陳 萍 孟 巍 許瑞利 張忠花 （山東省棗莊市市中區(qū)畜牧獸醫(yī)局 277100）

劉 華 （山東省棗莊市市中區(qū)永安鄉(xiāng)政府）

棗莊市市中區(qū)奶牛結(jié)核病流行病學(xué)調(diào)查

陳 萍 孟 巍 許瑞利 張忠花 （山東省棗莊市市中區(qū)畜牧獸醫(yī)局 277100）

劉 華 （山東省棗莊市市中區(qū)永安鄉(xiāng)政府）

為全面了解棗莊市市中區(qū)奶牛結(jié)核病的發(fā)生現(xiàn)狀，采用發(fā)放調(diào)查問卷和進行牛型結(jié)核分枝桿菌PPD皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)試驗相結(jié)合的方式，對市中區(qū)6個鄉(xiāng)鎮(zhèn)奶牛進行結(jié)核病流行情況調(diào)查，共發(fā)放調(diào)查問卷41份，檢測奶牛333頭。調(diào)查結(jié)果顯示：被調(diào)查的養(yǎng)殖戶有48.78%對結(jié)核病有所了解，有51.22%不了解甚至不知道；本次調(diào)查檢測的所有奶牛牛型結(jié)核分枝桿菌PPD皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)試驗均為陰性；但市中區(qū)目前存在牛結(jié)核病傳入風(fēng)險。

牛結(jié)核病是由牛分枝桿菌(Mycobacterium.bovis)引起的一種人獸共患的慢性消耗性傳染病[1]，該病因其易傳染，一年四季均可發(fā)生，呈世界性流行，且能通過奶制品傳染給人和犢牛，危害嚴(yán)重，被世界動物衛(wèi)生組織(OI E)定為B類動物傳染病，我國將其列為二類動物疫病[2]。

目前，國內(nèi)外用于診斷牛結(jié)核病的檢測方法大體上可分為三類：第一類是細(xì)菌學(xué)檢查法，如涂片染色鏡檢、細(xì)菌培養(yǎng)等。涂片染色操作方法簡便，是較為普遍應(yīng)用于發(fā)現(xiàn)和防治結(jié)核病傳染源的重要診斷依據(jù)。但由于此法檢出的細(xì)菌只能說明有抗酸桿菌, 而不能準(zhǔn)確地鑒定出結(jié)核分枝桿菌和非典型分枝桿菌，因此缺乏特異性[3]；結(jié)核菌培養(yǎng)法，由于結(jié)核生長緩慢，一般需要10～30d才能看到菌落[4]且有10%～20%的病例結(jié)核菌培養(yǎng)失敗[5-6]，種種條件影響，致使結(jié)核菌培養(yǎng)率較難提高，在臨床診斷中不易展開推廣。第二類是免疫學(xué)方法，如皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)、膠體金和ELISA等方法。這些方法已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于結(jié)核病的臨床診斷。膠體金和ELISA檢測雖然簡單易行，但目前試劑價格昂貴，大規(guī)模實施成本過高。第三類是分子生物學(xué)方法。分子生物學(xué)方法具有敏感、特異等特點，但由于需要特殊的儀器設(shè)備，技術(shù)相對復(fù)雜，對實驗室條件和操作人員的要求比較高，只適用于實驗室研究，還不能夠用于基層的推廣應(yīng)用。迄今為止，皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)診斷仍被世界各國廣泛使用，是世界動物衛(wèi)生組織推薦的診斷牛結(jié)核病的唯一方法[7]。

1 調(diào)查方法

發(fā)放奶牛結(jié)核病流行病學(xué)調(diào)查問卷41份，涉及全區(qū)6個鄉(xiāng)鎮(zhèn)共計41戶奶牛養(yǎng)殖場戶。進行PPD皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)試驗。

