張力燕 陳 晨 李 鵬 謝之景 （山東農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院 泰安 271018）

幼貂抗犬瘟熱病毒母源抗體消長規(guī)律的測定

張力燕 陳 晨 李 鵬 謝之景*（山東農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院 泰安 271018）

本試驗(yàn)采用20只未進(jìn)行免疫接種的健康幼貂，分別在30、45、60日齡進(jìn)行頸靜脈采血，制備血清，測定抗CDV的中和抗體滴度。結(jié)果表明，30日齡絕大多數(shù)幼貂抗CDV母源中和抗體效價(jià)在1:30.0以上，45日齡母源抗體均較低，血清抗CDV中和抗體效價(jià)小于1:20.0。60日齡母源抗體基本消失，血清抗CDV中和抗體效價(jià)等于或小于1:8.0。所以45日齡對(duì)幼貂進(jìn)行CD免疫接種較好。

水貂 犬瘟熱病毒 母源抗體

犬瘟熱(Canine Distemper, CD)是由犬瘟熱病毒(Canine Distemper virus, CDV)引起犬科、鼬科、和浣熊科等動(dòng)物的一種急性、高度接觸性傳染性疾病[1]。CDV是副粘病毒科麻疹病毒屬的成員，病毒粒子呈多形性，多數(shù)呈球形，直徑大多數(shù)在150～300nm之間，為負(fù)鏈單股不分節(jié)的RNA病毒，只有一個(gè)血清型。目前CDV自然感染的動(dòng)物范圍在不斷擴(kuò)大，除犬科外，人們又發(fā)現(xiàn)了許多CDV的新宿主，例如鼬科的雪貂、水貂，浣熊科的小熊貓、浣熊，貓科的貓、獅、孟加拉虎、豹，大熊貓科的大熊貓，偶蹄目豬科的豬，日本獼猴和人等。CD在世界各地均有分布，所有養(yǎng)犬和經(jīng)濟(jì)動(dòng)物的國家均有CD的發(fā)生。CD疫苗的應(yīng)用在一定程度上控制了CDV的流行[2,3]，但是在實(shí)際生產(chǎn)過程中仍有許多疑似CDV感染的病例。CD在我國廣泛存在，我國部分省市的皮毛動(dòng)物特別是水貂飼養(yǎng)場不斷有CD病例的出現(xiàn)，給養(yǎng)殖戶造成很大的經(jīng)濟(jì)損失。造成免疫失敗的原因較多，但其確切原因尚不清楚，但抗CDV母源抗體的干擾是造成免疫失敗的一個(gè)重要原因。為此對(duì)幼貂的抗CDV母源中和抗體進(jìn)行測定，找出其消長規(guī)律，為選擇CD初次免疫接種的時(shí)機(jī)提供實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。本研究具有重要的理論意義和生產(chǎn)實(shí)踐意義，為保證養(yǎng)貂業(yè)的健康發(fā)展具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。

1 材料和方法

1.1 毒株與細(xì)胞

CDV-M1本實(shí)驗(yàn)室分離鑒定保存，MDCK細(xì)胞由遼寧出入境檢驗(yàn)檢疫局胡傳偉副研究員惠贈(zèng)。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物

從濰坊諸城5個(gè)養(yǎng)貂場隨即抽取20只未進(jìn)行免疫接種的健康幼貂。

1.3 方法

1.3.1 中和抗體效價(jià)的測定 分別在30、45、60日齡對(duì)20只試驗(yàn)幼貂進(jìn)行頸靜脈采血，制備血清，將血清置56℃水浴30 min進(jìn)行滅活，置-20℃凍存，待檢。采用血清微量中和試驗(yàn)測定血清抗CDV中和抗體效價(jià)。采用固定病毒—稀釋血清法[4]，測定血清抗CDV的中和抗體滴度。

1.3.2 對(duì)病死水貂的綜合診斷 對(duì)在試驗(yàn)過程中死亡的水貂從臨床癥狀、剖檢變化、病理組織學(xué)、病毒形態(tài)學(xué)觀察等方面對(duì)病死水貂作出綜合診斷。

2 結(jié)果

2.1 中和抗體效價(jià)

幼貂在30日齡抗CDV母源中和抗體效價(jià)較高，效價(jià)等于或大于1:18.6；幼貂在45日齡母源抗體均較低，血清抗CDV中和抗體效價(jià)等于或小于1:19.1；幼貂在60日齡抗CDV母源中和抗體基本消失，血清抗CDV中和抗體效價(jià)等于或小于1:8.0。母源抗體隨著日齡的增加逐漸下降，甚至消失。見表1。

