歐志英 夏慧敏

miRNA作為一類重要的參與基因表達(dá)調(diào)控的分子，代表了一種新的基因表達(dá)調(diào)控模式，它在細(xì)胞中調(diào)節(jié)約30%的蛋白編碼基因，在致病過程中起著重要作用。miRNA是1993年繼小干擾RNA(siRNA)后新發(fā)現(xiàn)的一類內(nèi)源性非編碼單鏈RNA分子，長約19～25 nt。從發(fā)現(xiàn)首個miRNA開始，短短十幾年時間，用生物信息學(xué)與分子克隆的方法已經(jīng)發(fā)現(xiàn)和證實了1921條人細(xì)胞編碼的miRNA （Sanger miRBase數(shù)據(jù)庫http://www.mirbase.org/）。miRNA在大多數(shù)真核生物中表達(dá)，如真菌、植物、動物[1]。miRNA通過阻斷翻譯或誘導(dǎo)靶mRNA降解，在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)節(jié)基因表達(dá)，從而精細(xì)地調(diào)節(jié)多種生物學(xué)過程，包括生長發(fā)育、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、免疫調(diào)節(jié)、細(xì)胞死亡、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞周期、細(xì)胞增殖及腫瘤發(fā)生等[2]。

miRNA作為大量靶基因的內(nèi)源性沉默子，在基因表達(dá)調(diào)控方面發(fā)揮著重要作用。近年來，越來越多的證據(jù)表明異常的miRNA表達(dá)是人類疾病的標(biāo)志，包括腫瘤。人類腫瘤miRNA表達(dá)模式與腫瘤診斷、分期、進(jìn)展、預(yù)后及對治療的反應(yīng)密切相關(guān)[3]。miRNA異常表達(dá)已在多種人類惡性腫瘤中被發(fā)現(xiàn)，而且與腫瘤的發(fā)生、預(yù)測、診斷、分期、進(jìn)程、治療和預(yù)后明顯相關(guān)。miRNA的研究將使人們更深入地理解腫瘤的發(fā)生、進(jìn)展、轉(zhuǎn)移、治療和預(yù)后監(jiān)測。差異表達(dá)的miRNA在疾病診斷和治療中的價值逐漸顯現(xiàn)，可作為疾病早期診斷、分子分型及預(yù)后判斷的指標(biāo)，同時也可成為多種腫瘤耐藥新的治療靶標(biāo)。因此，miRNA在多種腫瘤中可作為診斷性、預(yù)測性和治療性的生物標(biāo)志。

1 miRNA的檢測方法

目前檢測miRNA的方法有多種，如基因芯片、PCR芯片、熒光定量PCR、Northern Blot、原位雜交、下一代深度測序等。熒光定量PCR方法有基于鎖核酸技術(shù)和基于polyA加尾法的檢測技術(shù)。高通量檢測有miRNA芯片檢測、PCR芯片檢測及全基因組miRNA深度測序分析。miRNA芯片檢測、PCR芯片檢測適用于對已知的miRNA進(jìn)行分析和檢測。miRNA高通量測序采用新一代測序技術(shù)對基因組中指定大小的miRNA分子進(jìn)行高通量測序，無需知道m(xù)iRNA的序列信息就可以對miRNA的表達(dá)譜進(jìn)行分析。miRNA深度測序流程如圖1。

圖1 miRNA深度測序流程圖Figure 1 Technological process of miRNA deep sequencing

目前市面上較流行的基于鎖核酸技術(shù)的miRNA表達(dá)譜芯片集成了1921條人源miRNA，通過該芯片分析可檢測出各種miRNA的表達(dá)水平，即高表達(dá)或低表達(dá)，該方法是高通量的檢測方法，1塊芯片可對1921條人源miRNA同時檢測，miRNA芯片表達(dá)結(jié)果還需要熒光定量PCR進(jìn)行進(jìn)一步驗證。

