李瑋玲

(廣東省廣州市藥品檢驗(yàn)所，廣東 廣州 510160)

唑來膦酸是一種特異性地作用于骨的二磷酸化合物，能抑制因破骨活性增加導(dǎo)致的骨吸收，臨床用于治療惡性高鈣血癥，控制惡性腫瘤骨轉(zhuǎn)移，并能改善多發(fā)性骨髓瘤、前列腺癌、乳腺癌、肺癌等惡性腫瘤治療的療效[1－2]，目前主要有注射用唑來膦酸等制劑。唑來膦酸的制備工藝比較復(fù)雜，各個(gè)廠家所用到的溶劑略有差異，主要使用了甲醇、乙醇、丙酮、乙腈、二氯甲烷和正己烷等。筆者建立了頂空毛細(xì)管氣相色譜法測定唑來膦酸中的6種殘留溶劑，方法快速，準(zhǔn)確，靈敏度高。

1 儀器與試藥

Aglient 7890A型氣相色譜儀;Aglient G1888頂空進(jìn)樣器;氫火焰離子化檢測器。甲醇對(duì)照品(廣州化學(xué)試劑廠，批號(hào)為20090905－2，含量不低于99.5%);無水乙醇對(duì)照品(廣州化學(xué)試劑廠，批號(hào)為20100501－2，含量不低于99.7%);丙酮對(duì)照品(廣州化學(xué)試劑廠，批號(hào)為090201－2，含量不低于99.5%);乙腈對(duì)照品(天津市協(xié)和昊鵬色譜科技有限公司，批號(hào)為20090902－2;含量不低于 99.9%);正己烷對(duì)照品(Merck，批號(hào)為I270991601，含量不低于98.0%);唑來膦酸樣品[山東新時(shí)代(批號(hào)為090901)，諾華(批號(hào)為C0001)，南京制藥廠(批號(hào)分別為ZA20090801，ZA20090802，ZA20090803)];試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

采用氰丙基苯基(6%)－二甲基聚硅氧烷(或極性相近，94%)為固定液的毛細(xì)管柱為色譜柱;程序升溫:起始溫度40℃，維持10 min，再以每分鐘35℃的速率升溫至220℃，維持5 min;進(jìn)樣口溫度為250℃;氫火焰離子化檢測器(FID);檢測器溫度為280℃;采用恒壓模式，柱前壓為15 psi，分流比為10∶1;頂空瓶平衡溫度為80℃，平衡時(shí)間為30 min，傳輸管溫度為90℃。

2.2 溶液制備

分別取甲醇、乙醇、丙酮、乙腈、二氯甲烷與正己烷各適量，精密稱定，用N，N－二甲基甲酰胺溶液定量稀釋制成每l mL中分別含甲醇 0.3 mg，乙醇 0.5 mg，丙酮 0.5 mg，乙腈 0.041 mg，二氯甲烷0.06 mg和正己烷0.029 mg的混合溶液，搖勻，精密量取2 mL，置頂空瓶中，密封，作為對(duì)照品溶液。取樣品約0.2g，精密稱定，置頂空瓶中，精密加入N，N－二甲基甲酰胺溶液2 mL，密封，作為供試品溶液，色譜圖見圖1。

圖1 氣相色譜圖

2.3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察:取甲醇、乙醇、丙酮、乙腈、二氯甲烷與正己烷對(duì)照品約 1，1.6，1.6，0.14，0.2，0.1 g，精密稱定，置 100 mL 量瓶中，用N，N－二甲基甲酰胺稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品貯備液，分別取上述貯備液 1，2，3，5，10 mL，分別置 100 mL 量瓶中，用N，N－二甲基甲酰胺稀釋至刻度，搖勻，分別精密量取2 mL，置頂空瓶中，密封，進(jìn)樣，按上述色譜條件測定峰面積。以對(duì)照品質(zhì)量濃度作橫坐標(biāo)(X)、峰面積作為縱坐標(biāo)(Y)，得到各成分測定的線性方程、相關(guān)系數(shù)及線性范圍見表1。

精密度試驗(yàn):分別制備對(duì)照品溶液6份，進(jìn)樣，記錄色譜圖，測定峰面積值。結(jié)果甲醇的 RSD為0.8%，乙醇的 RSD為0.8%，丙酮的 RSD為0.7%，乙腈的 RSD為1.2%，二氯甲烷的 RSD為1.0%和正己烷的 RSD為1.0%，表明方法的進(jìn)樣重復(fù)性良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn):取同一對(duì)照品溶液，分別于0，6，12 h時(shí)進(jìn)樣，記錄色譜圖，測定峰面積值。結(jié)果峰面積沒有顯著性變化，表明對(duì)照品在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

表1 殘留溶劑測定線性試驗(yàn)結(jié)果

加樣回收試驗(yàn):按標(biāo)示量的100%設(shè)計(jì)回收試驗(yàn)，共測定6份樣品。結(jié)果甲醇平均回收率為100.7%，RSD為0.9%;乙醇平均回收率為101.3%，RSD為0.8%;丙酮平均回收率為100.7%，RSD為0.7%;乙腈平均回收率為97.5%，RSD為1.6%;二氯甲烷平均回收率為102.3%，RSD為1.2%;正己烷平均回收率為96.9%，RSD為1.0%。

檢出限測定:在擬訂色譜條件下，在色譜圖主成分的峰高為基線噪音3倍時(shí)，甲醇、乙醇、丙酮、乙腈、二氯甲烷和正己烷的檢出限分別為 75.0，60.5，44.6，6.98，11.7 ng/mL 和 7.86 pg/mL。

2.4 樣品含量測定

分別制備、吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液，進(jìn)樣，按上述色譜條件測定峰面積，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算標(biāo)示百分含量。樣品測定結(jié)果見表2。

表2 樣品含量測定結(jié)果(%)

3 討論

乙腈、甲醇、二氯甲烷和正己烷均為二類溶劑，限度分別0.041%，0.3%，0.06%，0.029%;乙醇和丙酮為三類溶劑，限度均為0.5%[3]。本試驗(yàn)測定的這6種成分的殘留量均較低。

唑來膦酸原料的生產(chǎn)廠家較多，生產(chǎn)的工藝均不相同，使用的溶劑不同，重結(jié)晶的方法和所用的溶劑均有差異，唑來膦酸原有的標(biāo)準(zhǔn)[4－8]較多，但均不控制有機(jī)溶劑殘留量，為此本試驗(yàn)建立了測定唑來膦酸中的有機(jī)溶劑殘留量的方法。

本試驗(yàn)測定的6種溶劑，極性和熔點(diǎn)方面的差異，可以采用頂空－程序升溫的氣相色譜法測定。

[1]何杰文，范 華，梁桂才.唑來膦酸的臨床應(yīng)用[J].中國現(xiàn)代藥物應(yīng)用，2012，6(18):92 －93.

[2]王 增，盧紅陽，翁 琳.唑來膦酸抗腫瘤作用的臨床研究進(jìn)展[J].中國臨床藥理學(xué)與治療學(xué)，2011，16(8):945－950.

[3]國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典(二部)[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:附錄61.

[4]YBH21592004，國家藥品標(biāo)準(zhǔn)(試行)[S].

[5]YBH21432004，國家藥品標(biāo)準(zhǔn)(試行)[S].

[6]YBH21172004，國家藥品標(biāo)準(zhǔn)(試行)[S].

[7]YBH21302004，國家藥品標(biāo)準(zhǔn)(試行)[S].

[8]YBH21542004，國家藥品標(biāo)準(zhǔn)(試行)[S].