朱南霖， 許 菊

（1.內(nèi)蒙古大學，內(nèi)蒙古呼和浩特010021；2.紹興市食品藥品檢驗所，浙江紹興 312071）

牛黃消炎片中非法成分土大黃苷的檢測

朱南霖1， 許 菊2*

（1.內(nèi)蒙古大學，內(nèi)蒙古呼和浩特010021；2.紹興市食品藥品檢驗所，浙江紹興 312071）

目的 建立牛黃消炎片中非法成分土大黃苷的檢測方法。方法 采用薄層色譜法對牛黃消炎片中有可能投入的偽品大黃中的土大黃苷成分進行薄層鑒別；采用高效液相色譜-二極管陣列檢測法對土大黃苷成分作進一步定性鑒別。結(jié)果 對牛黃消炎片中存在的非法成分土大黃苷能有效檢測。結(jié)論 該方法操作簡便，靈敏可靠，可用于牛黃消炎片中非法成分土大黃苷的檢查。

牛黃消炎片；土大黃苷；TLC；HPLC

牛黃消炎片為收載于《中國藥典》的中成藥［1］，其處方由人工牛黃、珍珠母、蟾酥、青黛、大黃、天花粉、雄黃組成，其中的大黃目前市場中存在多個《中國藥典》收載品種以外的混偽品，并存在充正品投料的現(xiàn)象，這些混偽品大多含有土大黃苷成分，而有3個植物來源 （掌葉大黃、唐古特大黃和藥用大黃）的正品大黃不含有此成分［2-4］。近年國家食品藥品監(jiān)督管理局尚有對含大黃成分的中成藥 （如牛黃解毒片、炎可寧片等）檢查土大黃苷的藥品檢驗補充檢驗方法頒布［5］，但尚無牛黃消炎片中檢測非法成分土大黃苷的補充檢驗方法，也未見有關(guān)報道。為此，通過查閱相關(guān)文獻［6-12］，采用薄層色譜法和高效液相色譜法，建立了牛黃消炎片中土大黃苷成分的檢測方法，可方便的檢查出投料大黃的真?zhèn)吻闆r?，F(xiàn)將檢測方法介紹如下，以供質(zhì)量控制參考。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 高效液相色譜儀：Agilent 1200高效液相色譜儀，檢測器為二極管陣列 （DAD）檢測器。

1.2 試藥 土大黃苷對照品 （批號110794-201105，購自中國藥品生物制品檢定所）；大黃對照藥材 （唐古特大黃，批號120902-200609，購自中國藥品生物制品檢定所）；牛黃消炎片由哈爾濱某制藥有限公司生產(chǎn) （批號：20100101）；甲醇、乙腈為色譜純，水為高純水；硅膠G預制板；聚酰胺薄膜；其它試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 土大黃苷的薄層檢查

2.1.1 供試樣品溶液制備 樣品去糖衣，研細，取0.5 g，置錐形瓶中，加甲醇10 mL，超聲處理20min，濾過，濾液作為供試樣品溶液。

2.1.2 陰性樣品溶液制備 按牛黃消炎片的處方組成制得陰性樣品，取0.5 g，同2.1.1項供試品溶液制備法，制得陰性樣品溶液。

2.1.3 大黃對照溶液制備 取大黃對照藥材0.1 g，同2.1.1項供試品溶液制備法，制得大黃對照溶液。

2.1.4 土大黃苷對照品溶液制備 取土大黃苷對照品，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作為對照品溶液。

2.1.5 薄層色譜條件與檢出 采用3個不同的展開系統(tǒng)進行實驗。展開系統(tǒng)①：硅膠G薄層板，以丁酮-乙酸乙酯-甲酸-水 （7∶10∶1∶1）為展開劑。展開系統(tǒng)②：硅膠G薄層板，以三氯甲烷-甲醇-水 -甲酸 （20∶6∶0.6∶0.4）為展開劑。展開系統(tǒng)③：聚酰胺薄膜，以甲苯-甲酸乙酯-丙酮-甲醇-甲酸 （15∶2.5∶2.5∶10∶0.05）為展開劑。點樣量：供試品溶液、對照品溶液、大黃對照溶液和陰性樣品溶液各5μL。檢出方法：展開，取出，晾干后，置紫外光燈（365 nm）下檢視。結(jié)果供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，均顯相同持久藍紫色的熒光斑點；陰性樣品溶液、大黃對照溶液對土大黃苷檢出無干擾。薄層的色譜圖見圖1。