PCR芯片是利用2塊384孔PCR反應(yīng)板進(jìn)行檢測，原理是用SYBR?Green染料熒光定量PCR。PCR反應(yīng)板上加入了特異性的miRNA引物對，1次可以檢測742條人源miRNA。第一塊板上集成了高表達(dá)、很可能是疾病差異表達(dá)并在文獻(xiàn)中經(jīng)常出現(xiàn)的miRNA引物對；第二塊板上集成了第一塊板上沒有的最重要的miRNA引物對。2塊PCR反應(yīng)板上都包含有校正內(nèi)對照和6條參考基因的檢測引物對：即3個小RNA參考基因（人源U6、SNORD38B和SNORD49A，鼠和兔來源的U6 snRNA、RNU5G和RNU1A1）和3個 miRNA參考基因（miR-103、miR-191和 hsa-miR-423-5p或 mmu-miR-423-3p）。

Alhasan等開發(fā)了一種分子熒光為基礎(chǔ)的檢測系統(tǒng)，即Scanometric miRNA（Scano-miR）檢測平臺[4]，可用于檢測相對低豐度的miRNA,具有高特異性和很好的重復(fù)性。特異性達(dá)到1個堿基錯配。ScanomiR可以檢測血清中1 fM濃度的miRNA。同一檢測條件下，88%低豐度的miRNA靶標(biāo)用其他方法不能檢測出來。應(yīng)用Scano-miR于高密度芯片模式表明它可用于不同來源標(biāo)本的高通量和多種miRNA表達(dá)模式檢測。研發(fā)人員用前列腺癌標(biāo)本評價了平臺系統(tǒng)的準(zhǔn)確性，前列腺癌相關(guān)的miRNA檢測準(zhǔn)確度達(dá)到98.8%，在miRNA生物標(biāo)志的表達(dá)模式、臨床鑒定和研究中，該技術(shù)的應(yīng)用前景廣闊。

miRNA熒光定量PCR和miRNA 芯片更多關(guān)注miRNA的表達(dá)和定量檢測，僅局限于檢測已知的miRNA，無法探知新的miRNA分子。采用下一代深度測序技術(shù)，能夠直接對樣本中指定大小的miRNA分子進(jìn)行高通量測序，可以在無需任何miRNA序列信息的前提下研究miRNA種類及其表達(dá)譜，亦可發(fā)現(xiàn)和鑒定新的miRNA分子，提供更加全面的miRNA表達(dá)研究方法，加快新miRNA的發(fā)現(xiàn)，是當(dāng)前miRNA表達(dá)研究最有力的工具。

2 miRNA在腫瘤診斷、預(yù)后判斷中的作用

miRNA是細(xì)胞中的非編碼RNA，是基因表達(dá)的關(guān)鍵調(diào)節(jié)子，調(diào)節(jié)多種細(xì)胞生物學(xué)過程，如細(xì)胞分化、細(xì)胞周期、細(xì)胞增殖、凋亡及血管生成，這些生物學(xué)過程在腫瘤形成中起重要作用，其表達(dá)模式的改變與腫瘤發(fā)生和進(jìn)展密切相關(guān)。miRNA通過與腫瘤形成有關(guān)的生物分子靶向結(jié)合，既可以作為腫瘤促進(jìn)子（tumor promoters，oncomiRs）促進(jìn)腫瘤生長，也可以作為腫瘤抑制子（tumor suppressors）抑制腫瘤生長。最近有研究表明miRNA在實體瘤和血液腫瘤中表達(dá)異常，這些獨特的高穩(wěn)定的miRNA表達(dá)模式似乎與年齡、種族無關(guān)，這些特點說明miRNA在腫瘤診斷和預(yù)后判斷中的應(yīng)用。miRNA異常表達(dá)與腫瘤的發(fā)生和進(jìn)展相關(guān)，某些miRNA表達(dá)逆轉(zhuǎn)可調(diào)節(jié)腫瘤的進(jìn)展，表明miRNA可作為潛在的抗腫瘤藥物靶標(biāo)。因此，miRNA既可作為腫瘤標(biāo)志，也可作為潛在的腫瘤新治療靶標(biāo)。血清miRNA具有豐富、高度穩(wěn)定的特點，最近在多種實體瘤中被描述為潛在的循環(huán)標(biāo)志，在腫瘤的早期診斷、分期、復(fù)發(fā)、預(yù)后判斷及對化療藥物的耐藥性或敏感性檢測等方面具有重要的指示作用。

