張錦興 唐蕾 李卓亞 黃峰

利尿消炎合劑是中山市人民醫(yī)院根據(jù)多年的臨床經(jīng)驗方為基礎(chǔ)研制而成的特色中藥制劑，由黃柏、金錢草、黃芩等十一味中藥組成，具有利水通淋，清熱化石的功效。我院臨床應(yīng)用利尿消炎合劑治療泌尿系感染及泌尿系結(jié)石等已有多年的歷史，臨床療效確切，不良反應(yīng)少。黃柏，金錢草，黃芩作為方中的主要藥物，為了保證臨床療效的穩(wěn)定，更好地控制藥品質(zhì)量，建立該制劑完善的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，本實驗在該驗方的基礎(chǔ)上，建立了處方中黃柏、金錢草、黃芩的薄層色譜(TLC)鑒別法，以控制制劑的質(zhì)量。

1 儀器與試藥

AS20500A型超聲波清洗器(北京東南儀誠實驗室設(shè)備有限公司);Zf-20D暗箱三用紫外分析儀(上海暨輝科學(xué)分析儀器有限公司);101A-2B型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(上海市實驗儀器廠);YOKO-XR顯色加熱器(武漢藥科新技術(shù)開發(fā)公司);電子恒溫水浴鍋(廣東省汕頭市醫(yī)用設(shè)備廠);利尿消炎合劑(中山市人民醫(yī)院，批號分別為:2012070512，20120402，20120205);陰性對照樣品(自制);黃芩對照藥材(批號:120955-201008);黃芩苷對照品(批號:110715-201117);鹽酸小檗堿(批號:110713-200609);槲皮素對照品(批號:100801-200907);金錢草對照藥材(批號:121248-200703)，均由中國藥品生物制品檢定所提供;苯、甲酸、丁酮、硫酸、三氯化鐵、三氯甲烷、甲醇、乙醇、乙酸乙酯、正丁醇等均為分析純。

2 方法和結(jié)果［1～3］

2.1 黃柏薄層色譜鑒別 取利尿消炎合劑30 ml，加氨試液調(diào)節(jié)pH值至10左右，用三氯甲烷50 ml萃取，分取三氯甲烷層，水浴蒸干，殘渣加無水乙醇2 ml溶解，作為供試品溶液。另取鹽酸小檗堿對照品，加無水乙醇制成每毫升含0.5 mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2010版一部附錄VI B)試驗，吸取上述三種溶液各5 μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以水飽和正丁醇－冰醋酸(7∶1)為展開劑，展開，取出，晾干。置紫外光燈(365nm)下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的顏色熒光斑點，陰性對照品溶液無干擾(圖1)。

圖1 黃柏薄層色譜圖

2.2 金錢草薄層色譜鑒別 取利尿消炎合劑50 ml，加稀鹽酸10 ml，置水浴中加熱1 h，取出，迅速冷卻，用乙酸乙酯振搖提取2次，每次50 ml，合并乙酸乙酯液，用水50 ml洗滌，棄去水液，乙酸乙酯液蒸干，殘渣加甲醇1 ml使溶解，作為供試品溶液。取金錢草對照藥材1 g，用水100 ml煎煮1.5 h，濾過，濾液同法制成對照藥材溶液。另取槲皮素對照品，甲醇制成每1 ml各含0.5 mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2010版一部附錄VI B)試驗，吸取上述三種溶液各5 μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(10∶7∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以3%三氯化鋁乙酸溶液，在105℃加熱數(shù)分鐘，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照品及對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的顏色熒光斑點，陰性對照品溶液無干擾(圖2)。

圖2 金錢草薄層色譜圖

2.3 黃芩薄層色譜鑒別 取利尿消炎合劑50 ml，用稀鹽酸調(diào)節(jié)pH值至2，用乙酸乙酯振搖提取2次，每次50 ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘渣加甲醇2 ml使溶解，作為供試品溶液。另取黃芩對照藥材1 g，加水150 ml，煎煮1.5 h，煎液濃縮至約20 ml，同法制成對照藥材溶液。取黃芩苷對照品，加甲醇制成每1 ml含1 mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2010版一部附錄VI B)試驗，吸取供試品溶液及對照藥材溶液各10 μl，分別點于同一聚酰胺薄膜上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(8∶3∶1∶1)為展開劑，預(yù)平衡30 min，展開，取出，晾干，噴以5%三氯化鐵乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的顏色的斑點，陰性對照品溶液無干擾(圖3)。