2 結(jié)果與分析

本次奶牛結(jié)核病流行病學(xué)調(diào)查問卷結(jié)果匯總見表1。

表1 牛結(jié)核病流行病學(xué)調(diào)查問卷結(jié)果匯總

由表1可知，本次調(diào)查的所有奶牛養(yǎng)殖場戶均有3年以上的養(yǎng)殖經(jīng)驗，但只有48.78%對結(jié)核病有所了解，其余51.22%不了解甚至不知道。有19.51%發(fā)現(xiàn)過自家奶牛出現(xiàn)消瘦、咳嗽的癥狀。在本次調(diào)查中，有63.41%是從外地引購奶牛，其中60.98%購買的奶牛有檢疫證。有31.71%是雇人擠奶。92.68%養(yǎng)殖場戶對飼養(yǎng)場進行定期消毒，7.32%養(yǎng)殖場戶從不消毒。僅有36.58%養(yǎng)殖場戶進行過實驗室檢測。調(diào)查中70.73%養(yǎng)殖場戶愿意配合并接受相關(guān)部門的檢測。

2.1 牛型結(jié)核分枝桿菌PPD皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)試驗

2.1.1 試驗材料 結(jié)核菌素：哈藥集團生物疫苗有限公司生產(chǎn)，批準(zhǔn)文號獸藥生字(2006)080078024。游標(biāo)卡尺(精度為0.02mm)、毛剪、酒精棉、1ml注射器、工作服、一次性帽子、一次性口罩、膠靴、記錄表等。實驗牛群：市中區(qū)所有奶牛場戶100%進行抽樣，根據(jù)場戶的規(guī)模大小計算抽樣數(shù)量。具體抽樣數(shù)量見表2。

表2 市中區(qū)奶牛場戶抽樣數(shù)量 (頭)

2.1.2 試驗方法 （1）操作方法：注射部位及術(shù)前處理：將牛只編號后在頸側(cè)中部上1/3處剪毛(或提前1d剃毛)，3個月以內(nèi)的犢牛，也可在肩胛部進行，直徑約10cm。用卡尺測量術(shù)部中央皮皺厚度，作好記錄。注意術(shù)部應(yīng)無明顯的病變。注射劑量：不論大小牛只，一律皮內(nèi)注射0.1ml(含2000IU)。即將牛型結(jié)核分枝桿菌PPD稀釋成每毫升含2萬IU后，皮內(nèi)注射0.1ml。凍干PPD稀釋后當(dāng)天用完。注射方法：先以75%酒精消毒術(shù)部，然后皮內(nèi)注射定量的牛型結(jié)核分枝桿菌PPD，注射后局部應(yīng)出現(xiàn)小皰，如對注射有疑問時，應(yīng)另選15cm以外的部位或?qū)?cè)重做。注射次數(shù)和觀察反應(yīng)：皮內(nèi)注射后經(jīng)72h判定，仔細(xì)觀察局部有無熱痛、腫脹等炎性反應(yīng)，并以卡尺測量皮皺厚度，作好詳細(xì)記錄。對疑似反應(yīng)牛應(yīng)立即在另一側(cè)以同一批PPD同一劑量進行第二回皮內(nèi)注射，再經(jīng)72h觀察反應(yīng)結(jié)果。對 陰性牛和疑似反應(yīng)牛，于注射后96h和120h再分別觀察1次，以防個別牛出現(xiàn)較晚的遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)。②結(jié)果判定：陽性反應(yīng)：局部有明顯的炎性反應(yīng)，皮厚差大于或等于4.0mm；疑似反應(yīng)：局部炎性反應(yīng)不明顯，皮厚差大于或等于2.0mm、小于4.0mm；陰性反應(yīng)：無炎性反應(yīng)。皮厚差在2.0mm以下。但只要有一定炎性腫脹，即使皮厚差在2.mm以下仍應(yīng)判為可疑。凡判定為疑似反應(yīng)的牛，于第一次檢疫60d后進行復(fù)檢，其結(jié)果仍為疑似反應(yīng)時，經(jīng)60d再復(fù)檢，如仍為疑似反應(yīng)應(yīng)判為陽性。

2.2 奶牛結(jié)核病初檢及可疑病例復(fù)檢結(jié)果

見表3。

表3 奶牛結(jié)核病初檢及可疑病例復(fù)檢結(jié)果 (頭)

