張 倩 楊培培 劉明團(tuán) （山東省青島市畜牧獸醫(yī)研究所 266100）

青島地區(qū)豬偽狂犬病血清學(xué)調(diào)查

張 倩 楊培培 劉明團(tuán) （山東省青島市畜牧獸醫(yī)研究所 266100）

應(yīng)用血清學(xué)方法對(duì)從青島4個(gè)地區(qū)8個(gè)規(guī)?；i場(chǎng)和10個(gè)養(yǎng)殖戶采集血清進(jìn)行豬偽狂犬病調(diào)查。結(jié)果表明，有3個(gè)規(guī)?；i場(chǎng)7個(gè)養(yǎng)殖戶出現(xiàn)野毒感染抗體陽(yáng)性，豬偽狂犬gB-ELISA試劑盒檢驗(yàn)陽(yáng)性率為91.5%，gE-ELISA試劑盒檢驗(yàn)抗體陽(yáng)性率為15.42%，表明豬偽狂犬病在山東地區(qū)豬群中流行范圍仍然很廣。

偽狂犬病(PR)是由偽狂犬病病毒引起家畜和多種野生動(dòng)物的一種急性、熱性傳染病。典型癥狀表現(xiàn)為發(fā)熱、奇癢及腦脊髓炎。本病對(duì)豬的危害最大，可導(dǎo)致妊娠母豬流產(chǎn)、產(chǎn)死胎和木乃伊胎；初生仔豬具有明顯的神經(jīng)癥狀，急性致死。目前本病在世界范圍內(nèi)普遍發(fā)生，已有50 多個(gè)國(guó)家和地區(qū)報(bào)道發(fā)生PR。隨著規(guī)?；B(yǎng)豬的不斷發(fā)展和強(qiáng)毒株的出現(xiàn)，PR 的發(fā)生和流行日趨嚴(yán)重，現(xiàn)已成為對(duì)全球養(yǎng)豬業(yè)危害最大的傳染病之一，每年給養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。為了解近年來(lái)青島地區(qū)豬場(chǎng)中PRV的感染情況，本試驗(yàn)采用PRV gE-ELISA、gBELISA抗體檢測(cè)試劑盒對(duì)青島規(guī)?；i場(chǎng)進(jìn)行PRV 血清抗體檢測(cè)，為該病的防控提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 待檢血清 2013年1～6月，采集青島即墨、平度、膠州、萊西等4個(gè)地區(qū)的8個(gè)不同規(guī)模豬場(chǎng)和10個(gè)養(yǎng)殖戶，合計(jì)1070份血清。其中仔豬(1～8周齡)血清347份，育肥豬(9周齡以上至出欄)血清291份，后備母豬(9周齡以上～初次配種)血清139份，種公豬血清58份，種母豬血清235份。采集的血清樣本置于-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 試劑 豬偽狂犬病病毒gE-ELISA、gB-ELISA抗體檢測(cè)試劑盒，購(gòu)自美國(guó)IDEXX公司。

1.3 方法 按試劑盒操作說(shuō)明進(jìn)行：(1）將經(jīng)2倍稀釋后的待檢血清加入到預(yù)包被抗原的ELISA板內(nèi)，100μl/孔，同時(shí)設(shè)立陽(yáng)性和陰性對(duì)照孔。（2）室溫孵育1h。（3）加入洗滌液洗滌3次。（4）每孔加入l00μl HRP標(biāo)記的PRVgE/gB抗體，室溫孵育20min。（5）加入洗滌液，重復(fù)步驟（3）。（6）每孔加入l00μl TMB底物顯色液，室溫下避光顯色10～15min。（7）每孔加入50μl終止液，使反應(yīng)終止。（8）酶標(biāo)儀上測(cè)650nm處的OD值，并記錄結(jié)果。

1.4 結(jié)果判定 當(dāng)陰性對(duì)照平均值減去陽(yáng)性對(duì)照平均值大于或等于0.3 時(shí)，判為試驗(yàn)成立，否則應(yīng)重新測(cè)定。在試驗(yàn)成立的前提下，若S/N≤0.6，判為陽(yáng)性血清；若0.6＜S/N≤0.7，判為可疑；若S/N＞0.7，判為陰性血清。

