于 玲 王曉飛 葛海生

武警部隊藥品儀器檢驗所，北京 102613

加味皮康顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

于 玲 王曉飛 葛海生

武警部隊藥品儀器檢驗所，北京 102613

目的：建立加味皮康顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法：采用薄層色譜法對方中的桑白皮、白鮮皮、當(dāng)歸進(jìn)行定性鑒別，采用高效液相色譜法對芍藥苷進(jìn)行含量測定。結(jié)果：TLC斑點清晰，分離度好，專屬性強，陰性對照無干擾；芍藥苷進(jìn)樣量在0.01394～0.5576μg范圍內(nèi)線性良好（r＝0.9999），平均回收率：98.45%，RSD：1.33%（n＝6）。結(jié)論：所建標(biāo)準(zhǔn)能有效控制加味皮康顆粒的質(zhì)量。

加味皮康顆粒；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；薄層色譜法；高效液相色譜法；芍藥苷

加味皮康顆粒是由牡丹皮、桑白皮、白鮮皮、當(dāng)歸、陳皮、五加皮、大腹皮、地骨皮等多味中草藥組成，具有清熱涼血，祛風(fēng)止癢，活血消斑的功效，臨床用于玫瑰糠疹、濕疹的治療，為保證和控制該制劑的質(zhì)量，本文建立了白鮮皮、桑白皮、當(dāng)歸的薄層色譜（TLC）定性鑒別，采用高效液相色譜（HPLC）測定制劑中芍藥苷的含量，方法簡單，專屬性強、重復(fù)性好，獲得了較滿意的結(jié)果。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 SHIMADZU LC－2010HTC高效液相色譜儀，METTLER TOLEDO AL204電子天平。

1.2 試藥 白鮮皮對照藥材（批號：120978－201105，購自中國食品藥品檢定研究院）、桑白皮對照藥材（批號：12114－201006，購自中國食品藥品檢定研究院）、當(dāng)歸對照藥材（批號：120927－201014，購自中國食品藥品檢定研究院），芍藥苷對照品（批號：110736－200526，購自中國食品藥品檢定研究院）；加味皮康顆粒（批號：20130301、20130302、20130303，為武警部隊藥品儀器檢驗所自制）；硅膠G薄層板（青島海洋化工廠分廠）；乙腈、甲醇為色譜純，其他試劑為分析純。

2 定性鑒別：

2.1 桑白皮的TLC鑒別［1］取本品約4.5g，加飽和碳酸鈉溶液30ml，超聲20分鐘，加稀鹽酸調(diào)pH值至1～2，靜置30分鐘，用乙酸乙酯提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液Ⅰ。另取桑白皮對照藥材2g，按供試品溶液Ⅰ制備的方法制成對照藥材溶液Ⅰ；另取不加桑白皮藥材的陰性樣品，按供試品溶液Ⅰ制備的方法制成陰性對照溶液Ⅰ。按薄層色譜法（《中國藥典》一部2010年版附錄ⅥB）試驗，吸取上述溶液供試品溶液Ⅰ5μl、對照藥材溶液Ⅰ10μl，陰性對照溶液Ⅰ5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚（60～90℃）－乙酸乙酯（6：4）為展開劑，展開、取出、晾干。置紫外燈（365nm）下檢視，結(jié)果供試品溶液色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點，陰性對照溶液在相應(yīng)位置上無干擾（見圖1）。

2.2 白鮮皮的TLC鑒別［2］取本品約2.3g，加甲醇30m l，超聲20分鐘，濾過，濾液加中性氧化鋁（100～200目）1.5g，振搖2min，濾過，濾液置水浴上蒸干，殘渣加甲醇1m l使溶解，作為供試品溶液Ⅱ。另取白鮮皮對照藥材1g，加水40ml，煮沸并保持微沸30min，脫脂棉濾過，濾液置水浴上蒸干，殘渣加甲醇2m l使溶解，作為對照藥材溶液Ⅱ。另取不加白鮮皮藥材的陰性樣品，按供試品溶液Ⅱ制備的方法制成陰性對照溶液Ⅱ。按薄層色譜法（《中國藥典》一部2010年版附錄ⅥB）試驗，吸取上述溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷－丙酮－濃氨水（20：20：1）的上層溶液為展開劑，展開、取出、晾干。噴以10%硫酸乙醇溶液，105℃加熱至斑點清晰。結(jié)果供試品溶液色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，分別顯相同顏色的斑點，陰性對照溶液在相應(yīng)位置上無干擾（見圖2）。