2.1 miRNA與非小細(xì)胞肺癌診斷、血管生成

非小細(xì)胞肺癌是世界范圍的第一大死因，大多病例是在疾病的晚期才得到診斷。miR-15b和miR-27b能區(qū)分非小細(xì)胞肺癌病人和健康人群，血清miR-15b和miR-27b在非小細(xì)胞肺癌早期（Ⅰ期和Ⅱ期）診斷方面具有高敏感性、高特異性、陽性預(yù)測值和陰性預(yù)測值[5]，具有敏感、特異、廉價的特點。

血管生成是腫瘤發(fā)展過程中的重要事件，目前抗血管生成用于非小細(xì)胞肺癌病人的治療。對非小細(xì)胞肺癌病人的石蠟包埋組織通過芯片雜交篩選，實時熒光定量PCR和原位雜交方法驗證，最終得出miR-155是最令人感興趣的侯選標(biāo)志。在非小細(xì)胞肺癌中，與血管生成相關(guān)的miR-155表達(dá)顯著改變[6]，但其生物學(xué)功能和臨床相關(guān)性需要進(jìn)一步驗證。

miR-21在鉑類耐藥中表達(dá)明顯升高，可預(yù)測以鉑為佐劑的化療藥物的反應(yīng)和非小細(xì)胞肺癌病人的無病生存期，也可能是一個新的預(yù)示鉑類化療藥物療效的分子標(biāo)志。

2.2 miRNA與肝癌早期診斷、復(fù)發(fā)、預(yù)后判斷

雖然甲胎蛋白（AFP）是最常見的肝癌篩查生物標(biāo)記物，但有一半的病人漏檢。血清miR-15b和miR-130b聯(lián)合檢測對肝癌病人篩查具有重要的臨床意義，其敏感性和特異性分別為98.2%和91.5%，對低AFP（小于20 ng/mL）肝癌病人敏感性高達(dá)96.7%[7]，這對早期肝癌病人檢測具有重要的意義。

肝細(xì)胞癌（hepatocelluar carcinoma, HCC）中有4個miRNA過表達(dá)，這4個miRNA位于19號染色體的miRNA族（C19MC）中。同活檢確定的發(fā)育異常組織相比，早期HCC患者C19MC顯著過表達(dá)。C19MC miRNA高水平與較差的臨床病理特征一致，增加了腫瘤復(fù)發(fā)的風(fēng)險，縮短了總的存活時間。C19MC是肝癌的一個新的分子特征變化，也是較差預(yù)后的一個預(yù)測指標(biāo)。C19MC是肝癌治療中引人注目的侯選分子[8]。Han等研究105例HCC病人，6個表達(dá)變化顯著的microRNA（表達(dá)變化大于2倍，有miR-19a、miR-886-5p、miR-126、miR-223、miR-24 和miR-147）進(jìn)一步被熒光定量RT-PCR方法證實。最后該結(jié)果在獨立的50個病人的隊列研究中進(jìn)行證實，這些miRNA在肝癌復(fù)發(fā)中起著關(guān)鍵作用[9]。研究結(jié)果表明不同肝癌復(fù)發(fā)的病人miRNA表達(dá)模式，這6個miRNA標(biāo)志可能作為肝癌肝移植病人預(yù)后判斷的重要生物標(biāo)志。

2.3 miRNA與胃癌診斷、復(fù)發(fā)及預(yù)后

同健康人相比，胃癌病人血漿中miR-451和miR-486明顯增高[10], 術(shù)后血漿中明顯降低，miR-451和miR-486是胃癌篩查有用的生物標(biāo)志物。