圖3 黃芩薄層色譜圖

3 討論

3.1 黃柏的薄層鑒別實驗 黃柏主要含有生物堿成分，其中鹽酸小檗堿為其主要的生物堿成分，含量為1.4%～5.8%［4］。本實驗以鹽酸小檗堿為對照品，鑒定黃柏，陰性無干擾。對黃柏中鹽酸小檗堿的提取，采用的是生物堿的傳統(tǒng)方法，因生物堿大都能溶于氯仿、甲醇、乙醇等有機(jī)溶劑，除季銨堿和一些分子量較低或含極性基團(tuán)較多的生物堿外，一般均不溶或難溶于水，而生物堿與酸結(jié)合成鹽時則易溶于水和醇?；谶@種特性，可用不同的溶劑將生物堿從中藥中提?。?，6］。

3.2 金錢草的薄層鑒別 實驗藥理實驗表明，金錢草具有利膽、排石作用［7］，作為利尿消炎合劑中的君藥，鑒定金錢草成分對于保持制劑的質(zhì)量穩(wěn)定有重要意義，金錢草主要成分為黃酮苷類成分［8，9］，本實驗對金錢草主要成分提取鑒定采用了《中國藥典》報道的金錢草鑒定方法，方法穩(wěn)定，可靠。

3.3 黃芩的薄層鑒別實驗 本實驗研究了2010版《中國藥典》中兩種處理黃芩樣品的方式，方法一如上文供試品溶液制備所示，另外一個方法為在方法一的基礎(chǔ)上，樣品先經(jīng)乙醚萃取，棄去乙醚液，以除去脂溶性成分［10］。本研究比較了兩種試驗方法，研究發(fā)現(xiàn)在利尿消炎合劑的樣品處理中，脂溶性成分干擾不大。因此采用了方法一，以減少試劑的浪費及縮短實驗步驟。

4 結(jié)論

利尿消炎合劑所含藥味多，成分復(fù)雜。如薄層圖所示，本實驗通過對供試品有效的前處理，除去大部分干擾雜質(zhì)，再經(jīng)過反復(fù)試驗，選擇了適宜層析條件，結(jié)果薄層色譜分離效果好，有效成分斑點清晰，獲得了專屬性較強(qiáng)的定性分析方法，為利尿消炎合劑提供了簡便有效的質(zhì)量控制方法。

［1］劉軍紅，廖國玲.生物堿提取、分離和純化的研究進(jìn)展.時珍國醫(yī)國藥，2007，18(5):1230-1231.

［2］國家藥典委員會.(《中華人民共和國藥典》:一部).北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:204.

［3］國家藥典委員會.(《中華人民共和國藥典》:一部).北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:280.

［4］胡俊青，胡曉.黃柏化學(xué)成分、藥理作用的現(xiàn)代研究.當(dāng)代醫(yī)學(xué)，2009，15(7):139-141.

［5］姚新蘭，吳立軍.天然藥物化學(xué)，第4版.上海:人民衛(wèi)生出版社，2004:380.

［6］中國科學(xué)院上海藥物研究所.中草藥有效成分提取(第2版).上海:上海技術(shù)出版社，1998:263.

［7］莫劉基.幾種中藥對輸尿管結(jié)石排石機(jī)理的研究.新中醫(yī)，1985，(6):51.

［8］趙世萍，林平，薛智.大金錢草化學(xué)成分的研究.中草藥，1988，19(6):5-8.

［9］沈聯(lián)德，姚福潤.金錢草化學(xué)成分的研究.中國中藥雜志，1988，13(11):31-34.

［10］姚新生.有機(jī)化合物波譜分析.北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2004:75-76.