2.3 當(dāng)歸的TLC鑒別［3］取本品2.3g，加1%碳酸氫鈉溶液20m l，超聲處理10分鐘，離心，取上清液用稀鹽酸調(diào)節(jié)pH值至2～3，用乙醚振搖提取2次，每次20m l，合并乙醚液，揮發(fā)，殘渣加甲醇1m l使溶解，作為供試品溶液Ⅲ。另取當(dāng)歸對照藥材0.5g，按供試品溶液Ⅲ制備的方法制成對照藥材溶液Ⅲ；另取不加當(dāng)歸藥材的陰性樣品，按供試品溶液Ⅲ制備的方法制成陰性對照溶液Ⅲ。按薄層色譜法（《中國藥典》一部2010年版附錄ⅥB）試驗，吸取上述溶液各10μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷－二氯甲烷－乙酸乙酯－甲酸（4：1：1：0.1）為展開劑，展開、取出、晾干。置紫外燈（365nm）下檢視，結(jié)果供試品溶液色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點，陰性對照溶液在相應(yīng)位置上無干擾（見圖3）。

3 芍藥苷的含量測定［4］

3.1 色譜條件 色譜柱：SHISEIDO，ODS分析柱（4.6mm ×250mm，5？m）；流動相：乙腈－0.1%磷酸溶液（14：86），柱溫：30℃，檢測波長：230nm，流速：1.0m l·min－1，在上述色譜條件下，芍藥苷和供試品中其它組分可達(dá)到基線分離，芍藥苷與其相鄰色譜峰的分離度大于1.5，且陰性對照液無干擾（附圖）；理論塔板數(shù)按芍藥苷峰計大于2000。

3.2 對照品溶液的制備 精密稱取芍藥苷對照品約6.97mg，置于10m l量瓶中，加甲醇適量溶解后，稀釋至刻度，搖勻制得貯備液。精密吸取貯備液1m l，置50m l量瓶中加甲醇稀釋至刻度，作為對照品溶液。

3.3 供試品溶液的制備 取本品約1g，精密稱定，置于錐形瓶中，精密加入甲醇25m l，稱定重量，超聲處理（功率300W，頻率45kHz）15分鐘，放冷，再稱定重量，加甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

3.4 陰性對照溶液的制備 按處方配制不含牡丹皮的樣品顆粒，并按“3.3”項下方法對樣品進(jìn)行制備，制成陰性樣品溶液。

3.5 方法專屬性試驗精密吸取芍藥苷陰性對照溶液、對照品溶液、供試品溶液各10μl，分別注入色譜儀，按“3.1”項下色譜條件進(jìn)行測定，記錄圖譜，見圖4。在B、C色譜圖相應(yīng)的位置上具有相同保留時間色譜峰，而A圖在相應(yīng)位置上無干擾峰。

3.6 線性關(guān)系考察精密量取對照品溶液（濃度為：13.94μg·m l－1）各1，5，10，15，20，25，30，35，40μl注入色譜儀中，按“3.1”項下色譜條件測定芍藥苷峰面積（A），作為縱坐標(biāo)，同時以芍藥苷進(jìn)樣量（μg）為橫坐標(biāo)，得回歸方程為Y＝766＋1254293X，r＝0.9999。以上數(shù)據(jù)表明芍藥苷進(jìn)樣量在0.01394μg～0.5576μg范圍內(nèi)線性良好。

3.7 精密度試驗 精密量取3.6中濃度為13.94μgμml－1的溶液，按3.1項下色譜條件重復(fù)進(jìn)樣6次，每次10μl，計算得芍藥苷的峰面積RSD為0.86%（n＝6），表明儀器的精密度良好。

3.8 穩(wěn)定性試驗將3.3項下的溶液于室溫放置，分別在放置0，2，4，6，8，10，12h時進(jìn)行分別進(jìn)行測定，計算得芍藥苷峰面積RSD為1.45%（n＝7），表明供試品在12h內(nèi)基本穩(wěn)定。