Tsai等對72例胃癌標(biāo)本進(jìn)行分析，原發(fā)性胃癌組織標(biāo)本的胞外miR-196a表達(dá)水平明顯比癌旁組織高。胞外miR-196a水平與胞內(nèi)水平一致，胃癌病人及胃癌復(fù)發(fā)病人血清miR-196a明顯增加。miR-196a異位表達(dá)促進(jìn)了上皮細(xì)胞-間充質(zhì)細(xì)胞的轉(zhuǎn)變及轉(zhuǎn)化細(xì)胞的轉(zhuǎn)移/浸潤能力，表明其在胃癌形成中具有致癌潛力。所以，miR-196a在胃癌形成中起著致癌作用，可能是診斷和監(jiān)測胃癌是否復(fù)發(fā)的新標(biāo)志[11]。同時，miR-196a 過表達(dá)與胃腸道間質(zhì)瘤（gastrointestinal stromal tumors）的轉(zhuǎn)移、高風(fēng)險分級、低生存率有關(guān)[12]。miR-107在胃癌組織中表達(dá)明顯上升，它是通過與DICER1 mRNA靶向結(jié)合促進(jìn)腫瘤浸潤和轉(zhuǎn)移。miR-107表達(dá)與腫瘤浸潤的深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及腫瘤分期明顯相關(guān)。Kaplan-Meier生存曲線分析表明，miR-107高表達(dá)比低表達(dá)的病人總的存活率和無病生存率明顯較差。COX多變量分析表明，miR-107表達(dá)是胃癌病人總存活率和無病生存率的獨立的預(yù)后因子，miR-107是預(yù)測胃癌較差預(yù)后的有效生物標(biāo)記[13]。

2.4 miRNA與食道鱗狀細(xì)胞癌診斷與預(yù)后判斷

食道鱗狀細(xì)胞癌血清miR-21濃度明顯比健康人高（P＜0.001），術(shù)后比術(shù)前明顯降低（P=0.003）。而且，對化療藥物敏感的食道鱗狀細(xì)胞癌患者，血清miR-21水平明顯減少（P=0.003），而對化療藥物不敏感的食道鱗狀細(xì)胞癌患者血清miR-21水平?jīng)]有明顯的變化。故miR-21被認(rèn)為是診斷食道鱗狀細(xì)胞癌的新標(biāo)志，也可以當(dāng)作對化療藥物反應(yīng)的標(biāo)志[14]。miR-1322通過等位特異的形式下調(diào)食道腫瘤相關(guān)基因 2（esophageal cancer related gene 2， ECRG2）的表達(dá)：下調(diào)有等位基因TCA3位點的ECRG2基因表達(dá)（P＜0.01），而不下調(diào)有等位基因TCA4位點的ECRG2基因表達(dá)（P＞0.05）[15]，血清 miR-1322表達(dá)水平可作為食道鱗狀細(xì)胞癌病人潛在的診斷生物標(biāo)志。食道癌中miR-143和miR-145可以調(diào)節(jié)原癌基因Fascin Homolog 1（FSCN1）的表達(dá)，參與轉(zhuǎn)移的調(diào)節(jié)，說明miR-143和miR-145可作為食道癌早期診斷和預(yù)后判斷的生物標(biāo)志[16]。

2.5 miRNA與結(jié)直腸癌診斷、預(yù)后判斷、化療敏感性

miRNA對結(jié)直腸癌具有預(yù)測和治療的價值。結(jié)直腸癌患者miR-375表達(dá)下調(diào)，癌組織和癌旁組織中差異顯著（P＜0.001; paired t-test），但這種下調(diào)與腫瘤大小、腫瘤分級、pT分級、pN分級無關(guān)，所以miR-375也可能是結(jié)直腸癌診斷的潛在的生物標(biāo)志[17]。另一個研究表明結(jié)直腸癌患者糞便miR-143和miR-145表達(dá)水平明顯比正常組織低（P＜0.05, 2-ΔΔct均值），故糞便miRNA檢測可作為潛在的結(jié)直腸癌診斷或篩查的方法[18]。

同正常癌旁組織相比，miR-22在正常結(jié)腸癌組織中明顯低表達(dá)，這種低表達(dá)與肝臟轉(zhuǎn)移有關(guān)，Kaplan-Meier分析表明，miR-22低表達(dá)，總的存活率低。而且多變量分析表明，miR-22表達(dá)減少是總的存活率的獨立預(yù)測因子[7]，結(jié)果表明miR-22是結(jié)直腸癌一個新的、潛在的預(yù)后判斷指標(biāo)。

miR-93過表達(dá)抑制結(jié)直腸癌的增殖和轉(zhuǎn)移，但與侵襲無關(guān)，使細(xì)胞周期停留在G2期，不誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡和壞死。功能研究表明miR-93可抑制CCNB1蛋白表達(dá)，使細(xì)胞周期停留在G2期。而且miR-93表達(dá)抑制了細(xì)胞增殖相關(guān)基因如ERBB2、p21和VEGF的表達(dá)[19]，表明miR-93可以抑制腫瘤發(fā)生，減少結(jié)直腸癌的復(fù)發(fā)，對結(jié)直腸癌復(fù)發(fā)的預(yù)測有重要意義。

