裴蘭英 （聊城大學(xué)農(nóng)學(xué)院 山東 聊城 252059） 王俊海 （山東省聊城市畜牧站）田中杰 （河南出入境檢驗(yàn)檢疫局 河南 鄭州）

馬立克氏病雞外周血HSP70抗體滴度變化研究

裴蘭英 （聊城大學(xué)農(nóng)學(xué)院 山東 聊城 252059） 王俊海 （山東省聊城市畜牧站）田中杰 （河南出入境檢驗(yàn)檢疫局 河南 鄭州）

通過(guò)人工攻毒建立雞馬立克氏病腫瘤模型。利用ELISA方法，研究腫瘤發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中，外周血HSP70抗體水平的變化。結(jié)果顯示：攻毒21、28d時(shí)，各組試驗(yàn)雞外周血HSP70抗體水平差異不顯著(P＞0.05)，攻毒35d后，攻毒組雞外周血HSP70抗體水平顯著低于(P＜0.05)疫苗組和空白組。

馬立克氏病 ELISA HSP70抗體

惡性腫瘤已成為導(dǎo)致我國(guó)城鄉(xiāng)居民因病死亡的一個(gè)重要原因。對(duì)腫瘤發(fā)生的機(jī)理和防治措施的研究是近現(xiàn)代醫(yī)學(xué)界科研工作的熱點(diǎn)和難點(diǎn)。HSP(Heat Shock Protein，HSP)是生物圈中最為保守的蛋白分子之一，近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，HSP在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移過(guò)程中發(fā)揮著重要作用[1,2,3]。對(duì)臨床病例及腫瘤細(xì)胞體的研究表明，發(fā)生腫瘤時(shí)，HSP的表達(dá)量發(fā)生劇烈變化，同時(shí)，有研究表明HSPs對(duì)腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)和存活起重要作用[4]，且發(fā)生腫瘤時(shí)，患者外周血HSP的抗體水平發(fā)生顯著變化

[5]。但有關(guān)腫瘤的發(fā)生發(fā)展與外周血HSPs抗體水平之間的動(dòng)態(tài)相關(guān)性未見(jiàn)報(bào)道。本試驗(yàn)通過(guò)人工攻毒的方式，建立雞馬立克氏病動(dòng)物模型，定期剖殺試驗(yàn)用雞，采取外周血，分離血清，利用ELISA方法，動(dòng)態(tài)研究腫瘤發(fā)生、發(fā)展與試驗(yàn)雞外周血HSP70抗體水平之間的相關(guān)性，對(duì)探索HSPs作為腫瘤發(fā)生的預(yù)警作用提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物和試劑

1.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物 200只1日齡SPF來(lái)杭雞由聊城某SPF雞場(chǎng)提供。在溫控實(shí)驗(yàn)動(dòng)物房條件下進(jìn)行飼養(yǎng)，試驗(yàn)雞由專人飼養(yǎng)管理。

1.1.2 主要試劑 雞HSP70抗體檢測(cè)試劑盒，購(gòu)買于武漢華美生物工程有限公司。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 試驗(yàn)分組及取樣 試驗(yàn)分攻毒組、疫苗組和空白組。試驗(yàn)雞分別在21、28、35、42、49日齡分5批進(jìn)行剖殺，采取外周血，分離血清，-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 血清最佳稀釋倍數(shù) 利用攻毒組和空白組雞血清分別進(jìn)行1∶5、1∶10和1∶50稀釋，按試劑盒說(shuō)明書(shū)步驟進(jìn)行檢測(cè)，每個(gè)稀釋度兩個(gè)重復(fù)，尋找最佳稀釋比例。

1.2.3 試驗(yàn)樣品檢測(cè) 試驗(yàn)樣品按最佳稀釋比例進(jìn)行稀釋，按說(shuō)明書(shū)步驟進(jìn)行如下操作。加樣50μl/孔→37℃溫育30min→洗板5次(2min/次)→加辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記抗雞IgG工作液50μl/孔，37℃溫育30min→洗板同上→加底物液90μl/孔，37℃避光30min→加終止液50μl/孔→酶聯(lián)儀450nm檢測(cè)。

1.2.4 分析及統(tǒng)計(jì) 利用軟件SPSS進(jìn)行t檢驗(yàn)，判定組間HSP70抗體水平的差異顯著性。

2 結(jié)果與分析

2.1 血清最佳稀釋倍數(shù)

表1 血清稀釋倍數(shù)

從表1可以看出，1∶10稀釋比例兩組所測(cè)數(shù)據(jù)比值最大，差異顯著(P＜0.05)，因此采用1∶10稀釋。

2.2 樣品檢測(cè)

表2 血清樣品HSP70抗體檢測(cè)結(jié)果 (log2)

從表2可以看出，在21和28日齡時(shí)，各試驗(yàn)組雞外周血HSP70抗體滴度差異不顯著，在35日齡后，攻毒組試驗(yàn)雞外周血HSP70抗體滴度顯著低于疫苗組和空白組試驗(yàn)雞。

3 討論

近年來(lái)大量研究發(fā)現(xiàn)，HSPs在某些腫瘤組織中的表達(dá)與在正常組織中的表達(dá)不同，并且在某些腫瘤中會(huì)出現(xiàn)針對(duì)某些HSPs的自身抗體。因此，人們希望通過(guò)腫瘤組織中某些HSPs或其特異性抗體的測(cè)定對(duì)腫瘤進(jìn)行診斷和預(yù)后。在研究女性生殖道惡性病變中HSP的自身免疫與預(yù)后關(guān)系時(shí)，發(fā)現(xiàn)婦科惡性病變患者中有40.6%能夠檢測(cè)到針對(duì)HSP27的自身抗體，顯著高于良性炎性病患者(4.3%)和健康女性(3.4%)的檢出率。在本試驗(yàn)中檢測(cè)了腫瘤發(fā)生過(guò)程中外周血HSP70抗體滴度的變化，發(fā)現(xiàn)在35日齡后，攻毒組雞外周血HSP70抗體滴度顯著低于空白組和疫苗組雞，也許是因?yàn)樵?5日齡后，攻毒組雞才發(fā)生大量的腫瘤。該結(jié)果與以往報(bào)道的不符，其具體機(jī)制還需進(jìn)一步研究。

[1].Hightower L E, Hendershot L M. Molecular chaperones and the heat shock response at Cold Spring Harbor. Cell Stress Chaperones, 1997,2∶1-11.

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[3].So A, Hadaschik B, Sowery R, et al. The role of stress proteins in prostate cancer. Curr Genomics, 2007, 8(4)∶ 252-261.

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