王 瑛 楊利紅*

（黑龍江省食品藥品檢驗(yàn)檢測所，黑龍江 哈爾濱 150001）

復(fù)方硫酸鋅滴眼液無菌檢查方法的建立

王 瑛 楊利紅*

（黑龍江省食品藥品檢驗(yàn)檢測所，黑龍江 哈爾濱 150001）

目的 建立復(fù)方硫酸鋅滴眼液的無菌檢查方法。方法 按照《中國藥典》2010年版附錄的要求，采用薄膜過濾法，通過接種6株陽性代表菌進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證，沖洗液用量為每筒300mL。結(jié)果 6株陽性代表菌株在試驗(yàn)組與陽性對照組均生長良好。結(jié)論 本法可消除復(fù)方硫酸鋅滴眼液的抑菌作用，適用于該制劑的無菌檢查。

復(fù)方硫酸鋅滴眼液；無菌檢查；方法學(xué)驗(yàn)證

復(fù)方硫酸鋅滴眼液對革蘭陽性菌及革蘭陰性菌均具有抑制作用，用于治療結(jié)膜炎、沙眼等眼部感染，是臨床常用藥物。為有效控制藥品的質(zhì)量，保證無菌檢查方法的科學(xué)性和檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。根據(jù)《中國藥典》2010年版[1]附錄無菌檢查的要求，建立復(fù)方硫酸鋅滴眼液的無菌檢查方法，并對其進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證。

1 材 料

1.1 培養(yǎng)基與試劑

硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基、改良馬丁培養(yǎng)基、蛋白胨、肉湯培養(yǎng)基。以上均為北京三藥生產(chǎn)。

1.2 菌種

金黃色葡萄球菌[CMCC(B)26 003]、大腸埃希氏菌[CMCC(B)44 102]、枯草芽孢桿菌[CMCC(B)63 501]、生孢梭菌[CMCC(B)64 941]、白色念珠菌[CMCC(F)98 001]、黑曲霉[CMCC(F)98 003]。

1.3 樣品

復(fù)方硫酸鋅滴眼液（哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院，批號：20101123，20101124，20101125規(guī)格：5mL/支）。

2 方法與結(jié)果

2.1 菌液制備

取經(jīng)30～35℃培養(yǎng)18～24h的金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌與枯草芽孢桿菌營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)物各1mL、取經(jīng)23～28℃培養(yǎng)24～48h的白色念珠菌的改良馬丁液體培養(yǎng)物1mL、30～35℃培養(yǎng)18～24h的生孢梭菌的硫乙醇酸鹽液體培養(yǎng)物1mL，分別加入0.9%無菌氯化鈉溶液9mL中10倍依次稀釋至濃度約為10～100cfu/mL；取經(jīng)培養(yǎng)5～7d的黑曲霉改良馬丁瓊脂斜面培養(yǎng)物，加入含0.05%(mL/mL)聚山梨酯80的0.9%無菌氯化鈉溶液5mL，將孢子洗下，搖勻，吸取1mL至無菌試管中，用含0.05%(mL/mL)聚山梨酯80的0.9%無菌氯化鈉溶液10倍稀釋至濃度約為10～100cfu/mL，備用。

2.2 方法驗(yàn)證

2.2.1 試驗(yàn)組

取供試品60支，分別置6個(gè)濾筒過濾（每筒10支），沖洗液用量為每筒300mL，分次沖洗并在最后一次沖洗液中分別加入1mL已制備好的上述6株菌液，再加入相應(yīng)的培養(yǎng)基100mL，按規(guī)定條件培養(yǎng)3～5d，逐日觀察。

2.2.2 菌液組

另取6個(gè)濾筒，加入相應(yīng)的等量培養(yǎng)基，分別加入1mL各試驗(yàn)菌液，按規(guī)定條件培養(yǎng)3～5d，逐日觀察。

2.2.3 供試品對照組

取供試品20支，置2個(gè)濾筒中過濾（每筒10支），沖洗液用量為每筒300mL，再分別加入硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基和改良馬丁培養(yǎng)基各100mL，按規(guī)定條件培養(yǎng)3～5d，逐日觀察。

2.2.4 陰性對照組

取試驗(yàn)用0.1%無菌蛋白胨水溶液300mL，分置兩個(gè)濾筒中過濾，再分別加入硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基和改良馬丁培養(yǎng)基，按規(guī)定條件培養(yǎng)3～5d，逐日觀察。

表1 試驗(yàn)組與陽性對照組微生物生長情況

3 討 論

眼用藥劑是指用于治療和診斷眼疾直接用于眼的各類劑型。包括滴眼劑、洗眼劑、眼膏劑、眼用注射劑以及眼用膜劑和接觸眼鏡等。雖然眼用藥劑（除眼用注射劑外）均非直接進(jìn)入組織或血液，但由于眼組織較為嬌嫩，一旦受損后果嚴(yán)重，因此眼用藥劑不同于一般的外用制劑，均要求無菌以保證用藥安全。因此《中國藥典》2010年版中要求眼用制劑以無菌檢查法取代微生物限度檢查。

復(fù)方硫酸鋅滴眼液主要成分為鹽酸小檗堿、硫酸鋅和硼酸，具有一定的抗菌作用，可與細(xì)菌DNA形成復(fù)合物，從而影響DNA的復(fù)制，干擾細(xì)菌生長繁殖；對革蘭陽性菌及革蘭陰性菌如痢疾桿菌、大腸桿菌、傷寒桿菌、溶血性鏈球菌、肺炎鏈球菌、結(jié)核桿菌等都有抑制作用；并能增強(qiáng)人體白細(xì)胞的吞噬功能。用于治療結(jié)膜炎、沙眼等眼部感染。

本試驗(yàn)采用薄膜過濾法對樣品的無菌檢查進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證，以每株菌接種10支的樣品量進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)，沖洗量選取以每筒300mL即可消除其抑菌作用。同時(shí)考察沖洗液、培養(yǎng)基對試驗(yàn)的影響，以證明試驗(yàn)結(jié)果的可靠性。本試驗(yàn)建立的無菌檢查方法準(zhǔn)確、可行，為臨床用藥安全提供有力保障。

[1] 國家藥典委員會.中國藥典(二部)[S].北京:化學(xué)工業(yè)出版社, 2010:103-107.

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1671-8194（2013）20-0088-02

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