3.9 重復(fù)性試驗 取同一批號的樣品6份，按樣品溶液制備方法制備及測試條件測定，結(jié)果芍藥苷平均含量的RSD＝1.31%（n＝6），表明本法重復(fù)性良好。

3.10 回收率試驗 采用加樣回收法，取已知芍藥苷含量的同一批號的本品（批號：20130302，含量為0.2315 mg· g－1）約1g，共6份，精密稱定，置于錐形瓶中，精密加入芍藥苷對照品溶液（濃度為0.2323mg·ml－1）各1ml，再精密加入甲醇25ml，按3.3中項下方法制成供試品，分別吸取供試品溶液10μl，注入HPLC儀，測定芍藥苷含量，計算加樣回收率，結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率試驗結(jié)果（n＝6）

3.11 樣品的測定 取本品3批，按“3.3”項下制成供試品溶液，進(jìn)樣10μl分別測定。按外標(biāo)法計算芍藥苷的含量，結(jié)果見表2。

表2 樣品含量測定結(jié)果（n＝3）

4 討論

4.1 在2.1桑白皮的TLC鑒別中，曾采用樣品溶液點于聚酰胺薄膜上，展開劑用醋酸，進(jìn)行試驗，分離結(jié)果不滿意。

4.2 在2.2白鮮皮的TLC鑒別中，曾采用樣品溶液超聲后，濾過，濾液未加中性氧化鋁（100～200目）振搖，濾過，濾液直接蒸干，殘渣加甲醇使溶解，制成供試品后進(jìn)行試驗，分離結(jié)果不滿意。

4.3 本試驗對方中的主要成分桑白皮、白鮮皮、當(dāng)歸采用TLC進(jìn)行定性鑒別，色譜斑點清晰，分離效果好，專屬性強，可用于該制劑的定性鑒別。

4.4 在定量試驗中，取同一批號的樣品，采用甲醇、乙醇、稀乙醇分別考察了超聲處理15min的考察方法，結(jié)果表明，以甲醇為溶劑，超聲處理15min，方法簡便，提取充分，方法最佳。

4.5 試驗中，比較了參考文獻(xiàn)4、5所述的流動相、柱溫，以乙腈－0.1%磷酸溶液（14：86），柱溫：30℃，制劑中芍藥苷能與其他組分的色譜峰很好分離，理論塔板數(shù)按芍藥苷峰計大于2000，且方法簡便、實用，結(jié)果準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，可有效的控制加味皮康顆粒的質(zhì)量。

［1］賀云杰，趙晨，李妍，等.參附強心丸中人參、大黃、桑白皮的薄層鑒別鑒別及烏頭堿限度檢查［J］.世界科學(xué)技術(shù)（中醫(yī)藥現(xiàn)代化），2009，03：468.

［2］王春桃，符洪.白山片的薄層色譜鑒別方法研究［J］.中國熱帶醫(yī)學(xué)，2008，8（6）：1036.

［3］國家藥典委員會編.中華人民共和國藥典（一部）［S］.2010年版.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2010：124.

［4］國家藥典委員會編.中華人民共和國藥典（一部）［S］.2010年版.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2010：97.

［5］王曉飛，葛海生，于玲，等.柴辛鼻敏康顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究［J］.中國藥房，2011，22（19）：1800.

Quality Standard of jiawei pikang Granules

Yu Ling，Wang Xiao－fei，Ge Hai－sheng（Institute for Drug Control of the Chinese People＇s Armed Police Forces，Beijing102613，China）

Objective：To establish the Quality Standard of jiawei pikang Granules.Methods：TLC was adopted to identify Cortex Mori，Radix Ampelopsis and Radix Angelicae sinensis.HPLCmethodwasused to test the contentof paeoniflorin.Results：TLC spots were clear，well－separated and specific without interference from negative control；The linear range of paeoniflorin was0.01394～0.5576？g（r＝0.9999）with an average recovery of98.45%，The RSD is 1.33%（n＝6）.Conclusion：Establish Standard is suitable for the quality control of jiawei pikang Granules.

jiawei pikang granules；quality standard；TLC；HPLC；paeoniflorin

R286

A

1007－8517（2013）23－0014－03

2013.10.13）

于玲，副主任藥師，本科，研究方向為藥品檢驗，E－mail：yuling.y＠163.com