圖1 薄層色譜圖

2.2 高效液相色譜法 （HPLC法）

2.2.1 色譜條件 色譜柱Atlantis d-C18（4.6 mm×150 mm，5 μm），柱溫35℃，流動相為甲醇-乙腈-水 （25∶7∶68），檢測波長324 nm；進樣量10 μL。

2.2.2 供試樣品溶液的制備 樣品去糖衣，研細，取1 g，置燒瓶中，加乙酸乙酯30 mL，加熱回流30 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇25 mL溶解，溶液高速離心，取上清液作為供試樣品溶液。

2.2.3 陰性樣品溶液的制備 取按牛黃消炎片處方組成制得的陰性樣品1 g，同2.2.2項供試品溶液制備法，制得陰性樣品溶液。

2.2.4 土大黃苷對照品溶液的制備 取土大黃苷對照品適量，加甲醇制成每mL含50 μg的溶液，即得。

2.2.5 大黃對照溶液制備 取大黃對照藥材0.2 g，同2.2.2項供試品溶液制備法，制得大黃對照溶液。

2.2.6 樣品測試 取供試品溶液、陰性樣品溶液、大黃對照溶液及對照品溶液各10 μL，分別注入高效液相色譜儀中，記錄色譜圖。液相色譜圖見圖2。

圖2 HPLC圖

為進一步確認供試品溶液中出現(xiàn)的與土大黃苷對照品保留時間一致的色譜峰，利用DAD檢測器在200～400 nm對色譜峰進行了光譜掃描，結(jié)果二峰的光譜掃描圖相一致，相似度為99.9%。紫外光譜圖見圖3。

圖3 紫外光譜圖

3 討論

3.1 在薄層色譜檢查中，采用了3種不同的展開系統(tǒng)，其中使用聚酰胺薄膜時，土大黃苷的檢出靈敏度非常高，分離度也好，同一土大黃苷對照品在硅膠板上為一個斑點，而在聚酰胺薄膜上除主斑點外尚可見另2個斑點，久貯的對照品溶液不穩(wěn)定，主斑點會分解，出現(xiàn)主次顛倒現(xiàn)象，故對照品以新制為宜。

3.2 在高效液相色譜檢查中，供試品溶液制備時，對用甲醇和用乙酸乙酯為溶劑提取作了比較，用甲醇時土大黃苷色譜峰也能較好分離，但色譜中會有較多雜峰，用乙酸乙酯作溶劑提取相對較好。本實驗還考察了不同廠牌的液相儀 （Waters e2695高效液相色譜儀和Agilent 1100高效液相色譜儀）、不同品牌和型號的多根色譜柱 （Agilent SB-C18、Agilent XDB-C18、Diamonsil（TM）鉆石C18、Ultimate XB-C18等）的情況，尚對不同的流動相系統(tǒng)也進行了考察，有乙腈-甲醇-水 （7∶30∶63）和乙腈-水 （20∶80）等系統(tǒng)，均能獲得好的分離。

3.3 用上述建立的方法對從流通領(lǐng)域抽取的11批牛黃消炎片樣品 （分別由4家企業(yè)生產(chǎn)）進行了土大黃苷的檢測，結(jié)果其中有4批檢測出了土大黃苷，對于由同一企業(yè)生產(chǎn)的不同批次樣品，有的檢出有的未檢出，說明其投料的大黃部分存在偽品現(xiàn)象。通過對牛黃消炎片市場中同品種中土大黃苷的檢測，說明本檢測方法應該是可靠和有效的。

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［5］國家食品藥品監(jiān)督管理局藥品檢驗補充檢驗方法和檢驗項目批準件：2008013，2008015［S］.

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R927.1

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1001-1528（2013）04-0870-02

10.3969/j.issn.1001-1528.2013.04.060

2012-06-18

朱南霖 （1991—），女，本科，主要從事化學分析與研究工作。E-mail：5157421@163.com

*通信作者：許 菊 （1962—），女，主任中藥師，主要從事中藥質(zhì)量研究工作。Tel：（0575）88338271，E-mail：sxxuju@126.com