從表3可以看出，對于初檢結(jié)果可疑的5頭奶牛，間隔60d做復(fù)查，結(jié)果5頭均判定為陰性。根據(jù)GB/T18645-2002動物結(jié)核病診斷技術(shù)相關(guān)判定標(biāo)準(zhǔn)可判定，最終對可疑牛只的復(fù)查結(jié)果為陰性。

2.2.3 奶牛結(jié)核病調(diào)查統(tǒng)計結(jié)果

見表4。

表4 奶牛結(jié)核病調(diào)查統(tǒng)計結(jié)果 (戶、頭、%)

從表4可以看出，本次檢測的全區(qū)6個鄉(xiāng)鎮(zhèn)41戶333頭奶牛，未出現(xiàn)結(jié)核陽性病例。

3 討論

（1）通過本次發(fā)放奶牛結(jié)核病調(diào)查問卷發(fā)現(xiàn)，奶牛養(yǎng)殖場戶對結(jié)核病防治知識了解少，自我防護能力差，被調(diào)查者中，僅有48.78%的養(yǎng)殖戶聽說過該病，多數(shù)不了解結(jié)核病相關(guān)防治知識，必須提高養(yǎng)殖場戶對布解結(jié)核病危害的認(rèn)識，加大結(jié)核防治知識的宣傳力度，使養(yǎng)殖場戶具備自我防范結(jié)核病的自覺性。（2）本次檢測的所有奶牛牛型結(jié)核分枝桿菌PPD皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)試驗均為陰性，但從外地購買奶牛、購買奶牛無檢疫證以及雇人擠奶，這些都使市中區(qū)存在結(jié)核病傳入風(fēng)險，下一步要加強調(diào)入管理，防止疫病傳入，嚴(yán)格執(zhí)行跨省調(diào)入動物審批制度，堅決杜絕從疫區(qū)調(diào)入奶牛。調(diào)入的奶牛必須要經(jīng)調(diào)出地動物衛(wèi)生監(jiān)督機構(gòu)檢測合格，調(diào)到本地后，要采取完善的隔離措施，隔離飼養(yǎng)45d后方可混群飼養(yǎng)；要加強檢疫督查，對牲畜交易市場、農(nóng)貿(mào)市場加大檢疫督查力度，嚴(yán)禁未經(jīng)檢疫牲畜及產(chǎn)品進入市場，將傳入風(fēng)險降至最低。（3）接受調(diào)查的養(yǎng)殖場戶中，有少部分場戶從不消毒，下一步要監(jiān)督健全市中區(qū)防疫制度，嚴(yán)格衛(wèi)生消毒，科學(xué)防控。（4）市中區(qū)在結(jié)核病在監(jiān)測等防控方面還存在不足，未來要堅持定期檢測。

[1] Ahmed N,Mohanty A K,Mukhopadhyay U, et al.PCR-based rapid detection of Mycobacterium tuberculosis in blood from immunocompetent patients with pulmonary tuberculosis[J]. Journal of Clinical Microbiology, 1998, 36(10)∶ 3094-3095.

[2] 王忠仁. 牛結(jié)核病與人結(jié)核病的相互關(guān)系[J]. 中國防癆雜志，2005, 27(2)∶ 123-125.

[3] 王云霞, 于三科, 翟軍軍. 牛結(jié)核病的現(xiàn)狀及診斷研究進展[J]. 動物醫(yī)學(xué)進展, 2006, 27(6)∶ 38-41.

[4] 陸承平. 獸醫(yī)微生物學(xué)(第3版)[M]. 北京∶ 中國農(nóng)業(yè)出版社, 2001.

[5] 何萍, 李旭東. 結(jié)核桿菌的檢驗方法進展[J]. 中華現(xiàn)代臨床醫(yī)藥雜志, 2004, 5(4)∶ 79-80.

[6] LaBombardi V J. Comparison of the ESP and BACTEC systems for testing susceptibilities of Mycobacterium tuber culosis complex isolates to pyrazinamide[J]. J Clin Microbiol,2002,40(6)∶2238-2239.

[7] 李金嶺, 郭宏軍, 王麗艷等. 國內(nèi)外牛結(jié)核病的防制現(xiàn)狀及檢測手段[J]. 獸醫(yī)導(dǎo)刊, 2007, 124(12)∶ 18.

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