張錦興 唐蕾 李卓亞 黃峰
利尿消炎合劑是中山市人民醫(yī)院根據(jù)多年的臨床經(jīng)驗方為基礎(chǔ)研制而成的特色中藥制劑,由黃柏、金錢草、黃芩等十一味中藥組成,具有利水通淋,清熱化石的功效。我院臨床應(yīng)用利尿消炎合劑治療泌尿系感染及泌尿系結(jié)石等已有多年的歷史,臨床療效確切,不良反應(yīng)少。黃柏,金錢草,黃芩作為方中的主要藥物,為了保證臨床療效的穩(wěn)定,更好地控制藥品質(zhì)量,建立該制劑完善的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),本實驗在該驗方的基礎(chǔ)上,建立了處方中黃柏、金錢草、黃芩的薄層色譜(TLC)鑒別法,以控制制劑的質(zhì)量。
AS20500A型超聲波清洗器(北京東南儀誠實驗室設(shè)備有限公司);Zf-20D暗箱三用紫外分析儀(上海暨輝科學(xué)分析儀器有限公司);101A-2B型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(上海市實驗儀器廠);YOKO-XR顯色加熱器(武漢藥科新技術(shù)開發(fā)公司);電子恒溫水浴鍋(廣東省汕頭市醫(yī)用設(shè)備廠);利尿消炎合劑(中山市人民醫(yī)院,批號分別為:2012070512,20120402,20120205);陰性對照樣品(自制);黃芩對照藥材(批號:120955-201008);黃芩苷對照品(批號:110715-201117);鹽酸小檗堿(批號:110713-200609);槲皮素對照品(批號:100801-200907);金錢草對照藥材(批號:121248-200703),均由中國藥品生物制品檢定所提供;苯、甲酸、丁酮、硫酸、三氯化鐵、三氯甲烷、甲醇、乙醇、乙酸乙酯、正丁醇等均為分析純。
2.1 黃柏薄層色譜鑒別 取利尿消炎合劑30 ml,加氨試液調(diào)節(jié)pH值至10左右,用三氯甲烷50 ml萃取,分取三氯甲烷層,水浴蒸干,殘渣加無水乙醇2 ml溶解,作為供試品溶液。另取鹽酸小檗堿對照品,加無水乙醇制成每毫升含0.5 mg的溶液,作為對照品溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2010版一部附錄VI B)試驗,吸取上述三種溶液各5 μl,分別點于同一硅膠G薄層板上,以水飽和正丁醇-冰醋酸(7∶1)為展開劑,展開,取出,晾干。置紫外光燈(365nm)下檢視,供試品色譜中,在與對照品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同的顏色熒光斑點,陰性對照品溶液無干擾(圖1)。
圖1 黃柏薄層色譜圖
2.2 金錢草薄層色譜鑒別 取利尿消炎合劑50 ml,加稀鹽酸10 ml,置水浴中加熱1 h,取出,迅速冷卻,用乙酸乙酯振搖提取2次,每次50 ml,合并乙酸乙酯液,用水50 ml洗滌,棄去水液,乙酸乙酯液蒸干,殘渣加甲醇1 ml使溶解,作為供試品溶液。取金錢草對照藥材1 g,用水100 ml煎煮1.5 h,濾過,濾液同法制成對照藥材溶液。另取槲皮素對照品,甲醇制成每1 ml各含0.5 mg的溶液,作為對照品溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2010版一部附錄VI B)試驗,吸取上述三種溶液各5 μl,分別點于同一硅膠G薄層板上,以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(10∶7∶1)為展開劑,展開,取出,晾干,噴以3%三氯化鋁乙酸溶液,在105℃加熱數(shù)分鐘,置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中,在與對照品及對照藥材色譜相應(yīng)的位置上,顯相同的顏色熒光斑點,陰性對照品溶液無干擾(圖2)。
圖2 金錢草薄層色譜圖
2.3 黃芩薄層色譜鑒別 取利尿消炎合劑50 ml,用稀鹽酸調(diào)節(jié)pH值至2,用乙酸乙酯振搖提取2次,每次50 ml,合并乙酸乙酯液,蒸干,殘渣加甲醇2 ml使溶解,作為供試品溶液。另取黃芩對照藥材1 g,加水150 ml,煎煮1.5 h,煎液濃縮至約20 ml,同法制成對照藥材溶液。取黃芩苷對照品,加甲醇制成每1 ml含1 mg的溶液,作為對照品溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2010版一部附錄VI B)試驗,吸取供試品溶液及對照藥材溶液各10 μl,分別點于同一聚酰胺薄膜上,以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(8∶3∶1∶1)為展開劑,預(yù)平衡30 min,展開,取出,晾干,噴以5%三氯化鐵乙醇溶液,在105℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中,在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上,顯相同的顏色的斑點,陰性對照品溶液無干擾(圖3)。
圖3 黃芩薄層色譜圖
3.1 黃柏的薄層鑒別實驗 黃柏主要含有生物堿成分,其中鹽酸小檗堿為其主要的生物堿成分,含量為1.4%~5.8%[4]。本實驗以鹽酸小檗堿為對照品,鑒定黃柏,陰性無干擾。對黃柏中鹽酸小檗堿的提取,采用的是生物堿的傳統(tǒng)方法,因生物堿大都能溶于氯仿、甲醇、乙醇等有機(jī)溶劑,除季銨堿和一些分子量較低或含極性基團(tuán)較多的生物堿外,一般均不溶或難溶于水,而生物堿與酸結(jié)合成鹽時則易溶于水和醇?;谶@種特性,可用不同的溶劑將生物堿從中藥中提?。?,6]。
3.2 金錢草的薄層鑒別 實驗藥理實驗表明,金錢草具有利膽、排石作用[7],作為利尿消炎合劑中的君藥,鑒定金錢草成分對于保持制劑的質(zhì)量穩(wěn)定有重要意義,金錢草主要成分為黃酮苷類成分[8,9],本實驗對金錢草主要成分提取鑒定采用了《中國藥典》報道的金錢草鑒定方法,方法穩(wěn)定,可靠。
3.3 黃芩的薄層鑒別實驗 本實驗研究了2010版《中國藥典》中兩種處理黃芩樣品的方式,方法一如上文供試品溶液制備所示,另外一個方法為在方法一的基礎(chǔ)上,樣品先經(jīng)乙醚萃取,棄去乙醚液,以除去脂溶性成分[10]。本研究比較了兩種試驗方法,研究發(fā)現(xiàn)在利尿消炎合劑的樣品處理中,脂溶性成分干擾不大。因此采用了方法一,以減少試劑的浪費及縮短實驗步驟。
利尿消炎合劑所含藥味多,成分復(fù)雜。如薄層圖所示,本實驗通過對供試品有效的前處理,除去大部分干擾雜質(zhì),再經(jīng)過反復(fù)試驗,選擇了適宜層析條件,結(jié)果薄層色譜分離效果好,有效成分斑點清晰,獲得了專屬性較強(qiáng)的定性分析方法,為利尿消炎合劑提供了簡便有效的質(zhì)量控制方法。
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