張勇

楚雄醫(yī)藥高等專(zhuān)科學(xué)校藥學(xué)系，云南楚雄675000

正交試驗(yàn)法優(yōu)選槐花米中蕓香苷水提取工藝

張勇

楚雄醫(yī)藥高等專(zhuān)科學(xué)校藥學(xué)系，云南楚雄675000

目的：對(duì)以水為溶劑堿提酸沉法提取槐花米中蕓香苷的影響因素進(jìn)行優(yōu)選，為提取工藝優(yōu)化提供參考依據(jù)。方法：以水為溶液，槐花米為原料，采用L18（37）正交試驗(yàn)對(duì)影響蕓香苷提取收得率的諸因素進(jìn)行優(yōu)選，尋找蕓香苷提取的最佳工藝條件。結(jié)果：經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)，藥材粉碎度、提取次數(shù)、提取水溶液的pH、酸沉?xí)r的pH值對(duì)產(chǎn)品收得率影響顯著，影響提取收得率指標(biāo)的因素為A＞D＞B＞F＞G＞E＞C。結(jié)論：提取最佳工藝條件為A3→D3→B2→F2→G1→E2→C3，即：藥材為細(xì)粉、提取3次、提取水溶液的pH9、酸沉pH值4、結(jié)晶時(shí)間12小時(shí)、提取時(shí)間30分鐘、水溶液的用量1：30倍。

槐花米；蕓香苷；堿提酸沉法；正交試驗(yàn)

槐花米是一種常用中藥，為豆科植物槐SophorɑjɑponicɑL.的干燥花及花蕾，主要有效成分是蕓香苷又名蘆?。≧utin），其化學(xué)結(jié)構(gòu)為5，7，3′，4′－四羥基－3－蕓香糖黃酮，含量高達(dá)12%～20%［1］。以槐花米為原料提取蕓香苷，有多種提取工藝，如水提法、堿提酸沉法、醇提法等，其中堿提酸沉法有操作簡(jiǎn)單，經(jīng)濟(jì)、安全的特點(diǎn)，故以水為溶劑采用堿提酸沉法從槐米中提取蕓香苷的工藝最常用。但提取率受諸多因素（藥材的粉碎度、水溶液的pH、水溶液的用量、提取次數(shù)、提取時(shí)間、酸沉pH值、結(jié)晶時(shí)間）的影響。經(jīng)資料查閱［2－7］，只對(duì)其中二三個(gè)因素進(jìn)行過(guò)研究或優(yōu)選，同時(shí)對(duì)蕓香苷提取收得率的7個(gè)因素進(jìn)行優(yōu)選尚未見(jiàn)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)以水為溶媒，槐花米為原料，以藥材的粉碎度、水溶液的pH、水溶液的用量、提取次數(shù)、提取時(shí)間、酸沉pH值、結(jié)晶時(shí)間七個(gè)因素，采用L18（37）正交試驗(yàn)對(duì)影響蕓香苷提取收得率的諸因素進(jìn)行優(yōu)選，以便尋找蕓香苷提取的最佳工藝條件。

1 材料與方法

1.1 材料槐花米藥材由云南省楚雄州藥材公司提供（經(jīng)粉碎后過(guò)篩，壓碎的槐花米過(guò)10目篩；細(xì)粉過(guò)20目篩）；薄層層析硅膠G（青島美方化工有限公司）；蘆丁對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)100080－200306）；所用試劑均為分析純。

1.2 儀器TN－100B千分之一托盤(pán)扭力天平（上海精密科學(xué)儀器有限公司），SH2－D3型循環(huán)水式真空泵（鞏義市予華儀器有限公司），101A－3型電熱鼓風(fēng)恒溫干燥箱（上海市崇明實(shí)驗(yàn)儀器廠），PHS－3C數(shù)字酸度計(jì)（上海鵬順科學(xué)儀器有限公司），SUV－1箱式紫外分光分析儀（上?？茖W(xué)器材公司）。

1.3 正交設(shè)計(jì)以槐花米中所含成分蕓香苷的提取收得率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，采用L18（37）正交試驗(yàn)對(duì)影響槐米的水煎煮提取效果諸因素（A藥材的粉碎度、B水溶液的pH、C水溶液的用量、D提取次數(shù)、E提取時(shí)間、F酸沉pH值、G結(jié)晶的時(shí)間）進(jìn)行優(yōu)選。對(duì)因素A、B、C、D、E、F、G在試驗(yàn)范圍內(nèi)分別選取三個(gè)水平如下：

A藥材的粉碎度：A1＝未粉碎、A2＝壓碎、A3＝細(xì)粉；B水溶液的pH：B1＝pH8、B2＝pH9、B3＝pH10；C水溶液的用量：C1＝1：10倍、C1＝1：20倍、C1＝1：30倍；D提取次數(shù)：D1＝1次、D2＝2次、D3＝3次；E提取時(shí)間：E1＝15分鐘、E2＝30分鐘、E3＝45分鐘；F酸沉pH值：F1＝pH2、F2＝pH4、F3＝pH6；G結(jié)晶時(shí)間：G1＝12小時(shí)、G2＝24小時(shí)、G3＝36小時(shí)。