miR-143在結(jié)直腸癌中下調(diào)，影響結(jié)直腸癌細(xì)胞增殖、凋亡及對5-氟尿嘧啶的敏感性，同時miR-143與K-Ras原癌基因mRNA靶向結(jié)合[20]，這些都說明miR-143是一個新的結(jié)直腸癌預(yù)測分子和有應(yīng)用前景的藥物靶標(biāo)。結(jié)直腸癌病人miR-21表達(dá)明顯增高，利用實時熒光RT-PCR反應(yīng)檢測，敏感性為80%，特異性為88.2%，在癌組織中miR-21明顯高表達(dá)[21]，可作為潛在的候選生物標(biāo)志，可能是預(yù)測腫瘤是否對化療藥物敏感的、潛在的候選預(yù)測分子。

2.6 miRNA與腎細(xì)胞癌的早期診斷及預(yù)后判斷

腎細(xì)胞癌是成人腎臟中最常見的贅生物，目前沒有腎細(xì)胞癌病人復(fù)發(fā)的早期診斷、標(biāo)準(zhǔn)血清生物標(biāo)志物。一項研究檢測了30例腎細(xì)胞癌病人和健康人miRNA的差異表達(dá)：癌癥病人血清中19種miRNA表達(dá)上調(diào)，11種miRNA下調(diào)。腎細(xì)胞癌病人血清中miR-378表達(dá)增加（P=0.0003, AUC=0.71）， miR-451表達(dá)下降（P＜0.0001, AUC=0.77），血清 miR-378和miR-451聯(lián)合檢測可以鑒別腎細(xì)胞癌病人，敏感性達(dá)81%,特異性達(dá)83%（AUC=0.86）。所以，血清中循環(huán)miRNA可能是腎細(xì)胞癌早期診斷的很有應(yīng)用前景的標(biāo)志物[22]。

目前尚無腎細(xì)胞癌腎切除后復(fù)發(fā)風(fēng)險鑒定的生物標(biāo)志。利用TaqMan低通量（754個miRNA）熒光定量PCR檢測分析,再用熒光定量PCR進(jìn)行驗證，得知miR-127-3p、miR-145和miR-126與無轉(zhuǎn)移腎細(xì)胞癌無復(fù)發(fā)存活病人顯著相關(guān)[23]。

2.7 miRNA與乳腺癌的無創(chuàng)診斷及預(yù)后判斷

乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率占全身各種惡性腫瘤的7%～10%，在女性僅次于子宮癌。乳腺癌的發(fā)病常與遺傳有關(guān)，年齡在40～60歲之間，絕經(jīng)期前后的婦女發(fā)病率較高。嚴(yán)重影響女性身心健康甚至危及生命。通過基因組范圍的高通量測序結(jié)合驗證分析發(fā)現(xiàn)miR-222在乳腺癌病人血清中表達(dá)顯著增加（P＜0.05），可能是一個診斷乳腺癌的生物標(biāo)志物。miR-BS1是已被鑒定和證實的乳腺癌診斷標(biāo)志，其作用的靶基因FOXO3和K-ras正是乳腺癌相關(guān)的信號途徑中的分子[24]。miR-16, miR-25,miR-222和miR-324-3p在乳腺癌組織和癌旁組織中表達(dá)差異明顯，血清中這4種miRNA聯(lián)合檢測在乳腺癌早期敏感性為0.917，特異性為0.896，中晚期敏感性為0.921，特異性為0.934，所以miR-16, miR-25,miR-222和miR-324-3p聯(lián)合檢測可作為乳腺癌無創(chuàng)檢測的指標(biāo)[25]。

miR-21是已知的原癌基因，miR-21高表達(dá)與乳腺切除，腫瘤體積增大，分期增高，分級增加，雌激素受體（estrogen receptor，ER）陰性，人表皮生長因子受體2（human epidermal growth factor receptor 2，HER2）陽性，HER2陽性乳腺癌亞型，高Ki-67表達(dá)及死亡有關(guān)。多變量分析表明，總存活率的預(yù)后因子是ER和miR-21。miR-21在乳腺癌中高表達(dá)，可作為乳腺癌的原癌基因和生物標(biāo)志，與其他預(yù)后因子和存活指標(biāo)明顯相關(guān)[26]。