表1 幼貂抗CDV母源中和抗體 (log2)

2.2 對(duì)死亡水貂的診斷結(jié)果

6、15、16及19號(hào)幼貂在試驗(yàn)過程中死亡，出現(xiàn)CDV感染的典型臨床癥狀，病初鼻鏡發(fā)干，流漿液性鼻涕，眼結(jié)膜充血潮紅，淌眼淚，伴有輕度的咳嗽，體溫升高。隨著病程的發(fā)展，鼻鏡出現(xiàn)龜裂，流膿性鼻涕，咳喘加重，有膿性眼屎。

對(duì)病死水貂進(jìn)行解剖，氣管黏膜有出血，肺部有米粒大圓點(diǎn)樣出血，甚者發(fā)生實(shí)變；胃底部有彌漫性出血，十二指腸、空腸前段點(diǎn)狀或彌漫性出血，回盲口有潰瘍，甚者整個(gè)腸道彌漫性出血；肝臟有點(diǎn)狀出血；膀胱黏膜點(diǎn)狀或彌漫性出血，腎臟實(shí)質(zhì)點(diǎn)狀出血；有神經(jīng)癥狀的病死犬解剖腦膜點(diǎn)狀出血及腦實(shí)質(zhì)點(diǎn)狀出血。在氣管黏膜上皮細(xì)胞和膀胱粘膜上皮細(xì)胞胞漿內(nèi)和核內(nèi)見到包涵體。對(duì)病料進(jìn)行處理后，用0.5%磷鎢酸進(jìn)行負(fù)染，電鏡觀察。能夠觀察到CDV病毒粒子。診斷結(jié)果表明這4只幼貂是感染CDV而發(fā)病死亡。

3 討論

母源抗體的被動(dòng)免疫對(duì)新生動(dòng)物是十分重要的，然而對(duì)疫苗的接種也帶來一定的影響，若免疫接種時(shí)間過早，母源抗體的干擾易造成CD免疫失敗，嚴(yán)重影響免疫效果，若免疫接種時(shí)間過晚，則動(dòng)物易出現(xiàn)CD免疫空白期，動(dòng)物易于感染CDV。為此，弄清幼貂抗CDV母源中和抗體的消長規(guī)律有很重要的意義。對(duì)20只未進(jìn)行免疫接種的健康幼貂的檢測結(jié)果，在30日齡絕大多數(shù)幼貂抗CDV母源中和抗體效價(jià)在1:30.0以上，僅有2只幼貂的抗CDV的母源中和抗體效價(jià)小于1:30.0，這表明絕大多數(shù)幼貂在30日齡抗CDV的母源中和抗體效價(jià)較高，如此時(shí)對(duì)幼貂進(jìn)行CD免疫，母源抗體會(huì)嚴(yán)重干擾CD的免疫效果，易造成免疫失敗；幼貂在45日齡母源抗體均較低，血清抗CDV中和抗體效價(jià)小于1:20.0，盡管此時(shí)母源抗體也會(huì)影響CD的免疫，但是免疫能夠獲得成功；幼貂在60日齡母源抗體基本消失，血清抗CDV中和抗體效價(jià)等于或小于1:8.0，若此時(shí)進(jìn)行免疫能獲得良好的免疫效果，但是一些幼貂在60日齡前會(huì)有一段免疫空白期，在免疫空白期幼貂易于感染CDV而發(fā)病，這可能是4、15、16及19號(hào)幼貂感染CDV發(fā)病死亡的原因。根據(jù)上述分析，在45日齡對(duì)幼貂進(jìn)行CD免疫接種較好，此時(shí)進(jìn)行CD免疫接種能夠避免免疫空白期的出現(xiàn)，同時(shí)又能獲得較好的免疫效果，這與幼狐的抗CDV母源抗體消長規(guī)律基本相似[4]。

[1] Gassen U, Collins FM, Duprex WP, et al. Establishment of a rescue system for canine distemper virus. J Virol 2000 Nov;74(22): 10737-44.

[2] Franke-V; Matern-B; Ackermann-O; et al.The prevention of distemper in zoo animals. Berl-Munch-Tierarztl-Wochenschr. 1989 Feb 1; 102(2): 56-8.

[3] Tizard-I. Grease, anthraxgate, and kennel cough: a revisionist history of early veterinary vaccines. Adv-Vet-Med. 1999; 41: 7-24.

[4] 楊篤寶, 雷留真, 謝之景等. 幼狐犬瘟熱母源抗體消長規(guī)律的測定[J]. 山東畜牧獸醫(yī). 2009, 8: 9-10.

S858.92

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1007-1733(2013)09-0010-02

2013–06–13）

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