采用正交試驗(yàn)方案需進(jìn)行18次實(shí)驗(yàn)，正交試驗(yàn)具有典型性、代表性、大大減少試驗(yàn)次數(shù)，正交表中所選出的試驗(yàn)滿(mǎn)足“均勻分散和整齊可比，易于使用數(shù)理統(tǒng)計(jì)方法處理實(shí)驗(yàn)結(jié)果”［8］。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法選用不同粒度的槐花米藥材，稱(chēng)取20g，加0.4%的硼砂［9］水溶液按料液比加入，用石灰乳調(diào)節(jié)提取溶液pH后，按照實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方法進(jìn)行提取，四層紗布過(guò)濾，濾液常溫下放冷后，加濃HCl調(diào)pH，放置結(jié)晶，析出淡黃色沉淀，減壓抽濾，沉淀物室溫涼干后加200倍量蒸餾水加熱煮沸溶解，趁熱抽濾，濾液放置結(jié)晶，析出淡黃色沉淀，減壓抽濾，然后用蒸餾50ml水洗3次，抽干，得到的蕓香苷，將蕓香苷罝于60℃烘箱中干燥8h，移至干燥器中放置1h后稱(chēng)重，計(jì)算提取收得率（提取收得率＝蕓香苷質(zhì)量／槐米質(zhì)量）。

1.5 定性分析取提取得到的蕓香苷溶解制成1%的乙醇溶液后，與相同方法制成的蕓香苷標(biāo)準(zhǔn)品點(diǎn)于同一塊硅膠G－CMC－CNa薄層板上，以氯仿－乙醇－冰醋酸（15：5：1）為展開(kāi)劑，以1%三氯化鋁乙醇溶液噴霧顯色，顯色前后分別于紫外燈（波長(zhǎng)為254nm）下檢測(cè)，與蕓香苷標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照，計(jì)算Rf值，確認(rèn)提取物中含有蕓香苷。另外進(jìn)行鹽酸－鎂粉反應(yīng)，觀察顏色進(jìn)行鑒別并與對(duì)照品對(duì)照。

2 結(jié)果與分析

2.1 提取結(jié)果利用正交表的整齊可比性，利用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法，計(jì)算并分析各因素對(duì)提取率的影響。由表1中可看出，各因素極差為A＞D＞B＞F＞G＞E＞C；故影響提取收得率指標(biāo)的因素為A＞D＞B＞F＞G＞E＞C，比較各k值，取各因素中較大的值，即提取條件為：A3→D3→B2→F2→G1→E2→C3。

2.2 定性檢測(cè)鹽酸—鎂粉反應(yīng)，樣品與對(duì)照品進(jìn)行比較，顏色一致均為紫紅色。經(jīng)薄層色譜展開(kāi)并顯色后均呈淡黃色斑點(diǎn)，在紫外分析儀下觀察均為亮黃色斑點(diǎn)；測(cè)量Rf結(jié)果，Rf樣＝Rf標(biāo)＝0.56，因此提取物中含有蕓香苷。

3 統(tǒng)計(jì)分析

從表2蕓香苷的方差分析表中可看出，各因索對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的重要次序?yàn)椋篈＞D＞B＞F＞G＞E＞C，由方差分析可知，A藥材粉碎度、B提取水溶液的pH、D提取的次數(shù)和F酸沉pH值對(duì)蕓香苷提取收得率有顯著影響，而從選定的水平中E提取時(shí)間和G結(jié)晶時(shí)間影響不太顯著，而C料液比影響最小。這與表1蕓香苷正交試驗(yàn)直觀分析總表所得結(jié)果是一致的，故影響提取收得率指標(biāo)的因素為A＞D＞B＞F＞G＞E＞C，即提取條件為：A3→D3→B2→F2→G1→E2→C3。

表2 蕓香苷的方差分析表

4 討論

以槐花米為原料，以所含成分蕓香苷的提取收得率為考查指標(biāo)，由表1和表2可以得出結(jié)論，各因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果影響顯著的有A、B、D、F，提取最佳工藝條件為A3→D3→B2→F2→G1→E2→C3，即：A藥材為細(xì)粉；D提取3次；B提取水溶液的pH9；F酸沉pH值4；G結(jié)晶時(shí)間12小時(shí)；E提取時(shí)間30分鐘；C水溶液的用量1∶30倍；從效應(yīng)曲線圖中可看出其中對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果影響顯著的4個(gè)因素中，隨著藥材粉碎度和提取次數(shù)的增大收得率提高；而提取水溶液的pH、酸沉pH太高和太低都會(huì)降低收得率，提取時(shí)間在30分鐘，料液比增大會(huì)增加收得率但溶媒太多不利于后續(xù)操作，且水溶液用量的極差k1與k3相差很小，所以水溶液的用量1：10倍即可，而G（結(jié)晶時(shí)間）溶液冷卻即開(kāi)始析出，超過(guò)12小時(shí)基本已沉淀完成。

［1］郭麗冰.蕓香苷的提取、分離和鑒定［M］.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，1998：45.

［2］舒曉宏，馮梅，陳華，等.槐花米中蘆丁提取最佳pH值的實(shí)驗(yàn)研究［J］.大連醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2005，27（2）：91.

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［5］李金秀，龔盛昭，黃秋瑾.蕓香甙提取工藝的改進(jìn)研究［J］.廣東化工，2003，30（1）：15－17.

［6］廖衛(wèi)華，鄧金梅，宋粉云.正交法優(yōu)化槐米中蘆丁的提取工藝［J］.廣東藥學(xué)院學(xué)報(bào)，2006，22（3）：275－276.

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［8］劉定遠(yuǎn).醫(yī)藥數(shù)理統(tǒng)計(jì)方法（第三版）［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，1999：155.

［9］盧艷花.魏東芝.蔣曉萌.中藥有效成分提取分離技術(shù)（第二版）［M］.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2004：106.

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1007－8517（2013）22－0010－02

2013.09.28）