三陰性乳腺癌（triple-negative breast cancer,TNBC）是指ER、孕激素受體（progestogerone receptor,PR）和HER2均陰性的一種特殊類型乳腺癌，年輕女性具有高發(fā)病率，預(yù)后極差。TNBC約占所有乳腺癌患者的15%，其許多生物學(xué)特性與基底細(xì)胞樣型乳腺癌相似，但兩者之間存在某些基因表達(dá)譜和免疫表型上的差異，因此亦不能完全等同。TNBC因缺乏內(nèi)分泌及抗HER2治療的靶點，目前尚無針對性的標(biāo)準(zhǔn)治療方案。miR-34b表達(dá)與TNBC患者的無病生存率和總生存率呈負(fù)相關(guān)，是新的、有應(yīng)用前景的預(yù)后判斷標(biāo)志物[27]。miR-210在三陰乳腺癌病人中低表達(dá)時，無病生存期和總生存期會更長（P值分別為0.02和0.05）。雖然三陰乳腺癌病人預(yù)后較差，但COX單變量和多變量分析表明，miR-210可以作為一個獨立的預(yù)后因子，高表達(dá)比低表達(dá)病人預(yù)后更差。所以，miR-210表達(dá)水平可能是臨床有用的預(yù)后因子，對三陰乳腺癌病人尤其是無瘤患者輔助治療決策起著關(guān)鍵作用[28]。

2.8 miRNA與卵巢癌的早期診斷

卵巢癌是女性生殖器官常見的腫瘤之一，發(fā)病率僅次于子宮頸癌和子宮體癌而列居第三位。miR-148b在卵巢癌病人中的表達(dá)率高達(dá)92.21%（71/77），這種高表達(dá)與卵巢癌病人的臨床病理特征無關(guān)[29]，所以miR-148b是早期卵巢癌的重要標(biāo)志，可作為有效的臨床診斷生物標(biāo)志。Pleiotrophin （PTN）是發(fā)育調(diào)節(jié)生長因子，廣泛分布在不同的正常組織和癌組織中，在不同物種中高度保守，大腦、心臟、輸卵管中PTN mRNA表達(dá)豐富。研究發(fā)現(xiàn)miR-499和miR-1709通過與PTN 3'-UTR結(jié)合從而影響基因表達(dá)，是通過轉(zhuǎn)錄后基因表達(dá)調(diào)控模式進(jìn)行調(diào)節(jié)[30]。PTN是卵巢上皮癌的重要生物標(biāo)志，可用于疾病的早期診斷和監(jiān)測治療效果。

2.9 miRNA與其他腫瘤的早期診斷與預(yù)后判斷

通過定量RT-PCR分析miRNA的表達(dá)及免疫組化分析相應(yīng)靶蛋白的表達(dá)，證明miR-224上調(diào)可表明甲狀腺髓樣癌病人有好的預(yù)后[31]，是甲狀腺髓樣癌病人較好的預(yù)后判斷分子標(biāo)記。miR-181b是慢性淋巴細(xì)胞性白血病疾病進(jìn)程有應(yīng)用前景的標(biāo)志物[32]。通過對82例惡性膠質(zhì)瘤病人進(jìn)行全基因組深度測序分析，miR-181d可作為惡性膠質(zhì)瘤發(fā)生的預(yù)測生物標(biāo)志，其作用可能是通過轉(zhuǎn)錄后下調(diào)甲基-鳥嘌呤-甲基轉(zhuǎn)移酶（methyl-guanine-methyl-transferase）基因的表達(dá)[33]。miR-103在惡性間質(zhì)瘤中表達(dá)比正常人群和石棉暴露對照組都高，作為區(qū)分惡性間質(zhì)瘤和石棉暴露對照組時，其敏感性和特異性分別為83%和71%。作為區(qū)分惡性間質(zhì)瘤和正常對照組時，其敏感性和特異性分別為78%和76%[34]。