2 結(jié)果

2.1 不同地區(qū)PRV抗體陽(yáng)性率 采用ELISA 方法，對(duì)采集的8個(gè)不同規(guī)模豬場(chǎng)和10個(gè)養(yǎng)殖戶合計(jì)1070份血清進(jìn)行PRV 抗體檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，PRV gB抗體陽(yáng)性血清樣品共979份，抗體平均陽(yáng)性率為91.5%，gE抗體陽(yáng)性的血清樣品共163份，抗體平均陽(yáng)性率為15.23%。各地區(qū)的抗體陽(yáng)性率差異不大，具體結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 不同地區(qū)豬偽狂犬病抗體檢測(cè)結(jié)果 (%)

2.2 不同日齡PRV抗體陽(yáng)性率 根據(jù)各地區(qū)PRV 野毒抗體的檢測(cè)結(jié)果，分析不同日齡豬群與PRV 野毒抗體陽(yáng)性率高低的關(guān)系。結(jié)果顯示，不同日齡豬PRV 野毒抗體陽(yáng)性率存在一定的差異：種母豬的抗體陽(yáng)性率最高，為21.70%；其次是后備母豬、種公豬及育肥豬，陽(yáng)性率分別為17.98%，15.52%和14.08%；仔豬的PRV野毒抗體陽(yáng)性率最低，為10.66%。具體結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 不同日齡豬偽狂犬抗體檢測(cè)結(jié)果 (%)

3 討論

（1）豬偽狂犬病是當(dāng)前我國(guó)規(guī)模化豬場(chǎng)主要的威脅性疫病之一，給我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。本次調(diào)查采樣豬場(chǎng)全部免疫過(guò)偽狂犬病毒gE基因缺失苗的。調(diào)查顯示，養(yǎng)殖戶的豬群野毒感染率明顯高于規(guī)模化豬場(chǎng)，各地區(qū)豬場(chǎng)PRV野毒抗體陽(yáng)性率差異不大，抗體平均陽(yáng)性率為15.23%。反應(yīng)了大部分規(guī)?；i場(chǎng)在使用豬偽狂犬病毒gE基因缺失苗后對(duì)于豬偽狂犬病毒野毒感染的控制取得了一定的效果。調(diào)查還顯示，種母豬的抗體陽(yáng)性率最高，為21.70%，這表明母豬的帶毒現(xiàn)象仍然嚴(yán)重，PRV野毒感染仍然是導(dǎo)致母豬繁殖障礙疾病的重要病原之一，應(yīng)引起各養(yǎng)豬場(chǎng)的重視。建議進(jìn)一步加強(qiáng)豬場(chǎng)PRV野毒感染的生物安全控制，特別是檢測(cè)呈陽(yáng)性的豬場(chǎng)或養(yǎng)殖戶，應(yīng)進(jìn)行全面的定期監(jiān)測(cè)普查，及時(shí)清除PRV野毒感染豬只，使豬群逐步得到凈化。（2）通過(guò)對(duì)豬場(chǎng)gB抗體的檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，雖然都免疫過(guò)疫苗，但抗體的水平卻達(dá)不到100%，說(shuō)明豬場(chǎng)接種了豬偽狂犬病疫苗后，還會(huì)有少數(shù)豬發(fā)生偽狂犬病。其原因可能與疫苗的質(zhì)量和豬的個(gè)體差異有關(guān)，也可能與豬群中存在免疫抑制性疾病等因素有關(guān)。豬場(chǎng)應(yīng)通過(guò)定期監(jiān)測(cè)適時(shí)補(bǔ)免，或使用鑒別ELISA檢測(cè)進(jìn)行凈化，同時(shí)也要加強(qiáng)其他疫病特別是豬瘟、藍(lán)耳病、圓環(huán)病等疫病的檢測(cè)。豬偽狂犬gBELISA檢測(cè)不能鑒別疫苗毒與野毒感染，因此對(duì)未免疫豬場(chǎng)可作為疫病檢測(cè)和凈化的參考。對(duì)于免疫過(guò)基因缺失疫苗的豬場(chǎng)，gE-ELISA檢測(cè)則可用于該病的血清學(xué)診斷和凈化。

S858.28

A

1007-1733(2013)12-0052-02

2013–09–22）