高巖

【摘 要】目的 研究絞股藍總皂苷的提取工藝。方法 采用正交試驗設(shè)計法，以絞股藍總皂苷提取量為考察指標，對影響絞股藍總皂苷提取工藝的因素進行了優(yōu)選。結(jié)果 提取時間、提取次數(shù)對提取效果有顯著影響，乙醇用量的影響不顯著。結(jié)論 絞股藍總皂苷的最佳提取工藝為：藥材加8倍量70%的乙醇，回流提取3次，每次2 h。

【關(guān)鍵詞】絞股藍 提取工藝

【中圖分類號】0652【文獻標識碼】A【文章編號】1672-5158（2013）02-0341-01

絞股藍（Gynostemma）為葫蘆科絞股藍屬多年生蔓生草本植物，主要含有皂苷、黃酮、多糖，還含有人體必須的多種氨基酸、維生素和微量元素等成分?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，絞股藍具有抑制腫瘤、抗衰老、降低血脂、增強免疫力和保護心臟的作用[1]。絞股藍總皂苷片作為藥品已經(jīng)上市多年，用于高脂血癥，見有心悸氣短、胸悶肢麻、眩暈頭痛、健忘耳鳴、自汗乏力或脘腹脹滿等心脾氣虛、痰阻血瘀者。為了最大限度提取并保持絞股藍的有效成分，保證絞股藍藥材資源的充分利用，提高經(jīng)濟效益，本研究用正交試驗優(yōu)選絞股藍提取工藝。

一、儀器與試藥

UV-2601型紫外分光光度計（島津）；人參皂苷Rb1對照品（中國藥品生物制品檢定所）。冰醋酸、高氯酸、甲醇、香草醛、正丁醇、石油醚等均為分析純。樣品：七葉絞股藍莖葉混合物，產(chǎn)于四川臥龍地區(qū)。

二、方法

1、標準曲線的制備

精密稱取人參皂苷Rb1對照品10 mg置5 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成濃度為2.0 mg/mL的儲備液。精密量取儲備液50、100、150、200、250μL分別置15mL具塞試管中，揮干甲醇，分別加入新配置的5%香草醛冰醋酸溶液0.4mL、高氯酸1.6mL，搖勻，密塞，置60 ℃水浴中加熱15 min后取出，立即用冷水冷卻至室溫，分別精密加入冰醋酸10 mL，搖勻，作為供試品溶液。另精密量取甲醇溶液250μL置15mL具塞試管中，按照上述操作，到加入冰醋酸10mL搖勻為止，作為空白溶液。取供試品溶液和空白溶液，照分光光度法[《中華人民共和國藥典》（一部）附錄ⅦA]試驗，在560 nm的波長處分別測定吸收度。以人參皂苷Rb1的量X（mg）對吸收度A進行回歸，得標準曲線方程為：A=1.275 7X+0.001 9，r=0. 998 9。結(jié)果表明，當取樣量在0.102～0.510 mg范圍內(nèi)時，人參皂苷Rb1的含量與吸收度呈良好的線性關(guān)系。

2、絞股藍總皂苷含量測定方法

精密稱取絞股藍總皂苷粉末20 mg置5mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密量取200μL置15mL具塞試管中，揮干甲醇后按“2. 1”項下操作，測定吸收度，用標準曲線計算出絞股藍總皂苷的含量。

3、絞股藍總皂苷的提取工藝

將干燥的絞股藍藥材粉碎成粗粉，準確稱量100 g置圓底燒瓶中，用70%乙醇多次回流提取，合并提取液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮后減壓干燥，干燥物用1 000 mL的熱水充分溶解，加入同體積的石油醚萃取3次，將水層溶液用同體積的水飽和的正丁醇反復(fù)萃取，至正丁醇層無色為止，合并正丁醇提取液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮后減壓干燥，即得。

4、絞股藍總皂苷提取工藝的正交設(shè)計

根據(jù)初步試驗結(jié)果，選用L9（34）正交試驗表，以乙醇用量（A）、提取時間（B）、提取次數(shù)（C）為試驗因素，每個因素取3個水平（見表1）。取樣品，按照正交設(shè)計進行實驗，以絞股藍總皂苷的提取量為考察指標，進行提取工藝的優(yōu)選。

5、絞股藍總皂苷提取工藝的穩(wěn)定性試驗

按照正交試驗選擇的工藝條件，重復(fù)進行絞股藍總皂苷的提取，并依法測定絞股藍總皂苷的含量，評價正交試驗選擇的工藝條件是否穩(wěn)定。

三、結(jié)果

1、正交試驗結(jié)果

按表1的因素水平設(shè)計，正交試驗結(jié)果見表2，方差分析見表3。由表2中極差的直觀分析法R值可以看出，因素B的極差0.56為最大，說明它是A、B、C三因素中對絞股藍總皂苷提取影響最大的因素，其次是因素C，它的極差為0.47，這3個因素對絞股藍總皂苷提取的影響由大到小的順序依次為B>C>A。由表3的方差分析結(jié)果可以看出，在α=0.1的水平上，B因素和C因素對絞股藍總皂苷提取有顯著性影響，A因素的影響不顯著。結(jié)合表2和表3的分析可以得出最佳工藝條件為A1B3C3，即藥材加8倍量70%的乙醇，回流提取3次，每次2h。

2、絞股藍總皂苷提取工藝的穩(wěn)定性試驗結(jié)果

為了驗證正交試驗優(yōu)選的工藝條件的穩(wěn)定性，稱取3份100 g絞股藍藥材，分別按照最佳工藝條件A1B3C3操作。合并回流提取液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮后減壓干燥，干燥物用1000mL的熱水充分溶解，加入同體積的石油醚萃取3次，將水層溶液用同體積水飽和的正丁醇反復(fù)萃取，至正丁醇層無色為止，合并正丁醇提取液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器減壓干燥濃縮。平行操作，依法測定絞股藍總皂苷的含量。

四、討論

本實驗以絞股藍總皂苷提取量為參考指標，對絞股藍總皂苷的提取工藝進行了優(yōu)選，優(yōu)選的最佳工藝條件為A1B3C3。按照最佳工藝條件進行重復(fù)性試驗，試驗結(jié)果為：絞股藍總皂苷的平均提取率為（61.3±0.10） g/kg，RSD=1.64%。結(jié)果表明，用該工藝提取有較高的絞股藍總皂苷提取率，且穩(wěn)定性良好。因甲醇毒性較大，本實驗使用乙醇作為提取介質(zhì)，有利于減少提取液中的雜質(zhì)，增加溶出度；采用水浴恒溫減壓提取，可有效克服高溫使絞股藍總皂苷變性的問題。

參考文獻

[1] 董玉睿 ，絞股藍總皂苷提取工藝研究，2011，05

[2] 蔣偉哲，周燕文，李錦桀.廣西6種絞股藍中總皂苷的含量比較[J].藥物鑒定，2006，15（3）：26-27

[3] 潘 峰，劉 迪，黃翠霞.絞股藍總皂苷的藥理與臨床研究[J].現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2006，15（5）：674-675