黑素瘤的發(fā)病率增長迅速，皮膚活檢的組織學(xué)檢查是黑素瘤診斷和預(yù)后判斷的金標(biāo)準(zhǔn)。良性和惡性病變在形態(tài)學(xué)上的重疊使得診斷變得更加復(fù)雜，腫瘤厚度并非準(zhǔn)確的預(yù)后預(yù)測因子。通過芯片分析和定量RT-PCR驗證獲得一系列差異表達(dá)的miRNA,在良性的痣和原發(fā)性或轉(zhuǎn)移性黑色素瘤中，找到20個差異表達(dá)顯著的miRNA，大多數(shù)在黑色素瘤中表達(dá)下調(diào)，miR-203和miR-205在原發(fā)性和轉(zhuǎn)移性黑素瘤中表達(dá)有顯著差異。體外功能分析實驗中，miR-200c和miR-205抑制了不依賴錨地的集落形成，miR-211過表達(dá)既抑制不依賴錨地的集落形成，也抑制腫瘤浸潤[35]。這些指標(biāo)可作為黑色素瘤的有用診斷或預(yù)后指標(biāo)，miR-200c、miR-205和miR-211可作為黑色素瘤抑制子。

前列腺癌患者尿樣中miR-107和miR-574-3p濃度比正常人增加3倍以上，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。通過分析前列腺癌病人不同體液miRNA濃度變化，其中循環(huán)miRNA有可能作為前列腺癌診斷、分期和預(yù)測的標(biāo)志物[36]。越來越多的證據(jù)表明子宮內(nèi)膜癌中存在miRNA表達(dá)異常。miR-205是子宮內(nèi)膜癌的一個獨特的潛在的預(yù)后標(biāo)志[37]。在子宮內(nèi)膜癌預(yù)后判斷中具有重要意義。

多種植物類化療藥如表沒食子兒茶素、姜黃素、異黃酮、吲哚-3-甲醇、白黎蘆醇及異硫氰酸鹽可以調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞中多種miRNA的表達(dá)，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞生長終止或使腫瘤細(xì)胞對化療藥物更敏感[38]。

3 結(jié)語

miRNA作為一種新近發(fā)現(xiàn)的調(diào)控型小分子RNA，其在生物體內(nèi)起著十分重要的作用。近年來研究進(jìn)展非常快速，在miRNA的生物合成過程中，還有很多疑問尚未解決，如miRNA基因在轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控，它本身的表達(dá)又由什么來決定呢?

從外周血中鑒定特異的miRNA有望成為腫瘤無創(chuàng)診斷或預(yù)后判斷、潛在的生物標(biāo)志。最近，有報道檢測到了血清/血漿中存在循環(huán)的胞外miRNA，盡管血清/血漿中存在RNase，但miRNA在血清、血漿甚至尿液中都能穩(wěn)定存在。與mRNA不同，miRNA在體內(nèi)存在時間長，在體外能穩(wěn)定存在，這些特點使得檢測石蠟包埋組織樣品的miRNA亦成為可能。miRNA是細(xì)胞中合成，在血液中能被探測到，說明這些miRNA可能是要通過血液循環(huán)傳到受體細(xì)胞，在受體細(xì)胞中發(fā)揮調(diào)節(jié)靶基因翻譯的作用[39]。為何循環(huán)miRNA相當(dāng)穩(wěn)定？一種解釋就是miRNA存在于脂質(zhì)或脂蛋白復(fù)合物如外來體中[40]或微囊泡中[41]。循環(huán)miRNA分子在心血管系統(tǒng)中具有新的令人振奮的功能可能是它們具有旁分泌信號分子的潛力[42]，但其作為旁分泌信號分子的功能仍需進(jìn)一步驗證。

miRNA是有效的生物分子標(biāo)志，為腫瘤的早期診斷、分子分型提供了一類新的有效靶標(biāo)，也可為腫瘤的侵襲性、轉(zhuǎn)移性和對不同治療方案的反應(yīng)性進(jìn)行比較判斷。在轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)中有著很好的應(yīng)用前景，我們必須盡快建立規(guī)范、標(biāo)準(zhǔn)化的臨床檢測方法，并盡快完成臨床應(yīng)用驗證。相信在不久的將來，隨著研究的深入，miRNA生物標(biāo)志將會逐漸運用到腫瘤臨床診斷中，也將進(jìn)一步提高腫瘤的診斷和治療水平。

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