腸癌組織中P53較正常組織陽(yáng)性表達(dá)率明顯升高，由此可將P53作為檢測(cè)腸癌的重要指標(biāo)，并發(fā)現(xiàn)P53陽(yáng)性患者其淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率、臨床分期明顯增高，提示P53陽(yáng)性腫瘤具有較強(qiáng)的轉(zhuǎn)移特性，預(yù)后較差。β-連環(huán)蛋白在結(jié)直腸癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率明顯低于正常組。β-連環(huán)蛋白及E-鈣蛋白的表達(dá)下降或缺失提示細(xì)胞間的相互黏附力減弱，腫瘤細(xì)胞容易分散而向外浸潤(rùn)性生長(zhǎng)、脫離原發(fā)灶而發(fā)生轉(zhuǎn)移。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)β-連環(huán)蛋白、E-鈣蛋白與組織分化程度及TNM分期相關(guān)，且隨著分化程度的降低、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期升高其表達(dá)減弱。以上研究結(jié)果提示E-鈣蛋白，和β-連環(huán)蛋白，P53可作為結(jié)直腸癌發(fā)生、發(fā)展、浸潤(rùn)的參考指標(biāo)。綜上所述，結(jié)直腸癌的發(fā)生、演變是多個(gè)基因、多種因子共同作用的結(jié)果，它們之間相互促進(jìn)或抑制。做上述蛋白因子的檢測(cè)，不僅能了解疾病發(fā)生、發(fā)展的情況，也為臨床的診斷治療、判斷預(yù)后提供了依據(jù)。

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Expression and Significance of Beta-catenin,E-calcium protein,P53 in Colorectal Cancer

TAN Li-shan, ZHANG Zhen-bin

(First People's Hospital of Shaoguan, Shaoguan 512000, China)

ObjectiveTo investigate the expressions of β-catenin, E- cadherin and P53 in colorectal cancer and their clinicopathologic characteristics of colorectal cancer.MethodsThe expression of β-catenin, E- cadherin and P53 was detected by using immunohistochemistry in 80 cases with colorectal cancer.ResultsThe expression of β-catenin, E- cadherin and P53 in normal colorectal mucosa, atypical hyperplasia colorectal mucosa and colorectal cancer cells was statistical significantConclusionβ-catenin, E-cadherin and P53 express in colorectal cancer tissues and normal tissues in different degree, but the positive expression rate was significantly different. The testing of their abnormal expressions is some valuable for judging clinical progress, presuming prognosis and making out special treatment protocol.

Colorectal cancer; β-catenin; E-cadherin; P53; Immunohistochemistry

R735.3+5

B

1671-8194（2013）15-0007-02